인간 폐 질환의 상태를 본뜬 모델의 사용은 특정 질환의 병태 생리학 및 / 또는 병인을 연구 및 치료 적 개입을 개발에 중요하다. 여기에 직접 마우스의 폐에 외인성 물질을 제공 할 수있는 비 침습적 인 기관 내 삽관 방법이 제시된다.
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이 논문에서
요약
초록
인간 폐 질환의 상태를 본뜬 모델의 사용은 특정 질환의 병태 생리학 및 / 또는 병인을 연구 및 치료 적 개입을 개발에 중요하다. 함께 유전 정보의 광대 한 양의 녹아웃 및 유전자 변형 파생 상품의 증가 가용성, 마우스는 폐 질환의 병리 생리학의 기초가되는 분자 메커니즘을 연구하는 가장 좋은 모델 중 하나를 제공합니다. 흡입, 비강 내 점적, 기관 내 점안 및 기관 내 삽관 마우스 폐에 그 자료를 관리 할 수있는 연구자들에 의해 가장 널리 사용되는 기술이다. 연구의 목적에 따라 각각의 기술에 대한 장점과 단점이 있습니다. 여기에 직접 마우스의 폐에 외인성 물질을 제공 할 수있는 비 침습적 인 기관 내 삽관 방법이 제시된다. 이 기술은 폐 섬유증을 연구하는 모델로 마우스의 폐에 블레오 마이신을 관리하기 위해 적용되었다. </ P>
서론
폐는 많은 파괴적인 질병은 일반적으로 진단 기관이다. 그 중에서도, 폐암은 남성과 여성 모두에서 두 번째로 가장 암 진단, 암 사망의 가장 흔한 원인이다. 또한 폐기종과 만성 기관지염으로 알려진 만성 폐쇄성 폐 질환은 매우 심각한 질환과 미국에서 사망의 세 번째 주요 원인이다. 2011 년, 그것은 25900000 미국인이 18 세 미만의 710 만 어린이를 포함, 천식을 한 것으로 추정되었다. 천식은 15 일 (미국 폐 협회, 세 미만의 어린이들에게 입원의 세 번째 주요 원인이다 http://www.lung.org ). 이러한 파괴적인 질병과 그 기본 메커니즘의 병태 생리 및 / 또는 원인을 연구하기 위해, 정확한 모델의 사용은 폐 관심을 다양한 재료의 편리하고 비 침습적 인 관리와 함께 중요합니다. 쥐에게 최고의 모델 중 하나를 제공때문에 녹아웃 및 형질 전환 마우스 및 사용 가능한 유전 정보의 광대 한 양의 증가 가용성의 병리 및 폐 질환의 생리의 기초가되는 분자 메커니즘을 연구.
다양한 방법 흡입, 비강 내 점적, 기관 내 점안 및 기관 내 삽관 1-4를 포함하여 마우스의 폐에 그 자료를 제공하기 위해 다른 설정에서 수사관들....
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프로토콜
다음 프로토콜은 마우스의 폐에 그 자료를 제공 할 수있는 비 침습적, 간단하고 빠른 방법을 설명합니다. 이 절차는 국립 암 연구소 동물 관리 및 사용위원회에 의해 승인되었습니다.
1. 마취
- 먼저, 케타민 (ketamine)과 자일 라진 (각각 100 ㎎ / kg 체중 및 10 ㎎ / kg 체중)의 혼합물을 사용하여 마우스를 마취. 이 ACUC 마취 및 복용량을 권장합니다. 이 금액으로, 마우스는 적어도 ~ 20 분에 대한 의식이 있습니다.
- 마취 동안 눈의 건조를 방지하기 위하여 마우스 눈 수의사 연고를 적용한다.
- 몇 분 후, 의식을 확인하기 위해 마우스의 다리를 꼬집어. 일단 의식 확인, ~ 60 °로 각도 삽관 스탠드에 마우스를 놓고 받침대의 상단에있는 작은 고무 밴드를 통해 상부 앞니를 후킹하여 제자리에 고정.
2. 기관 내 삽관
- 부드럽게 Q-팁을 사용하여 한쪽으로 마우스의 혀를 철회.
- BioLITE 삽관 조명 시스템을 사용하는 경우 후두가 광섬유 라이트 가이드의 도움으로 가시화 될 때까지주의 깊게 삽관 시스템을 삽입합니다.
- 후두개와 조각으로 부서져 연골이 가시화....
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결과
처음에는 녹색으로 염색 한 솔루션은 연습을 위해 마우스를 삽관하는 데 사용되었다. 폐는 색이 폐 (그림 2)에 배포 된 방법을 균일하게 조사 할 삽관 후 즉시 절제했다. 이 기술은 C57BL / 6 마우스를 이용하여 블레오 마이신 유발 폐 섬유증을 연구하기 위해 적용되었다. 마우스가 intratracheally 제어 나중에 부검 삼주로 블레오 마이신 또는 식염수 1.2 U / kg으로 삽관 때, 마우스는 조직학 및 증가 된 하이드 록시 프롤린 내용 (그림 3)에 의해 지원, 폐 전체에 블레오 마이신 유도 성 섬유증을 개발했다. 손상된 영역은 20 배 목표 만든 폐 이미지와 121 점의 격자 격자를 사용하여 평가 하였다. 섬유 분야 떨어지는 교차로 (점)의 수는 총 (121) 점의 비율로 계산 표현했다. 따라서 계산 손상된 부위의 비율은 관리 블레오 마이신의 양 (그림 4)에 비례했다.
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토론
여기에 설명 된 기관 내 삽관은 균등하게 마우스의 폐에 그 자료를 제공 할 수있는 간단하면서도 우수한 비 침습적 인 방법입니다. 이 방법은 폐의 생리 및 / 또는 병리에서 관리 물질의 효과 및 / 또는 역할의 연구를 할 수 있습니다. 관리되는 재료는 사이토 카인, 또는 생체 이물 화학 / 의약품, 발암 물질, 오염 물질, 알레르기, 또는 다양한 인간의 질병 6-10 공부를위한 모델을 나타낼 수있는 다양한 폐 상태가 발생할 바이러스와 같은 이물 등의 내인성 분자가 될 수 있습니다. 이 기술은 또한 항상성, 생리학, 병리 및 / 또는 폐의 발암에 이러한 유전자의 역할을 연구하기 위하여기도 상피 세포에 대한 관심의 유전자의 과발현 또는 결실을 도입하는 재조합 아데노 바이러스 또는 렌티 바이러스와 함께 사용될 수있다. 유전자의 중단은 일시적에서의 floxed 유전자를 방해하는 상피 세포에 Cre 호텔 재조합 효소를 발현에 의해 달성 될 수있다상피 세포 (11)의 terest.
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공개 사항
저자는 더 경쟁 재정적 이익이 없다는 것을 선언합니다.
감사의 글
이 작품은 국립 암 연구소 암 연구 센터의 교내 연구 프로그램에 의해 지원되었다.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| KetaVed | Vedco | 케타민 | |
| AnaSed 주사 20 mg | LLOYD | Xylazine | |
| BioLite 스탠드 | Braintree Scientific | RIS100 | 마우스 용 |
| BioLite 삽관 조명 시스템 | Braintree Scientific | BIO MI-KIT | 마우스 |
| 용 22 G, 1 인치 iv 카테터 | Terumo | SR-OX2225CA | 생쥐 <강한>이하 30 g. 카테터는 삽관 조명 시스템을 사용하지 않는 경우에만 사용됩니다. |
| 20 G, 1 인치 i.v. 카테터 | Terumo | SR-OX2025CA | 생쥐용 <강한>오버 30 g. 카테터는 삽관 조명 시스템을 사용하지 않는 경우에만 사용됩니다. |
참고문헌
- Das, S., Macdonald, K., Chang, H. Y., Mitzner, W. A simple method of mouse lung intubation. J. Vis. Exp. (73), e50318(2013).
- Miller, M. A., et al. Visualization of murine intranasal dosing efficiency using luminescent Francisella tularensis....
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