호기성 조건에서 박테리아의 부착 및 침입 조사를위한 세포 배양 분석을 수행하면의 일반적으로 대표성이다 생체 내 환경을 제공합니다. 수직 확산 챔버 모델은 인간의 병원체의 상호 작용을 연구 할 수 있습니다 캄 필로 박터 속 jejuni 더 아래에 장 상피 세포와 생체 내과 같은 향상된 세균 침입의 결과로.
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이 논문에서
요약
초록
숙주 세포와 세균 병원균의 상호 작용은 체외 세포 배양 방법에 사용 광범위하게 연구되고있다. 이러한 세포 배양 분석은 호기성 조건에서 수행됩니다 그러나, 이러한 체외 모델에서 정확하게 호스트 병원체 상호 작용이 일어날 수있는 생체 환경을 대표하지 않을 수 있습니다. 우리는 다른 매체와 가스 조건에서 세균과 숙주 세포의 배양을 허용 감염의 체외 모델을 개발했습니다. 수직 확산 회의소 (VDC)의 모델은 박테리아가 매우 낮은 산소 반면 조직의 조건이 될 사람의 대장의 조건 혈류의 산소 공급됩니다를 모방. VDC에 Snapwell 삽입에서 재배 편광 장 상피 세포 (IEC) 단일 층을 배치하면 별도의 정점과 기저 외측 구획을 만듭니다. 기저 외측 구획, 세포 배양 배지로 채워 밀봉 산소 w로 관류됩니다혀끝 함을 hilst는 국물로 가득 차 있습니다, 계속 열려있는 호기성 (microaerobic) 조건에서 배양 하였다. Caco-2와 T84 두 IECS는 세포의 생존이나 단층 무결성에 대한 명백한 해로운 영향없이 이러한 조건에서 VDC 유지 될 수 있습니다. Coculturing 실험은 서로 다른 C.으로 수행 혀끝의 구획 호기성 (microaerobic) 조건 속 jejuni 야생형 균주와 VDC 모델의 다른 IEC 라인 재현성 호기성 배양 조건에 비해 상호 작용의 수 (약 10 배) 증가와 세포 내 (약 100 배) 박테리아의 원인 1. VDC 모델에서 만든 환경이 더 가깝게 C.에 의해 발생하는 환경을 모방 그리고 인간의 창자에 속 jejuni는 더 밀접하게 생체 내 현실 모방하는 조건 하에서 생체 감염 분석의 수행의 중요성을 강조한다. 우리는 VDC 모델의 사용은 상호 작용의 새로운 해석 내기 있도록 제안세균성 병원체와 숙주 세포를 싸우는.
서론
숙주 세포와 세균 병원균의 상호 작용은 체외 세포 배양 방법에 사용 광범위하게 연구되고있다. 이러한 세포 배양 분석, 숙주 세포에 세균 부착, 숙주 세포 수용체 경로와 숙주 세포의 세균 침입 신호 숙주 세포의 식별을 사용하면 모든 많은 중요한 관찰의 결과로, 세부에서 공부하고 있습니다. 그러나 이러한 세포 배양 분석은 생체 환경에서 대표되지 않을 수 있습니다 호기성 조건에서 수행됩니다. 위장 감염을 연구하는 데 체외 모델에서의 주요 제한은 높은 산소 수준을 포함 배양 조건은 일반적으로 진핵 세포의 생존을 선호한다는 것입니다. 그러나 창자 루멘의 조건이 거의 혐기성 될 것입니다. 매우 낮은 산소 환경에서의 장내 병원체는 그의 표정 변화 호기성 조건 하에서 2 독성 유전자를 표현한다. 같은 데이터는 표준 셀 문화 모델 M을 사용하여 얻은바깥 호스트 세포와 세균 상호 작용의 부정확 한 표시를 제공합니다.
캄 필로 박터 속 jejuni는 가벼운 설사에서 심한 염증성 장염에 이르기까지 다양하는 증상, 세계적으로 세균성 급성 위장염의 주요 원인이되는 에이전트입니다. C. 대부분의 단순한 위장염에 속 jejuni 감염 결....
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프로토콜
1. 특수 0.4 μm의 필터에 IEC 단층의 성장
- Dulbecco의 수정 된 필수 미디어 문화 Caco-2 세포 (DMEM)의 10 % (v / v)의 송아지 태아 혈청, 100 U / ML 페니실린, 100 ㎍ / ㎖ 스트렙토 마이신, 1 % (v / v)의에 불필요한 아미노산 보충 37 표준 조직 문화 인큐베이터 ° 5 % CO 2, 95 %의 공기 C. 씨앗 4 × 10 5 Caco-2 0.4 μm의 당 IECS 필터링 21 일 동안 양극화로 성장 매체에게 2-3 일마다 변경.
- 볼트 옴 저항 측정기를 사용하여 단층의 편광 상태를 확인하는 봉사자를 측정한다. 우리의 연구에서 21 일의 봉사자는 Caco-2이 0.4 μm의 필터에서 자란 세포는 700 ~ 800 Ωcm 2입니다.
2. C.의 준비 속 jejuni와 Coculturing 분석 실험에 대한 세균의 중간
- VDC의 coculturing 분석의 원하는 시작 지점 이전에 24 시간은, C의 신선한 혈액 한천 플레이트를 준비. 37 속 jejuni와 부화 ° C 변수의 분위기 배양기에서 호기성 (microae....
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결과
Coculturing 실험 C.으로 수행 jejuni와 야생형 균주 및 치근단 구획 호기성 (microaerobic) 조건 VDC 모델 IECS는 시간에 호기성 배양 조건에 비해 상호 작용의 수 증가 (약 10 배)과 세포 내 (약 100 배) 박테리아를 증명하고있다 의존적으로 1. 이 관찰은 두 개의 서로 다른 C를 사용하여 재현했다 속 jejuni는 야생형 균주 (11168H 및 81-176)와 두 개의 서로 다른 IEC 라인 (Caco-2 및 T84), VDC 모델 1의 유효성을 강조.
여기에 제시된 대표적인 결과 C.의 수를 비교하다 속 jejuni는 혀끝 컴에서 호기성 (microaerobic) 조건 CO 2 배양기 (그림 2A와 B) 또는 VDC 모델에서 표준 세포 배양 분석 조건 .......
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토론
숙주 세포와 세균 병원균의 상호 작용을 연구하는 체외 세포 배양 방법에서의 사용은 널리 많은 연구 실험실에서 근무하는 기술입니다. 이러한 세포 배양 분석은 호기성 조건에서 수행됩니다 그러나, 이러한 체외 모델에서 정확하게 호스트 병원체 상호 작용이 일어날 수있는 생체 환경을 대표하지 않을 수 있습니다. 널리 생체 감염 모델에서 사용이 호기성 C. 연구를 위해 특히 부적절한 속 jejuni는 통성 혐기성있는 다른 장내 병원균에 비해. C.에 의해 인간의 IECS 침해의 메커니즘에 관한 문헌에서 상당한 혼란이있다 속 jejuni 4,5. 우리는이 연구에서 사용되는 체외 모델은 정확하게 생체 상황을 반영하지 않기 때문에 침략의 메커니즘이 그렇게 제대로 이해하는 이유는 것이 좋습니다. 수준은 표준 세포 배양 분석을 사용하여C.의
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공개 사항
우리는 공개 아무것도 없어.
감사의 글
도미닉 밀스는 블룸 즈 버리 대학 박사 과정 재학 (2,007에서 2,010 사이)에 의해 지원되었다. 저자는 VDC 모델을 개발하고 그들의 도움을 Ozan Gundogdu 및 아브디 엘미 모두에게 감사의 말씀을 전합니다.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| Snapwell 인서트와 함께 사용하기 위한 특수 수직 확산 시스템 | Harvard Apparatus | 66-0001 | 매니폴드 및 6개의 Snapwell 챔버 |
| 캡 | Harvard Apparatus | 66-0020 | |
| O-ring | Harvard Apparatus | 66-0007 | |
| 클램프 | Harvard Apparatus | 66-0012 | |
| Snapwell 필터(기공 크기 0.4 μ m) | 코닝 Costar | 3407 | |
| 밀리셀 ERS-2 볼트-옴 저항 측정기 | Millipore | MERS00002 | |
| WPA 광파 II 분광 광도계 | Biochrom | 80-3003-72 |
참고문헌
- Mills, D. C., et al. Increase in Campylobacter jejuni invasion of intestinal epithelial cells under low-oxygen coculture conditions that reflect the in vivo environment. Infect. Immun. 80, 1690-1698 (2012).
- Marteyn, B., et al.
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