방법 논문

수정 커프 기술을 사용하여 쥐의 자궁 심장 이식 모델

DOI:

10.3791/50753

⸱

2014년 10월 12일

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Center of Operative Medicine, Department of Visceral, Transplant and Thoracic Surgery, Innsbruck Medical University, 2Department of Plastic and Reconstructive Surgery, Johns Hopkins University School of Medicine

* These authors contributed equally

이 논문에서

요약

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뮤린 자궁 심장 이식 모델은, 면역뿐만 아니라 허혈 재관류 손상 연구에 매우 적합하다. 우리는 비 봉합 커프 기술을 사용하여 절차를 수정이 방법으로 1,000 개 이상의 성공적인 이식을 수행 하였다.

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초록

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마우스 모델은 단일 클론 항체의 다양한 이후 연구에 특별한 관심의 상업적 근친 정의 녹아웃 균주의 생체 내 (in vivo) 연구 기계적인 수행 할 수 있습니다. 봉합 기술을 사용하여 심장 이식 모델을 처음 성공적으로 쥐에서 개발 된 반면, 동일하게 널리 사용되는 쥐의 동등한로 번역이 미세 절차의 기술적 복잡성으로 인해 실현되지 않았습니다. 대조적으로, 또한, 쥐의 초기 개발 비 봉합 커프 기술들이 성공적으로 생쥐 1-3에서 사용하기에 적합 하였다. 혈관 재 형성을위한이 기술은 폴리에틸렌 커프 위에받는 용기 everting 개의 주요 단계 I)을 포함한다; II) 이전 everted받는 용기를 통해 기증자 용기를 당기고 원주 넥타이와 장소에 들고. 이것은 내피 층, 짧은 동작 시간 및 매우 높은 개존율 (4)의 연속성을 보장한다. t는 "> 혈관 문합을 위해이 기술을 사용하여 우리는 경동맥 유입 동맥를 들어. 95 %의 성공률로 1,000 명 이상의 자궁 심장 이식을 수행 근위 대동맥 궁은​​ 이식 된 심장의 역행 관류의 결과로 문합 하였다. 정맥 배수 이식의 폐동맥받는 사람 (5)의 외부 경정맥과 문합 하였다.

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서론

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심장 이식은 다른 말기 심장 질환으로 고생하고있는 환자들을위한 선택의 치료를 나타냅니다. 수술 기법, 감염의 더 효과적인 예방 및 새로운 면역 억제 요법의 발전은 장기 이식 6에서 현저하게 향상된 결과를 초래. 그러나, 장기 이식 생존율은 지난 7 년 동안 엄격하게 개선되지 않았습니다. 이식 동맥 경화에 의해 특징 만성 거부, 장기 이식 생존 8-11에 큰 장애물이되고 있습니다.

생쥐 이소성 심장 이식 모델은 급성 동안 면역 학적 메커니즘의 분석을위한 중요하고 유효한 도구뿐만 아니라 만성 거부 반응 12-15을 제공합니다.

현재까지 가장 흔한 이식 모델은 봉합 기술을 사용하여 복부 마우스 심장 이식은 여전히​​있다. 기증자 심장의 대동맥이에 문합된다bdominal 대동맥과 폐동맥받는 사람의 하대 정맥에 문합된다. 봉합 모델 미세 어려움의 대부분은 16, 17을 봉합 용기의 작은 크기에 기초한다.

봉합 모델 달리 심장 외부 경정맥은 폐동맥 및 경동맥 기증자의 대동맥에 문합되는 수신자의 목 영역에 배치된다.

커프 기술을 사용하여 자궁 심장 이식 모델의 개발의 이론적 근거는이 모델의 광범위한 응용을 허용 기본적인 미세 기술로 높은 성공률을 달성 할 수 있도록 동물 모델을 가지고 있었다. 이 방법의 주요 이점은 봉합 모델 (18)에 비해 출혈 및 혈전증과 같은 합병증을 관련 현저히 적게 발생 문합이다.

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프로토콜

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동물은 장벽 무균 시설에서 보관되어 있습니다. 모든 동물은 국가에 의해 의료 연구를위한 국가 사회 "및"국립 과학 아카데미에 의해 제조 실험 동물 "의 관리 및 사용을위한 설명서에 의해 공식화 및 출판"실험 동물 관리의 주체 "을 준수하여 인간의 서비스를받을 수 보건원 (NIH 공개 NO. 86-23은 1985 년 개정). 모든 실험은 교육 과학 문화의 오스트리아 교육부에 의해 승인됩니다.

1받는 사람 준비

  1. 자일 라진 (xylazine) (5 ㎎ / ㎏ 체중) 및 케타민 (100 ㎎ / ㎏ 체중)의 IM 주사받는 동물을 마취.
  2. 동물의 측면 자궁 지역의 모든 머리를 제거하고 수술 필드에게 chlorhexdine를 사용하여 세 번 닦습니다.
  3. 수술 필드에서 누운 자세에서 마우스를 놓습니다.
  4. 다음 경정맥 포함에서 피부 절개를오른쪽 아랫 부리에 ision.
  5. 그 후, 퉁명스럽게 오른쪽 외부 경정맥 (EJV)을 동원 합자 사이의 가지를 나눕니다.
  6. 그런 다음 커프 몸 근위 그루터기 에버트하기에 충분한 길이를 떠날 확인하는 합자 사이의 EJV를 나눕니다.
  7. 다음 악하선의 오른쪽 엽을 제거합니다.
  8. 정맥 문합를 들어 폴리에틸렌 커프를 통해 EJV의 기단부를 통과하고 마이크로 클램프 커프의 핸들에서 문제를 해결할.
  9. , 용기의 끝 부분에있는 합자를 제거 커프를 통해 루멘 에버트와 8-0 실크 루프 (그림 1a)로 고정한다.
  10. 그 후 경동맥에 액세스 할 양극성 소작과 오른쪽 흉쇄 근육을 가로로 쪼개다.
  11. 다음 경동맥을 동원하고 합자 사이의 혈관을 잘라.
  12. 다음 경동맥을 동원하고 합자 사이의 혈관을 잘라.
  13. DIS 합격탈의 팔목을 통해 용기의 끝은 동맥 클램프로 고정한다.
  14. 용기의 단부에 봉합사를 제거하고, 혈관을 사용 dilatators 루멘 넓히다. 다음에, EJV 유사하게, 커프 위에 동맥 에버트 및 8-0 실크 루프로 고정한다.

2 심장 조달

  1. 자일 라진 (xylazine) (5 ㎎ / ㎏ 체중) 및 케타민 (100 ㎎ / ㎏ 체중)의 IM 주사 공여 마우스를 마취. 그리고 동물의 복부의 모든 머리를 제거합니다. chlorhexdine를 사용하여 수술 필드에 세 시간을 스크럽. 수술 필드에서 앙와위에서 마우스 전술 된 바와 같이 다음 장소.
  2. 중간 선 복부 절개에 따라, 하대 정맥 (IVC)를 노출하기 위해 왼쪽에 Q-팁을 내장을 철회.
  3. 헤파린에 대한 IVC에 4 헤파린 나트륨 - 솔루션 : 1의 400 μl를 주입한다.
  4. ACC을 얻을 수 cranially를 통해 전방 흉벽을 개흉술을 수행하고 배심장에 ESS.
  5. 다음에, 흉선을 제거한 좌우 우수한 대정맥의 절개를 배출하게.
  6. 그 후, 완두 분기의 수준에서 27 G 주사기와 대동맥 삽관에 의해 4 섭씨 HTK 용액과 역행 방식으로 마음을 관류.
  7. 8-0 실크 열등한 우수한 대정 맥을 결찰과 합자로 원심을 나눕니다.
  8. 다음 이전 삽관의 수준에서 대동맥 궁을 분할하고 폐동맥을 무료로 해부하고 가능한 한 멀리 원심을 나눕니다.
  9. 그 후, 대량의 결찰 폐 혈관을 묶고 합자로 원심을 나눕니다.
  10. 마지막으로, 공여 부위에서 심장을 제거하고 4 ° 섭씨 HTK 용액 (그림 1b)에 보관합니다.

3 주입

  1. 거꾸로 위치에받는 사람의 목 지역에서 심장 이식을 배치 (그림 1C ).
  2. 다음받는 사람의 정맥 커프 구조를 통해 심장의 폐동맥을 끌어와 실크 루프 (그림 1D)로 고정한다.
  3. 이식편의 대동맥과 같은 방식 (그림 1E)에서받는 동물의 everted 동맥 사이의 문합을 수행합니다.
  4. 이어서, 동맥 클램프이어서 제 정맥 클램프를 제거. 심장 재관류하고 1 ~ 2 분 이내에 치기 시작합니다. 재관류 동안 따뜻한 (35 ° 섭씨) 식염수로 마음을 적 십니다.
  5. 마지막으로 6-0 연속 봉합 (그림 1E)와 수술 상처를 닫습니다.

(4) 수술 후 관리, 엔드 포인트

  1. 유체 교체 수술 후 0.3 ml의 생리 식염수의 IP를 부여합니다.
  2. 마취에서 각성 할 때까지 가열 램프 아래에있는 동물을 놓습니다.
  3. 깨어 나면, 그들은 물과식이를받을 주거 시설에 동물을 반환합니다.
  4. MI하려면제 7 수술 후 일 동안 nimize 통증 carprofen (4 ㎎ / kg 매 12 시간의 피하 (SC)를 관리 할 수​​ 있습니다. 또한, 오일에 바로 수술 후) Buprenorphin마다 12 시간을 (0.1 ㎎ / ㎏을 제공합니다.
  5. 적절한 영양 섭취에 대해 평가하기 위해 각받는 사람 동물 주간의 무게 (g)을 얻었다. 이상 ~ 15 %의 체중 감소의 증거가 수술 최신 무관심 마비 또는 매우 구부러진 뒤쪽에 비해 중량이있는 경우, 임상 적 종점에 도달하기 전에 단말기 흡입 이소 플루 란을 이용하여 동물을 희생. 심장이 거부 된 후에 또한 동물을 희생.

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결과

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그림 2는 완전히 MHC 일치하지 않는 C57BL / 6받는 사람에 이식 후 BALB / C의 기증자로부터 심장 이식을 대표하는 생존 데이터를 보여줍니다. 마음은 이식 후 일 7 ± 1에 거부됩니다. 이식 된 동종의 손가락 촉진은 동종 이식 거부 반응의 시간 의존적 과정을 감지하는 중요한 방법이다. 우리의 시리즈에서 수행되는 모든 동계 심장 이식 무기한 생존 (> 1백50일).

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그림 1 : 수술 중 사진받는 사람 준비하는 동안 () 수술 필드 조달 후 (b)의 심장 이식 (C) 거꾸로 위치에받는 사람의 목 영역에 배치 심장 이식 ...

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토론

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혈관 이식의 거부는 충분히 체외 모델에서 사용하여 평가 될 수있는 다른 단계의 과다를 수반한다. 받는 사람의 감작 항원 처리 이차 림프 기관에서뿐만 아니라 면역 능력 세포의 분화 및 증식 같은 현상은 생체 내에서 특성화 수 있습니다. 동물 모델함으로써 중개 연구 (16)을위한 이상적인 도구입니다. 마우스 모델은 여전히 형질 전환 유전자 녹아웃 마우스의 넓은 범위 때문에 기본적인 이식 및 면역 학적 연구에서 금을 나타내는 표준을 사용할 수 있으며, 면역 학적 및 진단 도구의 다수 마우스 (18)만을 위해 개발되어왔다. 쥐의 자궁 심장 이식 모델은 문제를 해결하고 허혈 재관류 손상, 면역 억제, 급성 및 만성 거부와 관용 유도 1-3, 17, 22과 관련된 기계적인 연구를 수행 할 수있는 독특한 도구를 제공합니다.

봉합 기술을 사용하여 마우스의 복강 심장 이식 모델은 제 코리 외

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공개 사항

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이 연구는 "Medizinischer Forschungsfond Tirol"의 보조금 #207, 인스브루크 의과대학의 "MUI-START Förderungsprogramm"의 보조금 #2010022010의 지원을 받았습니다.

감사의 글

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저자는 경쟁하는 재정적 이해관계가 없다고 선언합니다.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
Yasargil 클립 미니 퍼머넌트 7mmAesculapFE720K
마이크로 용기 클립S & TB1 00396 V
마이크로 가위FST14075-11
용기 확장기S & TD-5a.2 00125
마이크로펜셉스FSTDumont 11271- 30
클립애플리케이터S & TCAF-4 00072
마이크로베슬 클립S & 티B1 00396 V

참고문헌

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
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