MTT의 분석에 의해 합성 및 세포 독성 평가 : 항암 금속 합성물

요약

공기에 민감한 티탄 및 바나듐 항암제의 합성 방법은 MTT 분석에 의해 인간의 암 세포주를 향해 자신의 세포 상해 활성의 평가와 함께 설명한다.

초록

티타늄 (IV) 및 바나듐 (V) 착물은 매우 강력한 항암제이다. 자신의 합성 문제는 자신의 가수 분해 불안정을 의미하므로 자신의 준비는 불활성 분위기 하에서 수행되어야한다. 이러한 복합체의 항암 활성의 평가는 MTT 분석에 의해 달성 될 수있다.

MTT 분석은 그것이 가능한 세포에 노출되었을 때 MTT 포마 잔하는 분자의 환원 효소에 기반 비색 생존력 분석법이다. 환원의 결과는 MTT 분자의 색 변화이다. 컨트롤을 기준으로 흡광도 측정은 복합 항암 활성 및 IC ₅₀ 값으로 변환하는 테스트 화합물의 농도 변화와의 다음과 같은 치료 가능한 암 세포를 나머지의 비율을 결정합니다. MTT 분석은 정확성, 신속성, 그리고 상대적으로 단순에 의한 세포 독성 연구에서 널리 일반적입니다.

여기에서 우리는 사전셀 플레이트의 제조, 세포와 화합물의 배양 등 공기에 민감한 금속 기반 약물 및 세포 생존 능력 측정의 합성에 대한 상세한 프로토콜을 전송, MTT 분석하고 IC ₅₀ 값의 판정을 사용하여 생존력을 측정.

서론

화학 요법은 여전히​​ 다양한 암 질환의 임상 치료에 사용의 주된 과정 중 하나이며, 따라서 연구의 방대한 양의 새롭고 개선 된 항암제를 개발하는 것을 목표로 세계적으로 수행된다. 이러한 연구는 주로 시험 관내 세포 독성 특성의 생물학적 평가에이어서 화합물의 설계 및 제조와, 화학적 레벨에서 시작한다. 세포 생존 능력은 세포 활동 ^1-2에 대한 정보를 제공하는 다양한 분석에 의해 평가 될 수있다.

시스플라틴은 광범위 정소 및 난소 암 ^3-4 주로 효율적인 치료 간주 화학 치료 약물로 사용되는 백금 착물의 예이다. 그러나, 좁은 활성 범위 및 심각한 부작용은 다른 유력한 전이 금속 착체 ^5-8의 연구 결과를 발생시킨다. 다른 사람의 사이에서, 티타늄 (IV) 및 바나듐 (V) 단지는 높은 활동의 유망한 결과를 보여 주었다 감소독성 ^9-16. 티타늄 (IV) 컴플렉스 때문에 이러한 속성에 시스플라틴 후 임상 시험을 입력하는 첫번째이었다, 그러나, 그들은 인해 배합 어려움과 가수 불안정 시험을 실패했습니다. 내수성 ^15,17-21 높은 항암 활성을 결합 할 수있는 금속 착체의 개선 된 유도체를 개발하기 위해 현재 필요하므로있다. <....

프로토콜

1. V의 제조 (V) 복잡한 (그림 2), ¹⁸ 행위는 글로브 박스에 1.1 ~ 1.4 단계, 글로브 박스를 사용할 수없는 경우, 대체로 이동 2 (2.1-2.6)를 반복합니다.
   1. 리간드의 0.42 밀리몰 건조 THF에있는 H ₂ L 녹여 THF에서 VO의 동등한 양의 교반 용액 (O 나는 잠) _3에 추가합니다.
   2. 실온에서 15 분간 반응 혼합물을 교반하고, 진공하에 휘발성 물질을 제거한다.
   3. 차가운 헥산을 추가하고 진공 상태에서 제거합니다. 어두운 자주색 분말을 정량적 수율로 얻을 수 있어야합니다.
   4. 에펜 도르프 유리 병에서 얻어진 화합물의 8 mg의 무게. 3 단계로 건너 뜁니다.
2. 쉬 렌크 줄을 사용하여 V (V) 복합체를 준비합니다.
   1. 격막 모자와 건조 쉬 렝크 플라스크에 건조 THF의 리간드 H ₂ L의 0.42 밀리몰을 녹이고, 쉬 렌크 라인에 부착 진공 / 불활성 가스 (N ₂ 또는 AR) 환경을 교대로 적용, 그것은 세 가지의를 적용하는 것이 좋습니다라운드를 UCH 진공 단계에 2-5 분을 기다립니다.
   2. 격막 캡을 주사기를 통해 건조 THF....

결과

착체 설정된 절차 ^{18, 28} 및 그들의 순도 NMR 및 원소 분석에 의해 평가 될 수있다에 근거 제조 하였다.

MTT 분석으로부터 수신 된 데이터는 ^18,21 화합물의 세포 독성을 평가하기 위해 분석된다. 첫째, 모든 다른 값에서 빈 제어 흡광도 값의 감산을 행한다. 둘째, THF 용매 제어 값은 억제 화합물 제공된 성장이 첨가하지 않은 것처럼, 100 % 생존율로 설정된다. 다른 모든 값은 컨트롤에 따라 생존의 비율로 변환됩니다. 농도는 적용 및 계산 된 상대 생존 비율은 다음 변수 기울기 (네 개의 매개 변수) 모델의 비선형 회귀 (그림 4, 표 1) ^29를 기준으로 IC ₅₀ 값을 결정하기 위해 그래프 패드 프리즘 소프트웨어 (또는 이에 상응하는 금액)에 삽입됩니다.

측정 범위에서 수행되어야각각의 고원에 적어도.......

토론

이 논문에 기재된 방법은 생물학적 세포 생존 분석으로 화학 합성을 결합한다. 생존 세포에 관한 생물학적 방법과 마찬가지로 층류 후드에서 작업하고, 멸균 유기 용매의 사용을 포함하여 멸균 조건을 유지하기 위해 필수적이다. 또한, 가수 분해 불안정한 금속 기반 약물의 제조 및 저장되는 글로브 박스 또는 쉬 렝크 라인 기법들이 이용되어야 불활성 조건 하에서 수행되어야한다.

불활성 환경에서 일할 수있는 기술의 선택은 글로브 박스의 가용성에 주로 의존한다. 가능한 경우, 실내 온도 조건을 필요로하는 모든 합성은 그 안에 수행하기가 매우 편리합니다. 난방을 필요로 합성은 일반적으로 쉬 렝크 플라스크에 상자 밖으로 촬영하고 쉬 렌크 라인에 연결됩니다. 글로브 박스를 사용할 수없는 경우, 모든 조작은 Schle에 엄선 된 유리와 함께 수행 할 수있다NK 라인 건조한 분위기를 유지하기 위해 진공 / 불활성 가스 (N ₂ 또는 AR) 조작을 이용하면서.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
시약/재료
Fetal bovine serum (FBS)	Biological Industries	04-007-1A
Hexane AR	Gadot	830122313	용매 건조 시스템을 사용하여 건조
HT-29 세포주	ATCC	HTB-38
Isopropanol AR	Gadot	830111370
L-glutamine	생물 산업	03-020-1B
MTT	시그마-알드리치	M5655-1G
페니실린/스트렙토마이신 항생제	생물학 산업	03-031-1B
RPMI-1640 페놀 레드 포함 L-글루타민	시그마-알드리치	R8758
RPMI 페놀 레드 없음	생물학 산업	01-103-1A
테트라하이드로푸란(THF) AR	Gadot	830156391	용매 건조 시스템
Ti(OiPr)를 사용하여 건조4	Sigma-Aldrich	205273-500ML	수분 민감성
트립신/EDTA	Biological Industries	03-052-1B
VO(OiPr)3	Sigma-Aldrich	404926-10G	수분 민감한
Equipment
12-channel pipette 30-300 μ l	Thermo Scientific
12채널 피펫 5-50 μ l	Finnpipette
75 cm2 플라스크	NUNC	156472
96웰 플레이트(뚜껑 포함)(바닥이 편평함)	NUNC	167008
CO2 인큐베이터	바인더	APT.line C150
카운터 챔버	Marienfeld-Superior	650030
Eppendorf 바이알	KARTELL
글러브 박스	M. Braun
층류 후드	ADS LAMINAIRE	OPTIMALE 12
마이크로 플레이트 리더 분광 광도계	Bio-Tek	El-800
현미경	Nikon	Eclipse TS100
피펫 20-200 μ l	Finnpipette
피펫 5-50 μ l	핀피펫