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방법 논문

지주막 하 출혈의 생쥐 모델

19.9K 조회수

DOI:

10.3791/50845

2013년 11월 21일

이 논문에서

요약

윌리스 천공의 관내 서클 지주막 하 출혈의 표준화 된 마우스 모델을 설명한다. 선박 천공 및 지주막 하 출혈은 두개 내 압력 모니터링에 의해 모니터링된다. 또 각종 중요한 파라미터는 기록 및 생리적 조건을 유지하도록 제어된다.

초록

이 비디오 발행물에서 지주막 하 출혈 (SAH)의 표준화 된 마우스 모델을 제시한다. 출혈은 윌리스의 천공 (CWP)의 혈관 내 서클에 의해 유도 및 두개 내압 (ICP) 모니터링에 의해 입증된다. 이에 동맥 순환을 둘러싼 막밑 공간 및 소뇌에서 균열 균질 혈액 분포가 달성된다. 체온, 전신 혈압, 심박수, 및 헤모글로빈 포화 : 동물 생리학은 삽관, 기계 환기, 다양한 생리 학적 및 심혈관 파라미터의 연속 온라인 모니터링에 의해 유지된다. 따라서 대뇌 관류 압력이 단단히 extravasated 혈액의 적은 변수 볼륨의 결과를 모니터 할 수 있습니다. 이 생쥐의 혈관 필라멘트 천공의 더 나은 표준화를 허용하고 모든 모델은 높은 재현성 있습니다. 따라서 야생 유형과 유전학의 약리학 적 및 병리 생리 학적 연구를 위해 쉽게 사용할 수 있습니다LY 쥐를 변경.

서론

SAH 환자를위한 가장 유익한 결과에 뇌졸중 서브 타입입니다 : 환자의 40 %는 출혈 후 1 개월 이내에 사망하고 생존자는 거의 임상 적으로 유리한 결과가 없습니다.

자연 SAHs (80 %)의 대다수는 대부분 동맥, 기저 동맥과 중대 뇌동맥 (MCA) 2 통신 전방과 후방을 따라 위치한 두개 내 동맥류의 파열에 의해 발생합니다.

이러한 동맥류는 동물 모델하기가 어렵습니다 때문에 SAH의 동물 모델은 하나 지주막 하 공간 / 대뇌 심실로 또는 지주막 혈관의 혈관 천공에 의해 혈액의 주입에 의해 수행된다.

혈액량은 직접 3을 제어 할 수 Cisterna의 마그나로자가 혈액 주입이 수행하기 쉽고 재현성이다. 불행하게도 SAH의 병태 생리의 일부 측면은, 예를 들어혈관 손상이 절차에 의해 모델링 할 수 없습니다. SAH의 유도를위한 또 다른 기술 방식은 수조 내 정맥 4의 시작입니다.

그러나, MCA 지점에서 관내 CWP 모델 인간의 병태 생리에 가장 가까운 5 절차로 나타납니....

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프로토콜

모든 수술은 윤리적 검토를 실시하고 바이에른 북부의 정부 (참조 번호 : 55.2-1-54-2532.3-13-13 및 -2532-136-11)에 의해 승인되었다. 동물은 약 ​​25 g의 체중을 가진 남성 C57BL / 6 마​​우스입니다.

1. 동물 준비

  1. 챔버에 마우스를 넣어 마취를 유도한다. 동물이 의식을 잃을 때까지 5 % 이소 플루 란과 챔버를 세척합니다.
  2. 복강 예 혼합 마취제를 주입 : 펜타닐 (0.05 ㎎ / ㎏), 미다 졸람 (5 ㎎ / ㎏)과 medetomidine (0.5 ㎎ / ㎏). 절차를 수행하는 동안 이전과 정기적으로 반사를 확인합니다. 마취를 유지하기 위해 시간당 초기 금액의 3 분의 1을 재 주입.
  3. 20 G 정맥 카테터 (11)에서 만든 튜브 삽관 orotracheally. 삽관이 기울어 진 플랫폼 (30 °)에 동물을 해결하기 위해, 구부러진 집게로 혀를 철회 작업 현미경으로 성대를 시각화하고 기관에 튜브를 삽입영감시.
  4. 발생하기 쉬운 위치에 마우스를 놓고면의 조각 또는 microcapnograph와 튜브의 정확한 위치를 확인합니다.
  5. 호흡기에 삽관 튜브를 연결합니다. 180-220 호흡 / 분, 200 ....

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결과

사망

수술 기술이 숙달되면 절차는 수술 사망률을 유도하지 않습니다. 또한 출혈은 거의 모든 동물에서 달성 될 수있다. 수술 후 사망률은 대부분의 동물은 수술 후 (그림 5) 1 일에 죽어 가고 30~40%입니다.

ICP는 SAH 후 값

출혈 전에 ICP은 약 4 mmHg로합니다. 최대 120 mmHg로에 ICP의 급격한 증가에 결과를 출혈. ICP 값은 5 분으로 약 30 mmHg로 (도 1) 내에서 안정. 24 시간에서 ICP 출혈 후에도 약간 10 mmHg로 5로 상승.

SAH 후 혈압

혈압은 즉시 유도 (그림 2) 출혈 후 상승한다. 이것은 높은 ICP에 의해 시작됩니다 쿠.......

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토론

SAH 후 처리 옵션이 부족하고 대부분 효력이없는 수 있습니다. 따라서 사후 출혈성 뇌 손상의 병태 생리 더욱 새로운 치료 표적을 식별하고 새로운 치료 방법을 개발하기 위해 이해되어야한다. 표준화 및 유전자 변형 동물 즉, 마우스, 잘 재생 가능한 동물 모델은 조사를 위해 매우 중요하다. 그것은 밀접하게 인간의 병태 생리와 유사한으로 CWP 모델은 SAH를위한 널리 사용되는 모델이되고 있습니다하지만, 마우스에서의 사용은 낮은 재현성이 높은 대인 관계 변화에 의해 방해된다. 모델의 변화는 생리적 조건을 변경 다른 마취 프로토콜에 의해 발생합니다. 출혈의 양으로 인해 혈관 반응성, 혈압 및 응고의 차이 (12)에 동물간에 변화한다. 따라서이 과정을 통하여 생리적 조건을 모니터링 및 VA를 감소 수술 및 모니터링 프로토콜을 확립하는 것이 중요이 모델의 riability.

SAH 후 혈액 분포는 종 사이 다를 수 있습니다. 쥐 모델의 혈액에서 동일.......

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공개 사항

저자가 공개하는 게 없다.

감사의 글

현재의 연구는 Solorz - 잭은 연구 재단에 의해 투자된다.

....

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
Equipment
operation microscopeLeicaKL2500
isoflurane vaporizerHarvard InstrumentsContinuous Flow vaporizer
respiratorHugo SachsMinivent 845
microcapnographHugo SachsType 340
temperature controllerFHCDC 온도 조절기
치과 드릴PaggenLabset- N
ICP 모니터CodmanICP 모니터
혈압 모니터AD InstrumentsBridge Amp FE221
주사기 펌프세계 정밀 기기SP101IZ
맥산소 측정기Kent ScientificMouseSTAT
LDFPerimedPeriflux 5000
아날로그 데이터 모니터AD InstrumentsPower Lab 16/35
Material
cement for ICP 프로브 고정SpeikoCarboxylate 시멘트
접착제 LDF 프로브 고정 BobSmith IndustriesCyanoacrylate 접착제 (Maxi Cure 및 Insta Set)
정맥 카테터Johnson JohnsonJelco 날개 모양 i.v. 카테터; REF 4076
대퇴 카테터용튜브 Smiths MedicalFine Bore Polythene 튜브; ID 0.28 mm OD 0.61 mm; REF 800/100/100
혈관 천공을 위해EthiconProlene 5-012mm 길이
절단 수술 장비Fine Scientific Instruments겸자 의료 #5, 혈관 가위 8cm, 마이크로클립 4mm 턱
수정 삽관 튜브 30cm 길이 필라멘트로 절단

참고문헌

  1. Cahill, J., Zhang, J. H. Subarachnoid hemorrhage: is it time for a new direction. Stroke. 40, 86-87 (2009).
  2. van Gijn, J., Kerr, R. S., Rinkel, G. J. Subarachnoid haemorrhage. Lancet. 369, 306-318 (2007).
  3. Lin, C. L., et al.

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재인쇄 및 허가

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