폐렴 구균은 중증 지역 사회 획득 폐렴과 전 세계적으로 2 백만 이상의 죽음에 책임을 일으키는 주요 병원균이다. 적합성 또는 병독성에서 내포 세균성 요인의 영향은 생물 발광 박테리아를 이용한 급성 마우스 폐렴이나 균혈증 모델에서 실시간으로 모니터링 할 수있다.
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방법 논문
생물 발광 박테리아를 사용하여 실시간으로 급성 폐렴 마우스 모델에서 폐렴 구균 독성 요인의 영향에 따라
이 논문에서
요약
초록
폐렴 개발의 주요 건강 문제와 선진국 중 하나이며 상당한 이환율 및 사망률과 관련이 있습니다. 이 질병의 지식, 중환자 실 (ICU)의 가용성, 강력한 항균제하고 효과적인 백신의 사용의 발전에도 불구하고, 사망률은 1 높은 수준으로 유지. 폐렴 구균은 지역 사회 획득 폐렴의 주요 원인균 (CAP)입니다 인간의 균혈증의 가장 흔한 원인 중 하나. 이 병원체는 표면에 노출 된 adhesins 폐렴 및 침습성 폐렴 구균 질환 (IPD)에 기여 독성 요인의 armamentarium에 장착되어 있습니다. 세균의 적합성 또는 독성 인자의 생체 내 역할의 평가는 S.를 해결하는 것을 가장 중요합니다 폐렴 병원성 메커니즘. 폐렴, 균혈증 및 뇌막염 뮤린 모델 DIF에서 폐렴 구균 성 요인의 영향을 결정하기 위하여 사용되고감염의 단계를 ferent. 여기에서 우리는 비강 또는 생물 발광 박테리아와 복강 내 감염 후 마우스에서 실시간으로 폐렴 구균 보급에 모니터링하는 프로토콜을 설명합니다. 결과는 묘화 시스템 및 첨부 된 분석 소프트웨어를 사용하여 시각 및 평가 될 수 하부 호흡기 및 혈액에서 곱셈과 폐렴 구균의 확산을 보여준다.
서론
바이러스 나 세균에 의한 호흡기 감염은 전세계의 모든 사망의 약 삼분의 원인이 전 세계적으로 가장 일반적인 지역 사회 획득 임상 문제 중 하나가 남아있다. 키 세균 종은 헤 모필 러스 인플루엔자 및 폐렴 구균이 있습니다. 그러나 이러한 세균 종은 일반적으로 자연 호흡기 식물의 일반적인 성분이다. 따라서 세균 마차 침략 질환과 면역 상태 나 개인의 성향에 따라에 대한 특정 위험에 있습니다. 증상이 식민지는 침략적인 감염에 트리거됩니다. 폐렴 구균은 지역 사회 획득 폐렴 (CAP)과 인간의 균혈증의 가장 흔한 원인 중 하나의 주요 원인균이다. 건강한 사람의 S. 폐렴 (폐렴 구균)는 종종 그들이 비병원성 박테리아에 직면 상부 호흡기의 증상 및 무해 식민지 개척자이다뿐만 아니라, 헤 모필 러스 종으로 병원균 상주 식물의. 또는 포도상 구균 및 인간의 면역 방어 체계의 첫번째 줄. 운송 요금은 어린이에서 가장 높은 (37 %)과 3-5 (58 %) 붐비는 보육 시설 내에서 더 높은. 젊은 인구와 노인, 사업자 및 비 인두 분비물 6에서 에어로졸 전송을 통해 폐렴을 받고, 폐렴 구균 결합되는 백신 (성인 어린이와 23 가의 다당류 PPSV23에서....
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프로토콜
여기에 설명 된 동물 감염 실험 지침과 척추 동물의 사용에 대한 규제 지역 및 국제 (실험 동물 과학 협회 (FELASA)의 연맹의 예를 들면 유럽의 건강 법률)에 따라 설치를 수행해야합니다. 실험은 지역 윤리적 보드 및 기관 동물 관리위원회의 승인을 받아야합니다. S. 모든 실험 실험실이나 동물의 감염 폐렴은 클래스 II 바이오 안전성 내각에서 실시하고 있습니다.
1. 생물 발광 Pneumocococi의 감염성 주식의 준비
- 80 ° C에서 (w / v)의 효모 추출물 및 유지 보수 20 % 글리세롤의 최종 농도 1 %로 보충 토드 휴이트 국물 재고의 폐렴 구균 문화를 준비
- 혈액 한천 플레이트에 깊은 냉동 재고 폐렴 구균 문화 소량의 플레이트와 5 % CO 2에서 37 ° C에서 10 시간 동안 박테리아를 배양한다. 티그는 혈액 한천 플레이트는 게놈에 luxABCDE 유전자 카세트의 트랜스포존 삽입 카나마이신 (150 ㎍ / ㎖)로 적절한 항생제가 포함되어 있습니다.
- 10 시간의 최대 새로운 혈액 한천 접시에 신선한 식민지를 하위 재배하고 있습니다.
- THY 매체는 10 % (V / V....
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결과
메티오닌의 수집 및 흡수는 자신의 호스트의 틈새 (32, 33)의 체력을 유지하기 위해 폐렴 구균에 대한 중앙 중요하다. 메티오닌 ABC 수송 단백은 SPD _ 0151 유전자 (TIGR4 : sp_0149)에 의해 D39으로 인코딩되어 MetQ 32라는 이름의. 폐렴 구균은 또한 메티오닌 생합성 효소 (-; TIGR4 Sp_0585 - Sp_0586, 벼 및 METF Spd_0511 Spd_0510 D39)를 생산하고 있습니다. 화학적 매체에있는 메티오닌의 부족은 폐렴 구균과 유사한, 메티오닌 (32, 33)의 메티오닌 결합 단백 MetQ 장애인 이해의 부족의 성장에 영향을 미칩니다. 이 결함은 메티오닌의 고농도 첨가에 의해 복원 될 수있다. MetQ의 부족에 의해 도시로 패혈증과 폐렴의 마우스 모델에서 폐렴 구균을 감쇠 동안 마우스 식민지 실험에서 MetQ 결핍 돌연변이는 동질 야생형과 동시 감염 실험에서와 같이 독성.......
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토론
동물에서 실시한 모든 실험은 지역 당국과 윤리위원회의 승인을 받아야합니다. 생체 내 감염 실험에서 감염된 동물의 다양한 호스트 틈새에 세균 부하는 다양한 시점 후 감염에서 결정되어야한다. 이러한 실험 조건 하에서 동물은 종래의 혈액, 인두, bronchoalvelar 세척, 또는 폐, 비장, 뇌 등의 장기에서 박테리아의 분리에 희생되어야한다. 호스트 틈새 당 세균 수를 계산하고 병원성 세균의 요인의 영향을 평가하기 위하여, 혈액이나 장기 세균성이어서 격리되어야하는 회수와 고체 매체에 도금. 세균 부하는 다음 CFU의 열거에 의해 정량화된다. 통계적으로 각 시점에서 특정 실험 조건 하에서 인해 마우스의 높은 숫자로 실험을 취급의 어려움에 이르게 쥐 그룹을 필요로 중요한 데이터 도달.
ove_content "> 반대로, 실시간 및 bioimaging 방법은 시간이 덜 요구하는 방식과 각 세균에 감염된 마우스가 일정 기간에 걸쳐 여러 번 모니터링 할 수있다. 이미징 기술은 다른에서.......액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
공개 사항
저자가 공개하는 게 없다.
감사의 글
실험실에서 연구 SH에 도이치 Forschungsgemeinschaft (DFG HA 3125/3-2, DFG HA 3125/4-2) 및 교육과 연구의 연방 교육부 (BMBF) 의료 감염 유전체학 (FKZ 0315828A)에서 교부금에 의해 지원되었다.
....액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| Todd Hewitt 국물 | Carl Roth, Karlsruhe, Germany | X936.1 | |
| 효모 추출물 | Carl Roth, Karlsruhe, Germany | 2363.2 | |
| 혈액 한천 플레이트 | Oxoid, Wesel, 독일 | PB5039A | |
| Kanamycin | Carl Roth, Karlsruhe, Germany | T832.2 | |
| 에리스로마이신 | 시그마-알드리치, 타우프키르헨, 독일 | E6376 | |
| 소 태아 혈청 (FBS) | PAA Laboratories, Coelbe, Germany | A11-151 | |
| CD-1 마우스, 암컷 | Charles River, Sulzfeld, Germany | CD1SIFE06W08W | 암컷 CD-1 마우스, 6-8주 된 |
| Ketamin 500 mg, 큐라메드 주사 용액 | Schwabe-Curamed, Karlsruhe, Germany | ||
| Rompun 2%, 주사 용액 | Bayer Animal Health, Monheim, Germany | ||
| BD Plastipak 1 ml 주사기 | Becton Dickinson, 하이델베르크, 독일 | 300015 | 바늘이 있는 멸균 Luer-Lok 주사기 |
| 젤 로더 팁 | PeqLab | 81-13790 | Mµ ltiFlex 팁 |
| 히알루로니다제 | 시그마-알드리치 | H3884-100mg | 히알루로니다제 IV-S형 소 테스트 |
| 산소 | 공기 액체, Dü 독일 셀도르프 | M1001L50R2A001 | |
| Isoflurane | Baxter, Unterschleiß 하임, 독일 | ||
| pGEM-T Easy | Promega, 만하임, 독일 | ||
| 올리고뉴클레오티드 | Eurofins MWG, 독일 에버스베르크 | ||
| Qiaprep Spin Midiprep 키트 | 키아겐, 힐덴, 독일 | 27104 | |
| PCR DNA 정제 키트 | Qiagen, Hilden, Germany | 28106 | |
| Living Image 4.1 소프트웨어 | Caliper Life Sciences/PerkinElmer, Rodgau, Germany | ||
| XGI-8 가스 마취 시스템 | 캘리퍼 생명 과학/PerkinElmer, Rodgau, 독일 | ||
| IVIS 스펙트럼 이미징 시스템 | Caliper Life Sciences/PerkinElmer, Rodgau, 독일 | ||
| Biophotometer | Eppendorf AG, 함부르크, 독일 |
참고문헌
- Niederman, M. S., et al. Guidelines for the management of adults with community-acquired pneumonia. Diagnosis, assessment of severity, antimicrobial therapy, and prevention. Am. J. Respir. Crit. Care Med. 163, 1730-1754 (2001).
- WHO,
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재인쇄 및 허가
