방법 논문

생쥐의 공포 컨디셔닝을 추적

DOI:

10.3791/51180

⸱

2014년 3월 20일

 ,  , 
1Department of Psychology and Neuroscience, Baylor University, 2Institute of Biomedical Studies, Baylor University

이 논문에서

요약

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

다음 실험에서 우리는 쥐의 추적 공포 조건화위한 프로토콜을 설명합니다. 연상 메모리의이 유형은 중립 자극과 무조건 자극을 분리 트레이스 기간을 포함한다.

초록

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이 실험에서 우리는 학습 및 기억을 측정하는 기술을 제시한다. 여기에 제시된 추적 공포 조건화 프로토콜에서 중립 자극과 무조건 자극 사이의 다섯 쌍이있다. 각 조절 재판을 분리하는 20 초 추적 기간이 있습니다. 다음날 동결에 조건 자극 (CS) 및 추적 기간의 프레젠테이션 중에 측정한다. 세 번째 날에 상황에 맞는 메모리를 측정하는 8 분의 시험이있다. 대표적인 결과는 무조건 자극하지 않고 톤 프리젠 테이션을받은 쥐에 비해 혐오 무조건 자극 (충격)로 제시했다 생쥐입니다. 추적 공포 조건화가 성공적으로 다른 공포 조건화 방법이 발견되지 않은 생쥐에 미묘한 학습과 기억 적자 및 개선 사항을 감지하는 데 사용되었습니다. 공포 조건화의 유형은 내측 전두엽 피질과 해마 사이의 연결에 의존 할 것으로 생각됩니다. 하나는 현재 논란이 방법은 편도 독립적 인 것으로 생각되어 있는지 여부입니다. 따라서 다른 공포 조건화 시험은 이러한 지연 공포 조건화를 통해 같은 편도체에 의존 학습과 기억 효과를 검토 할 필요가있다.

서론

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공포 조건화에서 중립 자극 (NS)을 혐오 무조건 자극 (미국)와 결합된다. NS는 일반적으로 톤이며, 미국과 반복 짝을 조건 자극 (CS)가됩니다. CS는 혐오 미국의 부재, 예컨대 냉동 같은 조건 반응 (CR)을 유도 할 수있다. 일반적으로 사용되는 공포 조건화 프로토콜은 지연 조절입니다. 이 프로토콜에서 NS와 미국의 발병은 연속 또는 자극 프레 젠 테이션에서 일부 중복이되고 있습니다. 동시 에어컨, 이전 버전과의 조화, 그리고 추적 에어컨 1 : 지연 공포 조건화가 시간적 연관 조절의 가장 일반적으로 사용되는 유형 중 하나이지만, 연관 조절 시간적 배열의 몇 가지 다른 종류가 있습니다. 추적 공포 조건화에서 "추적"기간의 결과로 몇 초 NS과 미국 사이의 자극이없는 간격이있다.

몇몇 연구는 적자를보고있다추적 공포 조건화에서의 신경 독성 병변이 구조에서 생산되는 때 해마 2-5 또는 약물 에이전트가 해마 수용체의 기능을 차단하는 데 사용됩니다에 입력. 추적 에어컨 및 상황에 맞는 조절에 적자에서 해마의 결과 병변하지만, 지연의 공포 조건화 8을 손상하지 않습니다. 추적 공포 조건화를 사용하면 여러 가지 이점을 얻을가 있습니다. 공포 조건화 프로토콜은 세 가지 일의 테스트 기간 동안 달성 공간적으로 의존하지 해마에 의존하는 기억을 허용 할 수 있습니다. 추적 공포 조건화는 모리스 물 미로, 새로운 물체 인식 시험, 또는 해마에 의존하는 메모리를 조사하는 다른 미로 테스트를 보완하는 검사로 사용할 수 있습니다.

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프로토콜

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다음 실험에 사용 된 생쥐는 14 시간 빛과 10 시간의 어둠 (20시부터 6시까지 시간) 낮의주기와, 22 ° C의 주변 온도에서 생성 베일러 대학에서 지내게되었다. 쥐들이 음식과 물에 임의로 액세스를 부여했다. 마우스에 대한 모든 절차는 실험 동물의 관리 및 사용을위한 건강 지침의 국립 연구소에 부합했고, 동물의 프로토콜은 베일러 대학의 동물 관리 및 사용위원회에 의해 승인되었습니다.

개요

추적 에어컨 공포의 작업은 Wiltgen 및 동료 (9)에 의해 설명 된 절차에 근거한다.

1. 장비의 제조

공포 조절 장치 실 (26 센티미터 X 22cm X 18cm)은 아크릴 두 가지 측면, 금속 두 측면과 가벼운 발 충격을 전달하는 데 사용되는 격자 마루 바닥으로 구성되어 있습니다. 시험 챔버는 집소리 감쇠 챔버 D. 챔버는 또한 동작 감지 소프트웨어에 영향을 미치는 외부에서 빛을 방지하기 위해 빛을 꽉.

  1. 테스팅 챔버에 대한 충격 레벨, 광 레벨 및 소리 세기 레벨을 보정. 테스트 챔버의 배경 수준을 측정한다. 이 챔버의 배경 소음은 65dB이다. 이 수준을 측정하는 사​​운드 미터를 사용합니다. 미터는 70 dB로 설정 느린 설정 C에, 검출로 설정해야합니다.
    1. 0.5 mA에 충격 수준을 보정합니다. 제대로 충격 레벨 ​​(재료 표 참조)을 보정하기 위해 외부 교정 장치를 사용하십시오. 충격 발생기의 내부 둘레는 정확하지 않다. 충격 발생기 정확하게 표준 A 측정기에 의해 측정 할 수없는 스크램블링 충격을 관리한다.
    2. 그리드 바의 하나 하나에 리드를 배치하고 다른 리드 3 또는 4 개의 바 위에 놓습니다. 충격을 관리하는 충격 생성기를 사용합니다. 올바른 수준이 달성 될 때까지 충격 레벨을 조정합니다. 개에 대해이 작업을 수행채널 조절 챔버를 우려하고있다.
    3. 실의 조명 수준을 측정 할 때 실에 문을 닫습니다. 약 1.0 광량을 보정합니다. 이 실험에 사용 된 FreezeFrame 소프트웨어에 고유 번호입니다. 외부 빛 미터는 2 룩스로이 글을 읽을 것입니다. 광 레벨은 광 집의 위치를​​ 이동시킴으로써 또는 렌즈의 응축기를 조정함으로써 조정될 수있다. 조정 후 렌즈의 조정 나사를 조여 있는지 확인합니다.
    4. 85dB에 소리의 데시벨 수준을 보정합니다. 데시벨 (재료 표 참조) 교정 시험 케이지 내부에 외부 데시벨 측정기를 사용합니다. 제시 소리는 2,700 Hz 톤이 될 것입니다. 참고 : 6 개월 이전의 마우스를 사용하는 경우는 옛 마우스가 적자를 듣고 한 수 있기 때문에 백색 잡음을 사용하는 것이 좋습니다 수 있습니다.
  2. 장치는 별도의 보관실에 과목을 준비 후. 참고 : 테스트 룸 같은 방에 마우스를 수용하지 마십시오.
  3. 레이블 일테스트를 위해 테스트됩니다 생쥐의 전자 꼬리. 이 테스트를하기 전에 과도한 취급을 감소하는 것이 가장 좋습니다. 선택적으로, 꼬리는 실험 전날 스트레스를 줄이기 위해 처리 표지 될 수있다. 마우스는 그 30 분 동안 방에 적응 할 수 있도록 표시 한 후. 테스트를 완료 한 후 마우스를 주택에 대한 별도의 깨끗한 새장이있다.

2. 컨디셔닝 1 일 추적

  1. 케이지에서 각 마우스를 제거하고 공포 조건화 챔버에 전송에 대한 개별 케이지에 넣습니다. 각 케이지 깨끗한 침구를 사용합니다. 마우스는 정확한 테스트의 순서를 유지하기 위해 전송 케이지에 스티커 메모를 배치합니다. 참고 : 마우스가 단독으로 보관하는 경우, 그들은 자신의 홈 케이지에 수송 될 수있다.
  2. 시험 챔버에 마우스를 놓고 문을 닫습니다. 소프트웨어 프로그램을 시작합니다.
  3. 훈련 날에, 마우스는 3 분 동안 챔버를 탐험 할 수 있습니다. 소프트웨어는 20 초 톤 (85dB, 2,700 Hz에서) t을 제공합니다동물 오. 20 초의 추적 기간 후 가벼운 충격 (2 초, 0.5 mA)은 동물에게 투여된다.
  4. 그들은 비디오를보고 혐오 자극을 받았다는 것을 확인하는 피사체의 반응을 기록한다. 200 초 간 시험 간격은 5 조절 시험을 분리한다. 각 시험은 20 초 지연 충격 뒤에 20 초 톤으로 구성되어 있습니다.
  5. 시험은 동물 시험 케이지에서 분리하기 전에 1 분 동안 테스팅 챔버에 남아 있도록 완료된 후.
  6. 다시 전송 케이지에 동물을 배치하고 자신의 홈 케이지에 반환. 추가 생쥐는 자신의 홈 케이지에있는 경우 개별적 모두 마우스 테스트를 완료 할 때까지 마우스를 집. 이 테스트되지 않은 다른 쥐에 스트레스를 줄일 수 있습니다. 대체 솔루션은 단독으로 지속적으로 하나의 케이지에서 마우스를 제거의 영향을 줄이기 위해 시험 전에 1 주일 마우스를 모두 수용하는 것입니다.
  7. EAC 후 30 % 이소프로판올로 테스팅 챔버 청소H 동물은 시험한다.
  8. 반복 테스트 일대의 모든 마우스에 대한 2.2-2.7 단계를 반복합니다.
  9. 일대의 마지막 마우스를 테스트 한 후 그들의 식민지 룸으로 마우스를 모두 반환합니다.

3. 추적 공포 컨디셔닝 주 2 : 트레이스 메모리 테스트

  1. 추적 메모리 테스트는 2 일에 발생합니다. 이 프로토콜에서 3 톤의 프리젠 테이션이 있습니다. 추적 컨디셔닝 테스트를위한 새로운 맥락에서 마우스를 놓습니다.
  2. 세 20 초 톤 프리젠 테이션 다음에 2 분 기준 기간으로 프로그램을 실행할 수있는 소프트웨어를 준비합니다. 각 톤의 프리젠 테이션 사이의 SA 220 초 ITI 있습니다.
  3. 새로운 상황 조건에 대해, 형상, 조직, 및 조절 챔버의 색깔을 변경하기 위해 상기 챔버의 바닥에 투명 아크릴 인서트를 배치.
  4. 바닥에서 삽입 무게 보트에 바닐라 추출액을 배치하여 챔버의 냄새를 변경합니다.
  5. 70 % 에탄올 대신에 30 % 이소프로판올로 챔버를 청소합니다. 참고 :이 도움이 될 것입니다새로운 컨텍스트를 만들 수 있습니다.
  6. 대기실에 마우스를 가져오고, 필요한 경우 테스트를 위해 자신의 꼬리에 레이블을 재 지정.
  7. 갈가리 찢긴 종이로 침구를 교체하여 새로운 컨텍스트 전송 새장을 준비한다. 참고 :이 새로운 컨텍스트를 만드는 데 도움이 될 것입니다.
  8. 다음 프로그램을 시작 테스트 챔버에서 쥐를 놓습니다. 테스트를 완료 한 후 70 % 에탄올로 챔버를 청소합니다.
  9. 추적 조절이 완료된 후 자신의 홈 케이지에 마우스를 반환합니다. 모든 쥐가 테스트 한 때 그들의 식민지 룸으로 마우스를 모두 반환합니다.

4. 추적 공포 컨디셔닝 3 일 : 문맥 메모리 테스트

  1. 셋째 날 상황에 맞는 조절을 실시한다. 13 분 동안 냉동 동작을 기록하는 프로그램을 실행하는 소프트웨어를 준비한다.
  2. 테스트하기 전에 각 마우스를 테스트 한 후 30 % 이소프로판올로 챔버를 청소합니다. 문맥은 하루에 1과 동일해야합니다. 전송 케이지는 하루 1과 동일해야합니다.
  3. 대기실에 마우스를 가져오고 테스트를 위해 자신의 꼬리를 라벨.
  4. 다음 프로그램을 시작 테스트 실에서 각 마우스를 놓습니다. 테스트를 완료 한 후 30 % 이소프로판올로 챔버를 청소한다.
  5. 완료되었을 때 그들의 식민지 룸으로 마우스를 모두 반환합니다.

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결과

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대표 결과 우리는 중립 자극을받은하지만 무조건 자극 (아무 충격 조건을)받지 않은 쥐에 비해 무조건 자극 (충격 상태)과 중립 자극 짝을받은 컨트롤 C57BL/6J 성인 마우스에서 데이터를 제시한다. 먼저 프로토콜이 올바르게 수행되었는지 여부를 결정하기 위해 이러한 행동 시험을 설정할 때이 조건을 실행하는 것이 중요하다.

도 1의 데이터는 추적 공포 조건화 시험에서 C57BL/6J 마우스의 훈련 일을 나타낸다. 그것은 훈련 하루 동안 모든 조건에 걸쳐 그룹을 비교하는 것은 일반적으로 필요가 없습니다. 그러나이 기준에 초기 차이가 있는지 여부를 평가하는 기준 기간을 검사하는 데 유용합니다. 우리는 초기 조건 t (1,10)에 동결 수준의 차이를 관찰하지 않았다 = 0.6, P = 0.56. 이것은 동결에 초기 차이가 없음을 보여줍니다 르VELS. 일반적으로 낮은 냉동 수준은 초기 학습 시험에 존재하지만 조화 페어링 실험 이상의 냉동 동작이 증가한다...

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토론

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추적 공포 조건화의 기초가되는 신경 회로를 규명 한 여러 연구가 있었다. 추적 공포 조건화는 해마 12-14의 CA1을 포함하는 것으로 생각됩니다. 증거는 내측 전두엽 피질 (mPFC가) 추적 눈 깜짝 에어컨 (15)에 큰 역할을하고 mPFC가 추적 공포 조건화에 관여하는 것으로 발견되었다고도 있습니다. 한 연구는 따라서 추적 간격을 17 동안 메모리를 유지 할 수있는 구조를 제공, mPFC 신경이 추적 기간 동안 지속적인 활동을 제공하는 것으로 나타났습니다.

mPFC의 역할을 검사하여 그것이 연상 메모리를 형성하는 분자의 이벤트가 타임 라인을 검사하는 것이 가능하다. 런얀 등. 16 mPFC의 세포 외 신호 조절 키나아제 (ERK)을 억제하면 기억력을 방해하는 것을 발견,하지만 메모리 인코딩을 방해하지 않았다. phosp에서 또한 증가전두엽 피질에있는 horylated ERK는 이...

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공개 사항

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저자는 공개 아무것도 없어.

감사의 글

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

이 작품은 베일러 대학 연​​구위원회의 승인에 의해 간질 재단의 연구 보조금 지원됩니다.

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재료

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참고문헌

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
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