자궁 - 난관 배아 입금 자궁 전송을 수행 할 때 발생할 수있는 배아 유출을 방지하는 장벽으로 자궁 - 난관 접합부를 사용한다. 과 vasectomized 남성은 배아 전송 pseudopregnant받는 사람을 얻기 위해 필요합니다. 두 가지 기술을 설명합니다.
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이 논문에서
요약
초록
대리 여성에게 착상 전 배아의 전송은 성적인 변경의 효과는 이후의 태아 발달과 성인의 건강에 착상 전 개발 과정에서 발생한 연구하는 유전자 변형 마우스 또는 생산을위한 필수 단계입니다. 효과적이고 일관된 배아 전송 기술의 사용은 유전자 변형 동물의 생성을 향상시키고 주입 속도와 용어 생존에 다른 치료의 효과를 결정하기 위하여 중요하다. 배반포 단계의 배아는 일반적으로 배아 조작 피펫을 소개하는 자궁 벽에 구멍을 수행, 자궁 전송에 의해 전송됩니다. 피펫이 철회 된 후 자궁에서 수행 구멍이 닫히지 않습니다, 인해 자궁의 긍정적 인 압력에 복강에 배아 수 유출. 천자는 또한 주입을 손상 출혈을 생성 블록 전송 피펫 및 배아 D에 영향을 미칠 수 있습니다조나없이 배아가 전송 특히 evelopment. 따라서,이 기술은 종종 매우 변수 및 전반적인 낮은 배아 생존율가 발생합니다. 이러한 부정적인 효과를 방지, 자궁 - 난관 배아 전송 배아의 유출을 막는 자연 장벽 자궁 - 난관 접합을 활용하여 자궁 벽의 구멍을 피하십시오. 과 vasectomized 남성은 pseudopregnant받는 사람을 얻기 위해 필요합니다. 정관 수술을 수행 할 수있는 기술은 자궁 - 난관 배아 전송에 대한 보완 설명되어 있습니다.
서론
배아 전송 아마 마우스 모델에서 수행되는 가장 흔한 수술입니다. 이 기술은 시험 관내 조작 기술을 실시 배아에서 자손을 구하는 것이 필수적이며, 따라서, 전핵 주입, 렌티 바이러스 형질 도입, 또는 키메라 형성에 의해 유전자 변형 된 모델의 개발에 필요한 단계를 구성한다. 또한,이 기술은 착상 전 개발 과정에서 발생하는 다양한 모욕의 개발 효과에 대한 연구를 할 수 있습니다. 인공 재생 기술 한 또는 상이한 물질 또는 대사 2의 비정상적인 농도에 노출의 사용은 주입 또는 태반 장애 및 자손 장기 효과의 결과 배아 발달에 영향을 미칠 수있다. 신뢰성 및 재현성 배아 전송 기술은 일관된 남자 주입 및 태아 발달에 실험적 치료 가능한 부정적 영향을 시험하는 데있어 매우 중요NER.
쥐의 착상 전 배아는 0.5 일 포스트 교미의 ampullae (DPC) pseudopregnant받는 사람 (난관 전송) 3.4 또는 2.5의 DPC pseudopregnant받는 사람의 자궁 (자궁 전송) 5,6를 통해 난관에 하나를받는 여성에 전송 될 수 자신의 발달 단계에 따라 달라집니다. 예컨대 배아 또는 유도 된 다 능성 줄기 세포를 주입하여 키메라 생쥐를 생성하....
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프로토콜
모든 동물 실험은 USDA 동물 관리 및 사용 지침에 따라 벨트 스빌 지역 동물 관리 및 사용 Comittees (BAACUC 11-015)에 의해 승인되었다.
1. 마취 및 진통제 (외과 적 치료 모두에 공통)
- 마우스의 무게를 27 G 바늘로 두 1 ㎖ 주사기에 다음과 같은 마취제 및 진통제를로드
- 케타민 (0.1 ㎎ / g : 0.01 ㎖ / 10 ㎎ / ㎖ 용액의 g)과 자일 라진 (0.01 ㎎ / g : 2 ㎎ / ㎖ 용액 0.005 ㎖ / g).
- 부 프레 노르 핀 (0.1 ㎍ / g : 0.01 ㎎ / ㎖ 용액 0.01 ㎖).
- 엄지와 집게 손가락으로 가능한 한 턱에 가까운 목의 목덜미를 따기와 새끼와 약지 사이의 꼬리를 잡고 마우스를 고정시킨다.
- 복강 케타민-자일 라진 혼합물을 주입. 내장 천공을 방지하기 위해,로 마우스를 길게약간의 엉덩이의 수준 이하의 머리 (그림 1A)
- 엄지 손가락과 집게 손가락 (그림 1B) 사이에 목 홀드의 목덜미에 부 ....
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결과
자궁 - 난관 배아 전송은 자궁 배아 전송 2,9,10에 관련된 합병증을 방지 자궁에 배아를 전송하는 평균을 제공한다. 표 1에서 우리는 우리가 기술하는 프로토콜 다음 CD1받는 사람에게 조작의 종류를 실시 CD1의 배반포를 전송 얻은 몇 가지 대표적인 결과를 보여줍니다. 기간 (강아지의 결과로 태아의 %) 또는 (렌티 바이러스 노출의 경우) E15에 생존 생존은 수정란 단계 (IVC)에서 체외에서 단순히 배양 배아, 키메라 새끼를 생성하는 IPSC 주입을 실시 배아 사이의 유사하다 자신의 조나 제거했다 배아 전송하기 전에 7 시간 동안 렌티 바이러스에 노출 된 태아. 따라서, 자궁 - 난관 배아 전송, 특히 투명대가 부족한 것과 같은 복잡하고 렌티 바이러스 배양 배아를 전송하는 신뢰할 수있는 기술이다.
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토론
정관 수술은 큰 어려움을 포함하지 않는 비교적 똑 바른 앞으로 수술 기법이다. 포비돈 요오드와 에탄올로 소독하는 경우는 복막을 자극 할 수 있으므로 (에탄올) 마지막 세척, 포비돈 요오드를 제거해야합니다. 정관에 프리 또한 음낭 또는 복부 8 횡 절개를 수행함으로써 달성 될 수있다. 음낭 절개로 인해 필요한 비교적 작은 절개를하고 조금 더 나은 수술 후 행동 (11) 복부 절개를 횡단하는 것을 권장하고있다. 그것은 두 번 같은 정관을 소작하고 기능 정관을 떠나는 초보자 외과 방지, 모두 고환에서 바사 deferentia에 쉽고 명확하게 액세스 할 수 있기 때문에, 우리는 음낭을 통해 복부 절개를 선호한다. 모두 복부 기술 사이에, 우리는 transver을 통해 원격 교육의 알바 세로 절개를 선호SAL이 복부 탈장의 개발을 피하고 모든 복부 근육 섬유를 절단하지 않기 때문에. 그러나 정관 및 자궁 - 난관 배아.......
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공개 사항
저자는 더 경쟁 재정적 이익을 선언하지 않습니다.
감사의 글
이 작품은 BT에 대한 동물 및 조류 과학학과에서 기금에 의해 지원되었다.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 케타민 | VEDCO | Ketaved ANADA 200-257 | 면허가 있는 수의사가 주문해야 합니다. |
| Xylazine | Lloyd Laboratories | Anased NADA #139-236 | 면허가 있는 수의사의 지시를 받아야 합니다. |
| 부프레노르핀 | 제네릭 | NDC 400-42-010-01 | 면허가 있는 수의사가 주문 |
| 눈 연고 | Novartis | Genteal | |
| 항생제 | Pfizer | Clavamox NADA #55-101. | 식수(아목시실린 트리하이드레이트 0.3mg/ml 및 클라불란산 칼륨 0.075mg/ml)에 첨가됩니다. 물 250ml에 재구성된 15ml 병 1.5ml를 추가합니다. |
| 드레싱 톱니 겸 | ROBOZ | RS-8120 | 모든 중간 크기의 외과 등급 강철 직선 집게가 작동합니다. |
| 미세 해부 톱니 모양의 집게 | ROBOZ | RS-5137 | 이것들은 90. 각도로 구부러져 있습니다. 원하는 경우 직선 집게를 사용할 수 있습니다. |
| 약간 구부러진 미세 해부 겸자 | ROBOZ | RS-5136 | 이 모델은 난관을 잡는 데 특히 유용합니다. |
| 가위 | ROBOZ | RS-5880 | 일반 수술 등급의 강철 작은 직선 가위가 작동합니다. |
| 27G 바늘 | Beckton-Dickinson | 305136 | 작은 바늘 (30G)도 사용할 수 있습니다.25G는 조금 너무 클 수 있습니다. |
| 클립 어플리어 | MiKRon | 42763 | |
| 9mm 클립 | MiKRon | 427631 | |
| 클립 제거제 | MiKRon | 7637 | 대신 두 쌍의 치아 집게(ROBOZ RS-8160)를 사용할 수 있습니다. |
| 봉합사 바늘 홀더 | ROBOZ | RS-7820 | |
| 봉합 | 다우스트 젤 | 5-0 Dexon S 7204-21 | 좁은 곡선 바늘로 4-0에서 6-0 흡수성 봉합사를 대체할 수 있습니다. |
| 유리 모세관 | VWR | 100 ul 보정 피펫 53432-921 | 여기에는 0.22 µ만 부착하면 되는 구강 흡입기 시스템이 포함되어 있습니다. m 필터를 튜브에 삽입하여 사용할 수 있습니다. 자세한 내용은 Nagy et al.8Burner에서 얻을 수 |
| 있습니다 | KISAG AG | Typ 2002 | 가스 작동식 버너는 Kigas(동일한 공급업체의 CH-4512)로 충전할 수 있습니다. 알코올 버너도 사용할 수 있지만 가스는 더 높은 온도를 제공하며 이 버너는 작고 정밀한 화염을 제공합니다. |
| 실체현미경 | Leica | MZFLIII | 이것은 형광이 있는 고가의 실체현미경으로 다른 용도로도 사용할 수 있습니다. 몇 가지 예를 들면 Leica MZ8 또는 Nikon SMZ-10 또는 SMZ-2B와 같은 더 저렴한 옵션이 있습니다. 두 개의 실체 현미경을 사용하는 것이 좋으며, 하나는 배아를 다루기 위한 것이고(아주 좋은 것일 필요는 없음) 다른 하나는 수용자를 위한 것입니다. 수혜자에게 사용되는 것은 무대 플레이트에서 대물 렌즈까지 긴 거리를 표시해야 무대 플레이트(난관이 배치될 위치) 위로 3-4cm 높이에서 초점을 맞출 수 있어야 하며 여전히 외과의를 위한 약간의 공간을 남겨둘 수 있어야 합니다. 대부분의 실체 현미경은 이 작업을 수행할 수 있지만 일부는 수행할 수 없습니다. |
| 광섬유 발광 | Dolan Jenner | Fiber lite | 수술 부위를 발광합니다. 다양한 시스템을 사용할 수 있습니다. |
| 따뜻한 단계 | 미국식 범위 | http://store.amscope.com/tcs-100.html | 실체현미경의 스테이지 플레이트 위에 놓을 수 있습니다. 일부 수정(수평을 맞추기 위해 막대기 삽입)tage 실체 현미경에 비해 너무 짧은 경우 필요할 수 있습니다. 사용 가능한 경우 케이지를 데우는 데 큰 따뜻한 단계를 사용할 수 있습니다. 그렇지 않은 경우 일반 가열 패드를 사용할 수 있지만 온도를 확인해야 합니다. |
| 배아 조작을 위한 배양 접시 | Falcon | 353001 | 351008도 사용할 수 있습니다. 그들은 더 좁은 방울을 만들었습니다. |
참고문헌
- Fernandez-Gonzalez, R., et al. Long-term effect of in vitro culture of mouse embryos with serum on mRNA expression of imprinting genes, development, and behavior. Proc. Natl. Acad. Sci USA. 101, 5880-5885 (2004).
- Bermejo-Alvarez, P., Roberts, R. M., Rosenfeld, C. S.
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재인쇄 및 허가
