의 자발적인 운동 활성의 결정<em&gt; 초파리</em

요약

초파리 melanogaster의는 자발적인 운동 활성 등의 행동에 영향을 미치는 유전 적 또는 환경 적 조작을 공부에 유용하다. 여기에서 우리는 적외선 빔과 자발적인 운동 활성을 정량화하는 데이터 분석 소프트웨어와 함께 모니터를 활용하는 프로토콜을 설명합니다.

초록

초파리는 동작에 영향을 미치는 환경 적, 유전 적 조작을 연구하는 훌륭한 모델 생물로 사용되어왔다. 하나의 문제는 자연 전위의 활동이다. 여기에서 우리는 초파리 인구 모니터를 한 번에 몇 일 동안 파리의 자발적인 운동 활성의 지속적인 모니터링을 할 수있는 추적 시스템을 이용하여 우리의 프로토콜을 설명합니다. 이 방법은, 간단하고 안정적​​이며 목표이며 노화, 성별, 음식의 칼로리 함량의 변화, 약물의 첨가, 또는 인간의 질병을 모방 유전자 조작의 영향을 조사하는데 사용될 수있다.

서론

초파리는 초파리는 이러한 학습과 기억, 사회적 상호 작용, 공격성, 약물 남용, 수면, 감각 기능, 구애, ^{1,2 짝짓기와} 같은 복잡한 동작을 기본 메커니즘을 연구 할 수있는 중요한 모델 생물로 사용되었습니다. 여러 프로토콜을 통해 연구되어 하나의 문제는 자연 전위의 활동이다. 부정적 geotaxis는 초파리 활성을 측정하기 위해 개발 된 첫번째 방법 중 하나이며,이 프로토콜은 초파리는 ^1,3 용기의 바닥에 진탕 후에 바이알의 소정 높이에 도달 파리의 비율을 측정하는 것을 포함한다. 이 방법은 간단 저렴 있다는 장점을 가지고 있으며, 그것은 임의의 실험실에서 수행 할 수있는 특수 장비를 필요로하지 않기 때문이다. 그것은 비행 ^이동에 대한 서로 다른 유전자 조작의 효과를 연구 할 수있는 중요한 검사 도구로 사용되어왔다. 그러나, 시간과 노동 집약적이다ND 인해 튜브 및 인간 기록의 변수 흔들림에 바이어스의 가능성이 있습니다.

부정적인 geotaxis 방법은 바닥에 파리의 흔들림 다음 비행 튜브의 사진을 소요 신속한 반복 부정적인 Geotaxis (RING) 방법 ^4,5의 개발에 따라 향상되었다. 이 프로토콜의 장점은 감도와 동시에 ....

프로토콜

주 : 캔톤-S 균주 미니애폴리스 스톡 센터로부터 얻은 표준 야생형 배경 라인이다.

1. 음식 준비와 음식 1000 ㎖를위한 레시피

참고 :이 섹션은 음식 준비를위한 프로토콜을 설명합니다. 큰 금속 냄비는 한 번에 음식의 약 18 L를 준비하는 데 사용됩니다. 여기에 설명 된 프로토콜은 소형화 및 1,000 ml로의 H _2를 O를 사용합니다 음식은 두 번 멸균된다.

1. 643 ㎖의 물에 113g의 자당과 28g의 양조 효모를 혼합. 15 분에 걸쳐 혼합하는 교반 막대와 25 ° C에서 핫 플레이트 세트에 재료를 둡니다.
2. 20 분 동안 오토 클레이브 음식 솔루션입니다.
3. 268 ㎖의 물에 49g의 옥수수 가루 8.1 g 한천을 혼합 단계 1.2에 설명 된 멸균 식품 혼합물에 추가 할 수 있습니다. 큰 숟가락 또는 털과 잘 섞는다.
4. 20 분 동안 오토 클레이브 음식을 혼합.
5. 접시에 음식을 넣고 교반 막대를 일정하게 혼합으로 냉각 할 수 있습니다. 나는F 추가 솔루션은 60 ° C에서 설정 뜨거운 접시에 음식을 유지하고 음식은 필요한 온도에 도달하면 솔루션을 추가, 같은 미페프리스톤 (RU....

결과

초파리의 자발적인 운동 활성 플라이 성 (그림 3A), 식품 (그림 3B)의 칼로리 내용과 빛 / 어둠주기에 따라 달라집니다. 빛이 꺼져되면 즉시 활동이 극적으로 감소한다. 그림 3a는 남성과 여성의 파리의 전위의 활동 기록 24 시간을 보여줍니다. x 축에 별표는 빛이 꺼져 된 시간을 표시하고 어두운주기에 전환. 그림 3b는 옥수수 음식에 3 일 나이를 날아 남성 세 인구 모니터에서 수집 한 평균 자발적인 운동 활성 사이의 표준 편차를 보여줍니다. 24 시간 동안 자발적인 신체 활동을 위해 수집 된 데이터는 또한 24 시간 동안,도 3c 동안 플라이 당 총 활성과 같이 표현 될 수있다.

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토론

파리의 자발적인 운동 활성은 연령, 유전 적 배경, 성별 ^{2,13,18,19와} 같은 많은 요인에 의해 영향을 받는다. 또, 식품, 환경의 온도, 다른 약물의 첨가, 및 주 / 야간 라이트 사이클의 칼로리 함량 등의 환경 요인 플라이 활동에 영향을 미칠 수있다. 예를 들어, 같은 연령의 남성 파리는 여성 (그림 1)에 비해 더 높은 자발적인 신체 활동이있다. 따라서, 같은 나이와 성별의 파리는 서로 비교한다. 이러한 과다 발현 또는 특정 유전자의 기능의 손실 등의 비행 활동에 유전자 조작의 효과를 검사 할 때, 실험 및 제어 파리는 서로 다른 유전 적 배경이나 두 번째 사이트 수정 미치는 영향을 제거하기 위해 같은 유전 적 배경에 있어야합니다. 이 ¹¹¹⁸ 또는 10 세대 YW 남성 승으로 실험 여성 파리를 역 교배에 의해 달성 될 수있다. 10 후교잡 세대는 ¹¹¹⁸ 또는 <.......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
설탕 FCC 식품 등급 100 LB,	Fisher Scientific MP Biomedicals	ICN90471380
Brewer' s 효모	피셔 사이언티픽 MP 바이오메디컬	ICN90331280
초파리 한천 파인	SciMart	DR-820-25F
옥수수 가루	피셔 사이언티픽 MP 바이오메디컬	ICN90141125
메틸4-하이드록시벤조에이트, 테고셉	시그마	H5501-5KG
EtOH	Pharmco-AAPER	111000200
활성 건조 효모	Fisher Scientific	ICN10140001
Fly CO2 pad	LabScientific	BGSU-7
스테레오 현미경	Olympus	SZ40
Drosophila 이산화탄소(CO2) 탱크	Airgas	UN1013
파리
쉘 바이알 와이드	Fischer Scientific	AS519
와이드 플라스틱 바이알용 버즈플러그	Fischer Scientific	AS275
유리 바이알(25 x 95mm)	Fischer Scientific Kimble 60931-8	AS-574
유리 바이알용 스폰지 플러그	SciMart	DR-750
Drosophila 식품 디스펜서	Applied Scientific(Fischer Scientific)	AS780Q
DPM Drosophila Population Monitor	Trikinetics Inc.
라인 코드가 있는 DC 전원 공급 장치	Trikinetics Inc.
PSIU9 전원 공급 장치 인터페이스 장치	Trikinetics Inc.
전화 케이블 및 5방향 스플리터	Trikinetics Inc.
USB(범용 직렬 버스) 하드웨어	Trikinetics Inc.
UCB 포트가
DAMSystem308X Macintoch OSX(Intel)용 데이터 수집 소프트웨어	www.trikinetics.com
DAMSystem308 Windows PC(XP/Vista/7)용 데이터 수집 소프트웨어	www.trikinetics.com
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Macintosh용 DAMFileScan108X 소프트웨어
www.trikinetics.com Windows PC 용 DAMFileScan108X 소프트웨어 (XP / Vista / 7)	www.trikinetics.com
USB 소프트웨어 (PSIUdrivers.zip)	www.trikinetics.com
DAMSystem Notes 308	(http://www.trikinetics.com/Downloads/DAMSystem%20Notes%20308.pdf

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