이 콘텐츠를 보려면 JoVE 구독이 필요합니다. 로그인하거나 오늘 무료 평가판을 시작하세요.

방법 논문

경고, 헤드 억제 쥐의 하위 대뇌 피질의 뇌 구조 내에서 Juxtacellular 모니터링 및 현지화 단일의 뉴런

10.9K 조회수

⸱

DOI:

10.3791/51453

⸱

2015년 4월 27일

 ,  , 
1Department of Physics 0374, University of California, San Diego, 2Department of Psychiatry and Neuroscience, Centre de Recherche de l’Université Laval Robert-Giffard

이 논문에서

요약

이 프로토콜은 경보를 발하는 쥐의 피질하 뇌 구조에서 신경 세포 활동을 모니터링하기 위한 머리 억제 메커니즘의 설계 및 외과적 이식을 설명합니다. 이 책은 병치세포 구성에서 단일 뉴런을 분리하고 해부학적 위치를 효율적으로 식별하는 절차를 설명합니다.

초록

단일 뉴런 단위의 세포 외 활동을 모니터링하는 다양한 기술이 있습니다. 그러나 행동하는 동물의 깊은 뇌 구조에서 이러한 활동을 모니터링하는 것은 특히 구조가 입체적으로 표적화되어야 하는 경우 기술적인 과제로 남아 있습니다. 이 프로토콜은 동물의 머리를 입체선 평면에 유지하고 단일 뉴런의 스파이크 활동을 명확하게 분리하는 편리한 수술 및 전기 생리학적 기술을 설명합니다. 이 프로토콜은 경보를 발동하는 설치류의 머리 억제, 마이크로피펫 전극을 사용한 병치세포 모니터링, 이온 영동 염료 주입을 결합하여 사후 조직학에서 뉴런 위치를 식별합니다. 이러한 각 기술은 그 자체로 잘 정립되어 있지만, 프로토콜은 단일 실험에서 결합된 사용의 세부 사항에 중점을 둡니다. 이러한 신경 생리학 및 신경 해부학 적 기술은 행동 모니터링과 결합됩니다. 본 예에서는 결합된 기술을 사용하여 자체 생성된 비브리사 움직임이 체성 감각 시상 내 뉴런의 활동에서 어떻게 인코딩되는지 확인합니다. 보다 일반적으로, 쥐, 생쥐 및 기타 동물의 다양한 행동 작업과 함께 신경 활동을 모니터링하기 위해 이 프로토콜을 조정하는 것은 간단합니다. 결정적으로, 이러한 방법의 조합을 통해 실험자는 해부학적으로 식별된 신경 생리학적 신호를 행동과 직접 관련시킬 수 있습니다.

서론

적극적으로 행동 작업에 종사하는 경고 동물에서 신경 세포의 활동을 모니터링 신경계의 기능과 조직을 이해하는 것이 중요합니다. 하나의 신경 세포 단위에서 전기 활동의 세포 외 녹음이 긴 시스템 신경 과학의 주식 도구 왔으며 현재 광범위하게 사용되고 여전히있다. 전극의 종류와 구성의 다양 한 특정 실험의 과학적, 기술적 요구에 따라 사용할 수 있습니다. 만성 또는 마이크로 드라이브를 주입 전극 배열은 종종 조류, 설치류 및 영장류를 포함 1-4 자유롭게 움직이는 동물에서 사용된다. 또한, 외부 미세 조작기를 통해 금속 또는 유리 미세 전극 급성 관통 자주 마취 또는 머리를 억제 동물에서 기록하는 데 사용됩니다. 유리 마이크로 피펫 전극들이 사용될 juxtacellular 또는 "세포 부착"될 수있는 이점이 명백하게 구성을 분리5 정렬 사후 스파이크의 합병증없이 단일 뉴런의 활동. 이들이 염료 또는 신경 해부학 트레이서 작은 예금을 주입하는, 또는 심지어는 개개의 셀을 기록 채우기 위해 사용될 수있다 이들 전극은 또한, - 식별 된 해부학 세포 또는 위치에서의 기록을 허용한다. 이 구성은 성공적으로 쥐, 마우스, 조류 6-10에 적용되었습니다. 현재 기술 기술은 juxtacellular 모니터링 및 경고에 ​​세포 외 색소 침착, 머리 억제 쥐에 초점을 맞추고있다. 이러한 염료 보증금은 세포 형태 또는 축삭 돌기 (11)에 대한 정보를 제공하지 않는 채 웁니다 juxtacellular는 달리 하나의 셀을 참고하지만 그들은 경고 동물에서 상당히 높은 수율을 가지고 비판적으로, 약 50 μm의 정확한 해부학 적 위치 파악을 가능하게합니다. 그럼에도 불구하고 해부학 라벨링을위한 대안 전략으로 제공됩니다 채워 juxtacellular 단일 셀에 대한 정보.

요컨대,프로토콜은 세 가지 주요 단계로 구성됩니다. 첫 번째 단계에서, 래트 6 일의 기간에 걸쳐 천 깔창 (도 1) 신체 구속에 순응된다. 두 번째 단계에서, 헤드 레스트 장치 (도 2) 기록 챔버 수술 래트에 여러 후속 기록 회의 (도 3) 중에 정위 평면에서 유지 될 수 있도록 주입; 이 절차는 표준 참조 (12) 좌표를 기반으로 전기 생리학 연구를 위해 뇌의 특정 하위 대뇌 피질의 영역을 대상으로 실험을 할 수 있습니다. 세 번째 단계는 명백하게 하나의 단위로 6-9을 분리 juxtacellular 신경 녹음을, (그림 5) 석영 모세관 튜브에서 전극을 구성, 행동 적, 전기 생리 실험 (그림 4)를 수행하기에 적합한 지그에 쥐를 배치 포함하고, 해부학 locati 마킹시카고 스카이 블루 염료 (도 6 및도 7)와 기록 사이트에서. 녹음 동시 행동 모니터링을 수행; 그러나, 행동의 기술적 인 세부 사항은 각 실험의 과학적 목표에 따라 달라집니다 단일 프로토콜의 범위를 벗어 포함된다. 여러 일에 반복 될 수 실험 절차의 종료 후, 동물은 안락사된다. 뇌는 시야 또는 형광 현미경을 사용하여 표준 신경 해부학 적 기술에 따라 추출 및 처리됩니다.

액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.

프로토콜

연방 정부가 규정 된 동물 관리 및 사용 지침에 따라 - (350 g을 250)와 캘리포니아 샌디에고 대학의 기관 동물 케어 및 사용위원회에 의해 승인되었습니다 실험 프로토콜은 여성 롱 에반스 쥐에서 수행되었다.

1. 신체 구속에 쥐 익숙해 질

참고 : 제한된 다이어트에 쥐를 놓습니다. 구속 (아래에서 설명)에 쥐를 적응 즉시 각 매일 처리 세션 후 하루에 한 번 쥐를 넣습니다. 초기 체중의 80 %에서 동물을 유지하기에 충분한 공급을 제공합니다. 이 금액은 250g 여성 롱 에반스 쥐에 대한 하루 공급의 약 6g이다.

  1. 인간에 ​​의해 처리되기 쥐를 적응. 부드럽게 약 5 초마다 30 초 동안 손으로 쥐를 억제. 2 일 연속 15 분 하루 동안이 작업을 수행합니다. 훈련 기간 동안 스트레스의 징후를 매일 쥐를 모니터링합니다. 징후 내가 어려움을 겪고 포함구속, 발성, 치아 채터에 n 개의 응답.
  2. 제 3 회 하루에 15 분 이틀 연속에 하루 동안 신체 구속 천 양말 (그림 1)에 쥐를 놓습니다.
  3. 5 번째 날, 양말 내부의 쥐를 배치하고 실험 지그에 단단한 튜브 (그림 4) 내부의 양말을 배치합니다. 2 일 연속 15 분 하루 동안 튜브에 쥐를 남겨주세요.
  4. 각 훈련 직후 쥐 피드. 마지막 세션 (6 일째)의 끝에서 음식에 제한없이 액세스 할 수 있습니다. 주입을위한 마지막 훈련을 하루에 과도한 스트레스의 징후를 표시하지 않습니다 만 쥐를 선택합니다.
    참고 : 주입 쥐의 선택은 우리의 손에, 주관적이지만 쥐의 90 % 이상이 습관화에 반응과 이식을 받아야 할 것으로 밝혀졌다.

2. 기록 회의소 헤드 억제 메커니즘을 주입

  1. 다시 확인핀 커넥터에 베어 스테인레스 스틸 와이어를 납땜 전파 방해 와이어. 3-5mm의 유적이 핀에 의해 발견 있도록 전선을 잘라. 모든 수술 도구와 함께, 기준 선을 압력솥.
  2. 케타민 / 자일 라진 마취를 관리. 95 ㎎ / 복강 / kg 자일 라진 (xylazine) 5 mg을 혼합 kg 케타민을 관리합니다. 초기 용량은 1.5 ~ 2 시간 동안 지속됩니다. 필요에 따라, 모든 30 ~ 45 분 후 마취를 보충. 안과 연고와 동물의 눈을 윤활합니다.
  3. 마취의 평면을 결정하고, 필요에 따라 마취를 유지하기 위해 발가락 철수 반사를 확인합니다.
  4. 귀 바 정위 유지 프레임에 쥐를 놓습니다 (그림 3A). 머리에 모발을 면도 포비돈 요오드 (10 % 용액)와 상처 부위를 소독. 그들은 고막에 손상을주지 않도록 적절하게 귀 막대를 삽입 할주의하십시오. 이어 무딘 팁 막대가 바람직하다.
  5. 메스 approxi와 절개를합니다후면부로 귀 뒤쪽에 눈의 rostro - 꼬리 수준에서 두개골의 정중선을 따라. 절단 및 절개의 양쪽에 피부의 2 ~ 3 밀리미터 스트립을 제거하기 위해 가위를 사용합니다.
  6. 측면 능선에 밖으로 두개골의 표면을 노출 골막 멀리 다 쳤어요. superglue의 얇은 층으로 노출 된 두개골을 커버.
  7. ½ mm 직경의 드릴을 이용하여 버어, 0-80 나사보다 약간 작은 직경의 작은 구멍을 뚫는다 (원료 섹션을 참조). 나사가 바닥보다 더 많은 측면 상단에 갈 수 있도록 구멍이 바로, 브레 그마 봉합이 측면 능선을 충족하고 두개골에 30 ~ 45 ° 각도로 위치로 후부 드릴.
  8. 30 ~ 45 ° 각도로 구멍 (약 3 회전)에 0-80 평면 바닥 기계 나사에 나사. 기본 뇌 조직 손상을 방지하기 위해 너무 깊이에 나사하지 않도록주의하십시오.
  9. 도시 된 구성에 추가로 나사 (6)에 대해이 절차를 반복 (그림 3B). 모든 나사의베이스에 superglue를 적용합니다.
  10. stereotax 조작기에 주사기 바늘을 놓습니다. 기준 마크로서, 원하는 개두술 위치의 브레 그마 봉합에서 측정하고 근처 바늘 두개골에 구멍을 내 만들지 만, 외부.
    참고 :이 데모에서는, 마크의 정위 좌표가 3mm 후방와 브레 그마 봉합에 측면 1mm이다.
  11. 영구 마커 덴트을 표시합니다. 이 정위 기준점이 될 것 같은, 마크의 정위 좌표를 참고 (그림 3B).
  12. 원하는 좌표 (3mm 후방이 예에서 정수리하는 측면 3mm)을 중심으로 개두술을 확인합니다. 그대로 뇌경막을 남겨주세요. 수정 된 인공 뇌척수액으로 개두술을 커버 (125의 NaCl, 10mM 포도당, 10 mM의 HEPES, 3.1 mM의 염화칼슘 2, 1.3 mM의의 MgCl 2, pH를 7.4) (13) (그림 3C).
  13. (4)에 0.2 ml의 원심 분리 튜브 컷 - 길이 5 ㎜, 및 캡을 절단. 두개골에 튜브를 놓고 개두술에 그것을 중심.
  14. 두개골에 튜브의 기부를 밀봉 튜브 바닥 주위 치과 시멘트 적용. 노출 개두술 (그림 3D)에 시멘트를 누출하지 않도록주의하십시오.
  15. 반대쪽 두개골 판에 다른 작은 구멍 (약 ½ mm 직경) 드릴 조심스럽게 참조 와이어를 삽입합니다. (장치 섹션 참조) 와이어의 단부에, 기록 증폭기와 인터페이스 핀을 납땜 기준 선을 구축. 참조 와이어를 이동하지 마십시오 그것은이 발생할 수있는 손상과 뇌에 한 번.
  16. 와이어가 삽입 된 구멍에 superglue를 적용합니다. 이것은 일시적으로 장소에 핀과 와이어를 밀봉합니다.
  17. 실리콘 겔 키트의 두 부분 믹스 대략 동등한 부분 (원료 섹션을 참조). 혼합 FIL 2 분을 기다립니다L 원심 분리기 튜브 약 ⅓ 젤 전체.
  18. 직각 포스트 클램프를 부착 헤드 구속 바 (자료 섹션 참조). 플레이트의 바닥은 동물의 코 향하도록 45 ° 피치 각도 유지 바 (도 2B)에 헤드 판 (도 2A)를 붙여. 이 실험 지그 (도 4)와 일치되도록 피치 각도를 설정 경사계를 사용하는 것이 도움이된다.
  19. 막대가 귀 바 평행이되도​​록 stereotax 조작하는 팔에 들고 줄을 연결합니다. 판 꼬리 가장 나사에 람다 봉합과 전방의 후방가되도록 바, 플레이트를 낮 춥니 다.
  20. 프론트 헤드 볼트 잡고 (8-32 스터드 또는 나사, 자료 섹션 참조) 나사의 머리가 아래로 동물의 꼬리쪽으로 향하도록, 도움의 손길 암과 클램프 약 45 ° 각도로. 이 개미에 닿을 수 있도록 나사를 내립니다erior 0-80 나사 (그림 3 층, G).
  21. 치과 아크릴과 장소에 볼트와 플레이트를 고정합니다. 뼈 스크류 헤드 주위 치과 아크릴, 기준 핀을 적용하고, 원심 분리 튜브의 측면 주위. 치과 아크릴이 마를 때까지 약 10 분을 기다립니다 (그림 3H).
  22. 임플란트에 피부를 확고히, 치과 아크릴의 가장자리 주위에 치과 시멘트의 층을 적용합니다. 시멘트가 마를 때까지 기다립니다.
  23. 원심 분리기 튜브의 캡에 여러 구멍을 찌를, 튜브의 캡을 배치합니다.
  24. 도움의 손길 클램프를 제거합니다. 그런 다음 조심스럽게 stereotax에서 머리를 들고 줄을 제거한 다음 줄 (그림 3I)에서 헤드 플레이트를 제거합니다.
  25. stereotax에서 동물을 제거하고 모든 적용 가능한 규칙, 규정 및 법률 (에 따라 수술 후 관리 및 모니터링을 관리 예, 부 프레 놀핀 0.02 ㎎ / ㎏, 24의 최소마다 8 ~ 12 시간시간). 염증이 임플란트의 가장자리 주위에 개발하면 해결 될 때까지, 매일 영향을받는 사이트에 항생제 연고의 얇은 층을 적용합니다.

신경 단위의 3 Juxtacellular 모니터링

  1. 이산화탄소 레이저 마이크로 피펫 풀러에 수정 모세관 튜브를 당겨 1 μm 미만이다 (도 5a)의 선단부 직경 (장치 섹션 참조).
    주 : 가열 파라미터는 특정 악기에 따라 다양하며, 필요한 목 직경 관심 뇌 구조에 따라 다를 것이다. 쥐의 시상에서 녹음을 위해, 마이크로 피펫은 5-7mm까지 올라 있습니다.
  2. 긴 작동 거리 목표에 장착 된 미분 간섭 대비 (DIC) 현미경 장소에 피펫을 고정합니다. 현미경의 무대에 장소에 피펫을 유지하는 점토를 사용합니다.
  3. MAK에 사용 된 유리의 조각; 1cm 두께 - 0.5 천천히 유리 블록 (이동울트라 마이크로톰 나이프를 보내고하는 것은 피펫 팁과보기의 필드에) 편리합니다. 무대 미세 조작기 사용, 가볍게 휴식 원인, 유리 피펫 팁을 터치합니다. 피펫 팁의 외경은 1 내지 3 ㎛의 사이가 될 때까지 필요한만큼 반복 (그림 5B, C). 이러한 마이크로 피펫은 약 5 ~ 15 MΩ 사이의 임피던스를 가지고 있는지 확인하십시오.
  4. 세포 외 식염수 (135 mM의 NaCl을, 5.4 mM의 KCl을, 1.8 mM의 염화칼슘 2, 1 ㎜의 MgCl 2, NaOH로 5 mM의 HEPES, pH를 7.2) (8)을 준비하고 시카고 스카이 블루 (/ V W) 2 %를 추가합니다. 30 G 바늘 이하로 주사기를 사용하여, 용액을 피펫의 후단 채우기. 또한, 단일 셀 juxtacellular 라벨 2 %를 추가 (w / v)의 Neurobiotin 또는 바이오틴 덱스 트란 아민 (BDA-3000 또는 BDA-10000) 시카고 스카이 블루 대신에 생리 식염수에.
  5. 적절한 실험 지그에 단단한 튜브 내부의 천 양말 내부의 쥐를 놓습니다 ( 그림 4) .Wait 헤드 구속 지그에 동물을 배치하기 전에 수술 후 72 시간의 최소. 기도의 폐색을 방지하기 위해, 오히려 목보다 상부 흉골 주위에 조임끈을 조입니다. 호흡이 곤란한 또는 방해 할 나타나면, 조임끈을 풀거나 후방으로 이동합니다. 쥐가 경고 상태에서이 절차를 수행합니다.
  6. 지그의 해당 부분에 쥐의 머리를 억제 플레이트를 연결합니다. 이렇게하려면 처음에 머리 구속 판을 고정하고 4-40 나사를 사용하여 고정합니다. 동물이 머리에 과도한 토크를 적용 피하기 위해 진정 될 때까지 대기해야합니다. 다음으로, 쥐에 이식 된 머리 억제 볼트에 8-32 너트를 배치합니다. 그런 다음 머리 볼트 나사 스테인리스 스틸 막대에 나사. 이 자리에 체결 될 수있는 방법 (그림 4)에서 실험 지그에로드를 붙입니다.
    참고 : 헤드 구속 플레이트 분뿐만 아니라 머리 볼트와 동물을 보호장치의 굽힘 imizes 및 기록 안정성을 향상시킵니다. 첫 날에 시작 할 수 있습니다 기록 대부분의 경우 동물은 머리를 억제합니다. 동물이 과도하게 fidgets 또는 vocalizes 경우, 모든 녹음을 시작하기 전에 머리 구속 습관화 훈련의 일일를 제공합니다. 이 경우에, 15 분 동안 지그에 동물을두고 그 후 케이지를 제자리. 다음날이 단계를 반복하고 프로토콜을 계속합니다.
  7. 기록 챔버를 열고 실리콘 젤을 제거합니다. 조직은 개두술에 다시 성장 경우 미세 집게를 사용하여 개두술을 청소합니다.
  8. 전동 미세 조작기에 피펫을 연결하고 headstage 프리 앰프에 연결합니다.
    참고 : 본 데모에서는 headstage에 작은 릴레이 회로는 증폭기 리드선과 높은 컴플라이언스 (도 6A-C)와 함께 외부의 전류원을 전환하는데 사용된다. 일부 앰프가 내장 적절한 높은 준수 소스를 가지고 있습니다(토론 및 재료 섹션 참조).
  9. 녹화 실에서 stereotaxically 식별 표시로 피펫의 팁을 이동하는 전동 미세 조작기를 사용합니다. 이 위치의 좌표를합니다. 두개골에 피펫의 끝을 중단하지 않도록주의하십시오.
  10. - 전방 후방 및 메디 오 - 측면 축에서 원하는 기록 위치에 피펫을 이동합니다. 그것이 의도 된 기록 위치에 약 500 μm의 지느러미가 될 때까지 경질을 통해 복부 피펫을 진행합니다.
  11. 피펫 팁과 기준 와이어 사이에 기록 된 증폭 된 전압의 오디오 모니터에 이벤트를 급상승에 대한 들으면서 천천히 피펫을 진행합니다. 한 번 요동 치고 이벤트를 식별, 약 500 μV이 관찰 된 것보다 더 긍정적 인 것 전압 처짐까지 피펫 0 ~ 100 μm의 이동을 계속합니다.
    주 : 전극 저항은 약 1.5 ~ 10 (WH)의 인자에 의해 증가 할 것이다이 문제가 발생 갖추고 있습니다.
  12. 일단 단위가 관심의 다른 모든 행동 및 생리 학적 측정과 함께, 3.11 단계에 따라로 고립 된 기록을 시작합니다. 본 데모에서는, 자체 생성 된 vibrissa 운동은 (자료 섹션 참조) 고속 비디오 그래피와 모니터링됩니다.
  13. 기록 위치에 라벨을, 전극은 전류원에 연결하는 리드 스위치. , 내장 수동으로 현재 앰프에 소스, 또는 (그림 6D 단계를 참조 3.8 및 토론) - 중 릴레이 회로 (C 그림 6A)를 사용하여이 작업을 수행하는 여러 가지 방법이 있습니다. 합격 -4 μA를 50 % 듀티 사이클에서 2 초 펄스 4 분간 피펫을 통해 이온 삼투 시카고 스카이 블루를 주입.
  14. 죽이고 표준 관행에 따라 여러 라벨링 절차 후 동물을 관류. 제 필요에 따라 뇌와 Counterstain과는 기록의 해부학 적 위치가 앉아 식별전자. (14)에 따라 시토크롬 산화 효소의 반응성에 대한 조직을 Counterstain과. 대안 적으로, 형광 현미경을 이용하여 시카고 스카이 블루 침전물을 식별.
    참고 : 정확하게 라벨 사이의 피펫을 언 클램프없이, 그것은 모든 라벨은 같은 날 같은 피펫으로 만든 것이 중요하다 다른 레이블 단위 구분하기 위해. 이 경우 기록 사이트는 각 사이트의 언급 조작하는 좌표와 함께 사후 조직학의 상대적 위치에 의해 구별 될 수있다 (단계 3.9 참조). 명확한 식별을 위해, 서로, 및 뇌 영역 당 최대 3-5 레이블에서 적어도 200 ㎛의 간격을 표시 라벨.

액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.

결과

쥐가 적극적으로 쫓기대로 vibrissa 운동의 위상 자체 생성이 15, 16 쫓기 동안 인코딩 시상 복부 후방 내측 (VPM)의 신경 단위. 그림 7a는 VPM 시상 단위의 샘플 스파이크 활동을 보여줍니다. 그림 7b는 스파이크의 히스토그램을 보여줍니다 시간 vibrissa 운동 (17)의 순시 위상 정렬. 쫓기의 후퇴 단계에서 더 스파이크가 있습니다. 도 7c에 도시 된 바와 같이, 기록 후, 유닛의 위치는, 시카고 스카이 블루 염료의 이온 토 포레 시스를 통하여 표지 하였다. 조직 VPM 시상의 신경 해부학 적 경계를 나타 내기 위해 시토크롬 산화 효소 (cytochrome oxidase) 활동에 대한 대조된다. 이 프로토콜의 유사 버전은 최근 특정 뇌간 핵 (18)에 쫓기 관련 멀티 유닛의 연결 활동 (10 ~ 20 μm의 직경 피펫 팁)를 모니터링하기 위해 적...

액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.

토론

실험 지그의 건설

이 다양한 방법으로 구성 될 수있는 지그 실험 (도 4)를 구축하는 데 사용되는 기계 부품의 설명은 생략 프로토콜. 이 데모 표준에서 광학 기계 부품 및 지원 클램프 헤드 구속 바, 신체 구속 튜브 (자료 섹션 참조) 마운트하는 데 사용됩니다. 유사 광학 기계식 전동 부를 미세 조작기에 전극 홀더를 장착하는데 사용될 수있다. 이 지그에 머리 받침대 바 수술 중에 절제 헤드 플레이트를 이식하는데 사용되는 바 같은 피치 각도로 장착되는 것이 중요하다. 전극이 표준 정위 축을 따라 이동하는 경우 (후 전극의 x 축은 정면 구속 바 평행 이동해야하고 지상 람다 및 브레 그마 평행으로 함유하는 평면에 수직 인 Z 축 그림 4).

적절한 증폭기 및 전류 소스의 종류

액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.

공개 사항

저자는 그들이 더 경쟁 금융 이익이 없다는 것을 선언합니다.

감사의 글

우리는 이 연구에 자금을 지원해 준 캐나다 보건 연구소(Canadian Institutes of Health Research, MT-5877 보조금), 미국 국립보건원(National Institutes of Health, NS058668 및 NS066664 보조금), 그리고 미국-이스라엘 양국 재단(US-Israeli Binational Foundation, 보조금 2003222)에 감사한다.

액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
케타셋 (케타민 HCl)포트 닷지N/A
Anased (자일라진 용액)로이드 연구소N/A
베타다인 (포비돈-요오드)CVS 약국269281
록타이트 495그레인저 산업 공급4KL8620 - 40 cp 시아노아크릴레이트
Vetbond3M1469SB
그립 시멘트 분말Dentsply Intl675571기록 챔버 바닥용
그립 시멘트 액체Dentsply Intl675572기록 챔버 바닥
실리콘 젤Dow Corning3-4680
제트 의치 수리 아크릴 분말Lang Dental Manufacturing Co.N/A머리 지지대를 두개골에 고정하기 위해
Ortho-Jet 빠른 경화 교정 아크릴 수지 액체Lang Dental Manufacturing Co.N/A헤드레스트 장치를 두개골에 고정하기 위해
시카고 스카이시그마C8679
파라포름알데히드시그마158127관류 및 조직 고정용
인산염 완충 식염수시그마P3813관류 및 조직 고정용
사이토크롬 C시그마C2506사이토크롬 산화효소 염색용, <강>그림 7
DiaminobenzidineSigmaD5905사이토크롬 산화효소 염색용, 그림 7
Rat 양말Sew Elegant (San Diego, CA)N/A주문제작, 그림 1, 4
PVC 튜브 2 ½ "미국 플라스틱 (주)34108그림 4
초소형 D 핀 및 소켓TE Connectivity205089-1그림 3
스테인리스 스틸 뮤직 와이어 0.010" 직경Precision Brand Products, Inc.21010그림 3
Stereotaxic holding frameKopf InstrumentsModel 900Figure 3
Stereotaxic ear barsKopf InstrumentsModel 957Figure 3
Stereotaxic manipulatorKopf InstrumentsModel 960Figure 3
½ mm 드릴 버Henry Schein100-3995
Quiet-Air 치과 드릴Midwest Dental393-1600
스테인리스 스틸 0-80 ⅛ ” 스크류패스너 슈퍼마켓247438그림 3
0.2 ml 원심분리기 튜브Fisher Scientific05-407-8A그림 3
사용자 정의 헤드 홀딩 바UCSD SIO Machine ShopN/A맞춤형 제작, 그림 2 - 4
사용자 정의 헤드 홀딩 플레이트UCSD SIO Machine ShopN/A주문품, 숫자 2 - 4
직각 포스트 죔쇠NewportMCA-1그림 3, 4; 실험용 지그를 위한 표준 광기계 부속 (그림 4)는 또한 Newport Corp.에서 이다.
8-32 ¾ ” 스크류패스너 Superstore240181머리 고정용, 그림 3
4-40 ¼ ” 스크류패스너 Superstore239958머리 지지대, 그림 3, 4< / 강>
석영 모세관 튜브Sutter InstrumentsQF-100-60-10그림 5< / strong>
Carbon dioxide laser pullerSutter InstrumentsP-2000
전동 마이크로 매니퓰레이터Sutter InstrumentsMP-285
미세 전극 증폭기분자 장치Multiclamp 700B대체 부품: 분자 장치 Axoclamp 900A
미세 전극 증폭기 헤드 스테이지분자 장치CV-7B대체 부품: HS-9Ax10 및 분자 장치 Axoclamp 900A
절연 펄스 자극기AM 시스템모델 2100대체 부품: HS-9Ax10 및 분자 장치 Axoclamp 900A
오디오 모니터Radio Shack32-2040
피펫 홀더Warner Instruments#MEW-F10T대체 부품: Discussion, 그림 6A
전극 리드선Cooner 와이어NEF34-1646(옵션), 그림 6D
Relay for ampliifier head-stageCOTO Technology#2342-05-000참조(선택 사항) 맞춤형 인쇄 회로 기판 (UCSD Physics Electronics Shop)과 함께 사용, 그림 6A-C< / strong>
디지털 비디오 카메라BaslerA602fm(옵션) 행동 모니터링의 경우 그림 7< / strong>
Puralube vet ointmentAmazon.com, IncNC0138063
블루

참고문헌

  1. Fee, M. S., Leonardo, A. Miniature motorized microdrive and commutator system for chronic neural recording in small animals. Journal of Neuroscience Methods. 112 (2), 83-94 (2001).
  2. Ventakachalam, S., Fee, M. S., Kleinfeld, D. Ultra-miniature headstage with 6-channel drive and vacuum-assisted micro-wire implantation for chronic recording from neocortex. Journal of Neuroscience Methods. 90 (1), 37-46 (1999).
  3. Szuts, T. A. A wireless multi-channel neural amplifier for freely moving animals. Nature Neuroscience. 14 (2), 263-269 (2011).
  4. Roy, S., Wang, X. Wireless multi-channel single unit recording in freely moving and vocalizing primates. Journal of neuroscience. 203 (1), 28-40 (2012).
  5. Hill, D. N., Mehta, S. B., Kleinfeld, D. Quality metrics to accompany spike sorting of extracellular signals. Journal of Neuroscience. 31 (24), 8699-8705 (2011).
  6. Pinault, D. A novel single-cell staining procedure performed in vivo under electrophysiological control: morpho-functional features of juxtacellularly labeled thalamic cells and other central neurons with biocytin or Neurobiotin. Journal of neuroscience. 65 (2), 113-136 (1996).
  7. Person, A. L., Perkel, D. J. Pallidal neuron activity increases during sensory relay through thalamus in a songbird circuit essential for learning. The Journal of neuroscience. 27 (32), 8687-8698 (2007).
  8. Kock, C. P., Sakmann, B. Spiking in primary somatosensory cortex during natural whisking in awake head-restrained rats is cell-type specific. Proceedings of the National Academy of Sciences USA. 106 (38), 16446-16450 (2009).
  9. Connor, D. H., Peron, S. P., Huber, D., Svoboda, K. Neural activity in barrel cortex underlying vibrissa-based object localization in mice. Neuron. 67 (6), 10481061(2010).
  10. Hellon, R. The marking of electrode tip positions in nervous tissue. The Journal of physiology. 214, 12P(1971).
  11. Furuta, T., Deschênes, M., Kaneko, T. Anisotropic distribution of thalamocortical boutons in barrels. The Journal of Neuroscience. 31 (17), 6432-6439 (2011).
  12. Paxinos, G., Watson, C. The Rat Brain in Stereotaxic Coordinates. , Academic Press. (1986).
  13. Kleinfeld, D., Delaney, K. R. Distributed representation of vibrissa movement in the upper layers of somatosensory cortex revealed with voltage sensitive dyes. Journal of Comparative Neurology. 375 (1), 89-108 (1996).
  14. Wong-Riley, M. Changes in the visual system of monocularly sutured or enucleated cats demonstrable with cytochrome oxidase histochemistry. Brain research. 171 (1), 11-28 (1979).
  15. Moore, J. D., Deschênes, M., Kleinfeld, D. Self-generated vibrissa motion and touch are differentially represented throughout ventral posterior medial thalamus in awake, head-fixed rats. Society for Neuroscience Annual Meeting. 41 496.08/TT424 Society for Neuroscience. 41, (2011).
  16. Khatri, V., Bermejo, R., Brumberg, J. C., Zeigler, H. P. Whisking in air: Encoding of kinematics by VPM neurons in awake rats. Somatosensory and Motor Research. 27 (2), 344-356 (2010).
  17. Hill, D. N., Curtis, J. C., Moore, J. D., Kleinfeld, D. Primary motor cortex reports efferent control of vibrissa position on multiple time scales. Neuron. 72 (2), 344-356 (2011).
  18. Moore, J. D. Hierarchy of orofacial rhythms revealed through whisking and breathing. Nature. 497, 205-210 (2013).
  19. Duque, A., Zaborszky, L. Neuroanatomical Tract-Tracing 3. , Springer. 197-236 (2006).
  20. Neuroactive substances: Neuropharmacology by microiontophoresis. , Kation Scientific. Available from: http://kationscientific.com/fsubstances.html Forthcoming.
  21. Dyes and Tracers: Sitemarking and tracktracing by microiontophoresis. , Kation Scientific. Available from: http://kationscientific.com/fdyes.html Forthcoming.
  22. Urbain, N., Deschênes, M. Neuroactive substances: Neuropharmacology by microiontophoresis. (Kation Scientific), Dyes and Tracers: Sitemarking and tracktracing by microiontophoresis. (Kation). Journal of Neuroscience. 27 (45), 12407-12412 (2007).

액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.

재인쇄 및 허가

태그

Chicago Sky Blue
경고, 헤드 억제 쥐의 하위 대뇌 피질의 뇌 구조 내에서 Juxtacellular 모니터링 및 현지화 단일의 뉴런
문의하기
도서관에 추천하기

개인정보 처리방침

이용 약관

정책

저작권 © 2026 MyJoVE Corporation. 모든 권리 보유.