에 대한 쥐의 내시경 생체 발암 및 소장의 평가의 멀티 모달 이미징 상처 치유 및 염증

요약

작은 동물 이미징 기술은 직렬 진단 시험 및 생체 내에서 치료 적 개입을 허용한다. 최근, 응용 프로그램의 범위가 크게 확대하고 현재 대장 종양 발생의 평가, 상처 치유 및 염증의 모니터링이 포함되어 있습니다. 이 프로토콜은 쥐 내시경 검사의 이러한 다양한 응용 가능성을 보여줍니다.

초록

마우스 모델은 널리 인간 질병의 발병 기전을 연구 및 전임상 진단 절차뿐만 아니라 치료 적 개입을 평가하는 데 사용됩니다. 그러나, 병리학 적 변화의 올바른 평가는 종종 조직 학적 분석을 필요로하고, 생체 외에서 수행 할 때, 동물의 사망을 필요로한다. 따라서 기존의 실험 설정에서, 내 개별 추적 검사는 거의 가능하다. 따라서, 살아있는 마우스에서 뮤린 내시경의 개발은 직접 위장 점막을 시각화와 같은 변경을 모니터링하는 절차를 반복 모두 처음 조사자 수있다. 생체 쥐 내시경 검사에 대한 수많은 응용 프로그램, 장 염증이나 상처 치유를 공부 반복 점막 생검 획득을 포함한, 존재하고,에 로컬 소형 주입 카테터를 사용하여 진단 또는 치료 에이전트를 관리 할 수 있습니다. 가장 최근에, 분자 영상은 확장했다 영상 진단 모특정 photoprobes를 구별하여 표적 분자의 검출을 허용하는 특정 dalities. 결론적으로, 쥐의 내시경 검사는 생체 영상 진단 실험을위한 새로운 첨단 기술로 떠오르고있다 상당히 다양한 분야에서 임상 연구에 영향을 미칠 수 있습니다.

서론

동물 모델은 크게 여러 장 병리에 대한 우리의 이해를 풍성하게했다. 실험실 마우스 (뮤스 musculus)는 인해 풍부한 유전자 및 게놈 정보를 생물 의학 연구에서 주요 동물 모델로 부상하고 유전자 녹아웃 균주에서 쉽게 사용할 수있다. 이해 질병 병인을 향상시키는 것 외에, 동물 모델은 또한 중요한 약물 후보뿐만 아니라 임상 진단이나 치료 개입을 테스트하기 위해 사용된다. 그러나, 인간의 질병을 흉내 낸 마우스 모델의 다양성에도 불구하고, 정기적으로 환자 치료에 사용되는 여러 진단 및 중재 적 옵션은 마우스 사용할 수 없습니다. 따라서, 감시 전략은 종종 간접 관찰에 한정되는 뮤린 질병 또는 치료 개입의 영향의 과정을 모니터링하거나 부검 분석 씀. 비 침습적 모니터링 마우스에 대한 질병 활동 지수와 같은 활력을 존재하지만, 한때체중 감소 또는 증가, 혈액, 소변 및 대변의 antification 다음은 간접 지표 간 약간의 차이에 의해 바이어스된다, 분석한다. 또한, 사후 부검은 반복 시점에서 종 관찰을 방지 분석합니다. 정교한 영상 기술은 최근 ^1,2 도입 된 마우스에서 질병 활동을 모니터링 할 수 있습니다. 이 영상 기술은 반복적 인 분석이 가능하지만, 그들은 단지 직접 점막의 시각화를 활성화 또는 생검 수집 또는 약물....

프로토콜

모든 동물 실험은 독일어 동물 보호법에 따라 Landesamt 엘리제 투르, UMWELT 싶게 Verbraucherschutz (LANUV)에 의해 승인되었다.

1 재료 및 실험 설정

1. 동물 보호
   1. 20~25g 무게 균주의 여성 또는 남성 마우스를 사용하여 지역 동물 보호 법규에 따라이를 수용.
   2. 설치류에 대한 특별 차우와 마우스를 공급하고 알팔파없는 우를 적용​​ 적어도 3 일 endoluminal 자동 형광을 최소화하기 위해 시험을에서 형광 전에.
   3. 멸균 마시는 임의 량의 물을 제공합니다.
2. 급성 DSS 유발 성 대장염의 유도
   1. 물을 멸균 100 mL에 DSS의 3g을 용해시켜 용액 : 덱스 트란 황산 나트륨 (36,000-50,000 다 DSS, 분자량) (/ V w) 3 %를 준비합니다. 마우스 수의에 전용 식수로이 솔루션을 제공하고 마우스 / 일 당 DSS-용액 5 ㎖를 계산합니다. 공급 계속DSS 수의 ^9없이 멸균 물 ROL 마우스.
3. 대장 암의 유도
   1. 돌연변이 azoxymethane (AOM) 용​​해....

결과

장 상처 치유의 생체 모니터링에서
(;도 1a 1mm 같음) 루틴 내시경 동안 점막 상처 3 프랑스어의 직경 미니어처 생검 겸자에 의해 기계적으로 유도 하였다. 이어서, 상처 치유를 매일 내시경 검사에 의해 모니터링 및 예 이미지 편집 소프트웨어를 사용하여 잔류 상처 면적의 측정에 의해 정량 하였다, ImageJ에 (도 1b). 시간에 따른 개개의 상처 봉합 실제 상처 면적 / 초기 창상 면적의 몫으로 표현된다. 7 일째에 상처가 완전히 보통 (도 1C) 나았다 반면, 예를 들어, 상처 발생 후 3 일에, 상처 면적의 41 % ± 4.1 %가 회수되었다. 또한, 실험의 끝에, 상처는 생체 조직 학적 평가를 위해 절제 될 수있다. 헤 마톡 실린 및 에오신의 대표 이미지가 아르 묘사 (H & E)는 다에 상처 침대 -stainedy.......

토론

상피 상처 치유는 계속적인 과정이라고 할 수 있습니다. 위장 점막 내의 표면 세포의 연속 생리 각질은 상피 세포 ^16의 빈번한 재생을 필요로 발생합니다. 따라서, 장애인 상처 치유 위장 궤양과 ¹⁷ 문 합부 누출 ⁽¹⁸⁾ 등 여러 가지 질병에 엄청난 영향을 미친다. 상피를 자극하는 분자 배경의 평가뿐만 아니라 잠재적 인 약물 후보는 불완전 ^19,20 체외에서의 세포 배양 시스템에서 수행 될 수있다. 따라서, 이러한 생검 겸자에 의해 정의 된 점막의 상처 세대 쥐의 대장 내시경 검사와 같은보다 정교한 실험 설정은 위장 상처 치유의 신뢰할 수있는 생체 내 평가를 활성화하고 장내 염증과 상처 치유 프로세스 간의 가능한 상호 작용을 평가하기 위해 필요하다.

또한, 주사​​ 바늘은 L에 대해 사용될 수있다진단 염료 또는 잠재적 약물 후보의 개 지역의 점막 내암을 관리. 이 작.......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
시약
알팔파 프리 다이어트	Harlan Laboritories, Madison, USA	2014
아족시 메탄 (AOM)	Sigma-Aldrich, Deisenhofen, Germany	A5486
Bepanthen eye ointment	Bayer, Leverkusen, Germany	80469764
Dextran sulphate sodium (DSS)	TdB Consulatancy, 웁살라, 스웨덴	DB001
Eosin	Sigma-Aldrich, Deisenhofen, 독일	E 4382
에틸렌디아민테트라아세트산(EDTA)	Sigma-Aldrich, Deisenhofen, 독일	E 9884
Falcon Tube 50 ml	BD Biosciences, Erembodegem, Belgium	352070
Florene 100 V/V	Abbott, Wiesbaden, Germany	B506
Haematoxylin	Sigma-Aldrich, Deisenhofen, 독일	HHS32-1L
이소펜탄 (2-메틸부탄)	Sigma-Aldrich, Deisenhofen, 독일	M32631-1L
메틸렌 블루	Merck, 다름슈타트, 독일	1159430025
O.C.T. Tissue Tek compound	Sakura, Zoeterwonde, 네덜란드	4583
Omnican F - canula	Braun, Melsungen, Germany	9161502
Phosphate buffered saline, PBS	Lonza, Verviers, Belgium	4629
Sodium Chloride 0.9%	Braun, Melsungen, Germany	5/12211095/0411
Standard diet	Altromin, Lage, Germany	1320
Tissue-Tek Cryomold	Sakura, Leiden, 네덜란드	4566
Vitro – 클루드	R. Langenbrinck, 테닝겐, 독일	04-0002
장비
AIDA Control	Karl Storz - Endoskope, Tuttlingen, Germany	20 096020
Bandpass filter	Semrock, Rochester, USA	HC 716/40
Bandpass filter	Semrock, Rochester, USA	HC 809/81
Biopsy Forceps, 3 Fr., 28 cm	Karl Storz - Endoskope, Tuttlingen, Germany	61071ZJ
Dell Monitor	Dell, 프랑크푸르트 암 마인, 독일	U2412Mb
검사 칼집, 9 Fr.Karl	Storz - Endoskope, Tuttlingen, Germany	61029D
검사 칼집, 9 Fr.Karl	Storz - Endoskope, Tuttlingen, Germany	61029C
광섬유 광 케이블, 3.5mm	Karl Storz - Endoskope, Tuttlingen, Germany	69495NL
Fluorescein Blue 필터 시스템	Karl Storz - Endoskope, Tuttlingen, Germany	20100032
Fluorescein Barrier Filter	Karl Storz - Endoskope, Tuttlingen, Germany	20100033
풋 스위치	Karl Storz - Endoskope, Tuttlingen, Germany	20010430
HOPKINS Telescope, 1.9 mm, 길이 10 cm	Karl Storz - Endoskope, Tuttlingen, Germany	1830231
SCB D-라이트 P	Karl Storz - Endoskope, Tuttlingen, Germany	20 133720
SCB tricam SL II	Karl Storz - Endoskope, Tuttlingen, Germany	20 2230 20
튜빙 세트 기기 VETPUMP II	Karl Storz - Endoskope, Tuttlingen, Germany	69811
Tricam PDD PAL	Karl Storz - Endoskope, Tuttlingen, Germany	20221037
UniVet Porta	Groppler Medizintechnik, Deggendorf, Germany	BKGM 0451
Vetpump 2	Karl Storz - Endoskope, 투틀링겐, 독일	69321620