감지 재료의 설계 및 생산을 크게 단순화하고 eT가 액체 샘플에 대한 연속적인 진화 프로필과 풍경을 생성할 수 있도록 하는 eT(electronic tongue)의 구성에 대한 새로운 접근 방식이 설명되어 있습니다. 얻어진 eT는 변별과 같은 일반적인 단백질 분석에 효율적입니다.
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이 논문에서
요약
초록
현재 프로토콜에서는 단백질 분석을 위한 eT(Electronic tongue) 구성을 위한 감지 재료의 설계 및 생산을 단순화하기 위해 조합 접근 방식이 개발되었습니다. 빌딩 블록(BB)으로 사용되는 다양한 물리화학적 특성을 가진 소수의 단순하고 쉽게 접근할 수 있는 분자를 다양하고 제어된 비율로 혼합하고 혼합물이 프리즘의 금 표면에서 자체 조립되도록 함으로써 단백질 감지에 적합한 특성을 특징으로 하는 조합 표면의 배열이 만들어졌습니다. 이러한 방식으로, 많은 수의 교차 반응 수용체를 빠르고 효율적으로 얻을 수 있습니다. 이러한 CoCRR(Combinatorial Cross-Reactive Receptor) 어레이를 SPRi(Surface Plasmon Resonance Imaging)와 같은 광학 검출 시스템과 결합함으로써 얻어진 eT는 결합 이벤트를 실시간으로 모니터링하고 액체 내 샘플에 대한 2D CEP(continuous evolution profile) 및 3D CEL(continuous evolution landscape)을 포함한 연속 인식 패턴을 생성할 수 있습니다. 이러한 eT 시스템은 일반적인 정제 단백질을 구별하는 데 효율적입니다.
서론
정확하고 빠른 단백질 감지 방법은 의료 진단 및 단백질 체학 (proteomics)에서 매우 중요합니다. 이러한 바이오칩 클래식 단백질 검출 배열은 "자물쇠 및 열쇠"인식의 원리에 기초하고 앱 타머, 항체 또는 모방 체 등의 특정 수용체를 필요로한다.
최근 몇 년 동안, 인간의 후각 및 맛보기에 의해 영감을 차동 감지 대안 1로 떠오르고있다. 이 전자 코 / 혀 (EN / ET) 접근법은 표적 분자에 매우 특정 또는 선택적으로 필요하지 않은 교차 반응성 수용체 (CRRs)의 배열 분석 물질의 결합 미분에 기초하므로 번잡을 극복하도록 매우 선택적 수용체의 개발 방법. 그것은 그것의 식별을 가능하게 지문처럼 각각의 샘플에 대한 고유 한 패턴을 만들어 모든 수용체의 결합 반응이다.
ELEC의 개발이 핵심 과제효과적인 단백질 검출 용 트로닉 코 / 혀는 구조적으로 유사한 분석 및 바인딩 이벤트에 적합한 전달 시스템을 구별 할 수있는 능력을 가지고 촬상 소자의 제조이다. 지금까지 연구는 어레이 개발이에 다양한 접근 방법이 신고되었습니다. 한 연구에서, 예를 들어 단백질의 스토리지 기반 식별은 다양한 아미노산 또는 단백질에 대한 별개의 청구 둘레 대한 ....
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프로토콜
다양한 솔루션 및 단백질 샘플의 1 준비
- 50 밀리미터의 NaH 2 PO 4, 50 mM의 염화나트륨을 함유하는 인산염 완충액 (PBS-G) 100 ㎖, pH를 6.8에서 10 % 글리세롤을 준비한다.
- pH가 7.4에서 10 mM의 HEPES, 150 mM의 염화나트륨, 0.005 % 트윈 20을 함유하는 HEPES 완충 용액 250 ㎖를 준비한다.
- PBS-G에서 0.2 밀리미터에 유당 (그림 1) 황산 빌딩 블록 1 (BB1) 유당 및 빌딩 블록이 (BB2)의 주식 솔루션을 준비합니다.
- 1 μM에서 꽃대의 hypogaea 렉틴 (AHL) 500 nm의, 미오글로빈에서, 및 500 nm에서 라이소자임 : HEPES 단백질 용액 1 ㎖를 준비합니다.
- 초순수에 1 % SDS 20 ㎖를 준비한다.
CoCRR 배열의 2 준비
- 75 % 산소 25 %, 아르곤, 0.6 밀리바, 전력 40 W. : 이러한 조건에서 3 분 동안 플라즈마 클리너와 함께 사용하기 전에 프리즘 48 시간의 금 표면을 청소
- 열한 순수하고 혼합 soluti....
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결과
일반적인 단백질 분석 용 전자 혀의 능력을 검사하기 위해, 세 가지 단백질을 사용 하였다 : AHL, 미오글로빈 및 리소자임을. 도 6에 도시 된 바와 같이 각각의 단백질의 경우, 별개의 연속적인 진화 2D 프로파일, CEP는 ET에 의해 생성되었다.
또한, 각각의 단백질에 대해, 시간에 따라 연속 인식 패턴을 실시간으로 흡착 및 탈착 반응 속도를 모니터링 할 수 SPRI, 덕분에, 3D 연속 진화 풍경 (CEL)가, 생성 된 호출. 그림 7에서,이 세 가지 단백질의 특성 CELS이 표시됩니다.
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토론
이 등의 건설을위한 가장 중요한 단계는 시스템의 재현성을 보장하기 위해 최선을 다하고 있습니다. 예를 들어, BB1과 BB2의 열한 순수 및 혼합 용액에 글리세롤의 10 %를 첨가, 사용 전에 표준화 된 절차와 프리즘의 금 표면을 세정하는 BB들은 프리즘의 금 표면에 자기 조립 중에 용매를 증발 제거하고, 각 [BB1] 여러 복제물 / ([BB1] + [BB2]) 비율 등을 증착하는 단계를 포함한다. SPRI 의한 단백질 검출 용으로, 작동 각도의 선택은 중요하다. 일반적으로, 그것은 반사율 곡선의 최대 기울기에 고정된다. 또한, 등등 작동 온도, 유량, 각 단백질 검출 용 표준화 된 실험 조건을 사용하는 것이 매우 중요하다. 각 단백질을 주입 한 후, CoCRR 어레이는 수용체의 손상없이 시스템을 완전히 재생을 허용하는 적절한 솔루션을 재사용을 위해 다시 생성해야합니다.
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공개 사항
저자는 선언할 이해 상충이 없습니다.
감사의 글
저자는 Laurie-Amandine Garçon을 지원한 그르노블의 LANEF에서 박사 학위를 받은 것에 대해 감사의 뜻을 표합니다. 이 연구는 프랑스 국립연구청(ANR-grant 06-NANO-045)의 재정 지원을 받았습니다.
....액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| SPRi 장치 | Horiba Scientific-GenOptics | SPRi 장치는 25°C의 온도 조절 인큐베이터에 배치됩니다. | |
| 인큐베이터 | Memmert | ||
| 주사기 펌프 | Cavro 과학 기기 | Cavro XLP 6000 | |
| Micro Elite Degasser | Alltech | AT590507 | |
| 6포트 중압 주입 밸브 | Upchurch Scientific | 사용된 주입 루프의 부피는 500μm입니다. | |
| 펨토 플라즈마 클리너 (버전 7) | Diener Electronic | On-line degassing system with 2 channel. | |
| Spotter | Siliflow | 비접촉 압전 감시기입니다. | |
| SPRi-Biochip | Horiba Scientific-GenOptics | 36000067 | 프리즘은 얇은 금 필름(45nm)으로 코팅된 고굴절률 유리 프리즘으로 만들어졌으며 이미징 목적으로 특별히 개발되었습니다. |
| 에리스리나 크리스타갈리 렉틴 | 시그마-알드리치 | L5390 | |
| 거미약하혈 렉틴 | 시그마-알드리치 | L0881 | |
| 미오글로빈 | , 시그마-알드리치 | M1882 | |
| 리소자임 | , 시그마-알드리치 | L6876 | |
| CXCL12&알파; | 제공: Dr. Hugues Lortat-Jacob; 준비에 대한 자세한 내용은 참고 문헌 9 | ||
| CXCL12&gamma의 지원 정보를 참조하십시오. | Hugues Lortat-Jacob 박사 제공; 준비에 대한 자세한 내용은 참고 문헌 9 | ||
| Lactose | Provided by David Bonnaffé의 지원 정보를 참조하십시오. 준비에 대한 자세한 내용은 참고 문헌 9 | ||
| Sulfated lactose | Provided by David Bonnaffé의 지원 정보를 참조하십시오. 준비에 대한 자세한 내용은 참고 문헌 9 | ||
| 시그마-알드리치 | G5150 | ||
| SDS, | 시그마-알드리치 | L4509 | |
| 트윈 20 | 시그마-알드리치 | 274348 | |
| 헤페스 | , 시그마-알드리치 | H3375 | |
| 인산나트륨 일염기 | 성 시그마-알드리치 | S0751 | |
| 염화나트륨 | 시그마-알드리치 | S3014 |
참고문헌
- Margulies, D., Hamilton, A. D. Combinatorial protein recognition as an alternative approach to antibody-mimetics. Current Opinion in Chemical Biology. 14, 705-712 (2010).
- Umali, A. P., Anslyn, E. V. A general app....
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재인쇄 및 허가
