마우스의 탁산의 약동학 및 약력 학적 분석을위한 경동맥 팅크

Summary

이 방법은 마우스 모델에서 신규 한 약물의 약물 동력학을 평가하기 위해, 경동맥을 통해 정상 약액을 공급할 목적으로 개발되었다.

Abstract

신규 시스템에 약물, 약물 조합, 또는 약물 전달의 사용을 제안하는 경우, 하나는 연구 모델에서 약물의 약물 동력학을 평가해야한다. 마우스 모델의 사용은 종종 전임상 신약 개발 및 약물 개발 ^1-8에서 중요한 단계이다 같이, 균일 한, 재생 가능한 방법으로 마우스에 약물을 도입하는 시스템을 설계 할 필요가있다. 이상적으로, 시스템이 설정 시간 걸쳐 일정한 간격으로 혈액 샘플의 수집을 허용한다. 질량 분광기 약물 농도를 측정 할 수있는 능력은, 개별 마우스 ^{1, 9, 10} 시간에 걸쳐 혈장 약물 농도의 변화를 따라 조사원을 허용했다.이 연구에서, 파크 리 탁셀은 지난 3 연속 동맥 주입으로 트랜스 제닉 마우스에 도입 하였다 시간, 혈액 샘플을 동시에 설정 시점에서 레트로 안와 출혈에 의해 촬영되는 동안. 경동맥 주입은 경정맥 주입에 잠재적 인 대안, 요소 등이다유방암 또는 다른 장애물은 경정맥 주입 비실용적. 이 기술을 사용하여, 혈장 및 조직에서의 파클리탁셀 농도 경정맥 주입에 비해 비슷한 수준을 달성 하였다. 이 튜토리얼에서, 우리는 성공적으로 개별 마우스 모델에 최적화 된 카테터를 준비하여 경동맥 동맥 카테 테르를 꽂다하는 방법을 보여줍니다, 다음 삽입하고 마우스 경동맥 동맥에 카테터를 확보, 뒷면을 통해 카테터의 끝을 스레드하는 방법을 보여줍니다 마우스의 목, 마약 유입의 제어 속도를 제공하기 위해 펌프에 마우스 후크. 여러 낮은 볼륨 복고풍 궤도 출혈은 시간이 지남에 따라 혈장 약물 농도를 분석 할 수 있습니다.

Introduction

경동맥을 통한 약물 주입 장비 및 기술을 최적화하여 신뢰성 있고 재현성있게 수행 될 수있다. 그것은 세부 사항에 미세 제어 및주의가 필요합니다 않지만 절차는 복잡하지 않습니다. 우수한 관리 및 손재주가 경동맥을 격리하며 일반적으로 연습을 통해 획득 할 수 카테터를 삽입 할 필요가있다. 숙련 된 기술자에 의해 수술 한 시간을 초과 할 수 없습니다. (마우스, 실제 약물 주입에 반응 할 수있다) 성공적인 수술 후 마우스 정상 건강 나타나야과 약물 (들)은 제어 된 균일 한 연속 투여 량으로 투여 될 수있다. 혈액 샘플 경동맥 이외 사이트에서 취해 져야한다; 복고풍 궤도 출혈은 약물 농도 분석을위한 수집하기 쉽고 만족스러운 증명했다.

최적의 크기와 모양의 카테터는 성공적인 주입 ^(11)을 수행하기에 매우 귀중한 자산이다. 우리는 카테터를 사용할 수 commerciall 발견Y는 종종 너무 큰 및 / 또는 마우스 경동맥에 편리하게 액세스 할 수 있도록 너무 융통성이 있어야합니다. 이는 주입 주사기로 마우스를 연결하는 데 사용되는 폴리에틸렌 튜브에서 패션 카테터에 바람직 증명. 따라서, 모든 튜브, 커넥터 및 주입 바늘 조립체를 단순화 일관된 치수로 하였다. 이 기술을 사용하여, 그것이 여전히 표시하며, 경동맥 혈류가 카테터가 ....

Protocol

이 프로토콜은 폭스 체이스 암 센터의 기관 동물 관리 및 사용위원회에 의해 실험 동물 시설의 승인과 동물의 인도적인 처리를위한 제도적 지침에 따라 것으로 밝혀졌다.

1. 사전 준비

1. 카테터의 준비 : 박형, 무딘 끝 (그림 3A)를 형성하도록 수정 폴리에틸렌 튜브의 짧은 길이에서 카테터를 준비합니다. 사전에 여러 카테터를 확인하고 무기한 저장합니다.
   1. 분젠 버너에 불을, 낮은 안정된 화염을 설정하는 조정합니다. 폴리에틸렌을 부드럽게 화염에 가까운 튜브 잡습니다. 튜브가 녹기 시작하면, 천천히 튜브의 박형 섹션, 약 0.25 mm 외경을 만들기 위해 두 끝을 따로 빼냅니다.
   2. 경 사진 끝을 얇은 부분을 따라 약 0.75 cm를 잘라. 이것은 충분히 튜브가 지나치게 긴 카테터를 작성하지 않고, 동맥 확보 할 보장합니다.
      참고 : 일에 긴 얇은 끝전자 카테터를 방해하는 경향이있다. 지나치게 긴 끝에도 크게 카테터의 액체 볼륨 용량을 변경하기에 충분한 액체를 보유 할 수 있습니다.
   3. 제대로 가열은, 끝이 약간 둥근 및 확대 될 때 - 불꽃을 빠르게 전달하여 경 사진 끝을 무디게. 동맥에 삽입 할 때 도움이 뒤로 살짝 팁 후크, 튜브를 고정.....

Results

파클리탁셀 분포는 165 분 저속 주입 한 다음 15 분간 고속 주입 3 시간 투여 섭생 동안 예측 가능한 패턴을 따른다.

도 1은 경정맥-주입 플라즈마 파클리탁셀 농도 및 경동맥 - 주입의 비교를 나타낸다. 파클리탁셀 농도는 초기 대량 주입 후 처음 15 분 빠르게 드롭하고 다음 150 분에 걸쳐 평준화. 이에 비해 가난한 주입에 파클리탁셀 수준 아래로 분석 전반에 걸쳐 떨어져 상대적으로 낮은 시작, 최대 마우스를 가져 가면. 가능성이 가장 높습니다 초기 주입의 라인에 막힘에 의해 발생했다. 분석의 기록은 마우스 약물 열등한 투여 아이디어를 확증 주입에 비 외부 반응 거의 있었다 나타낸다.의 끝에서, (2) 간 및 뇌 조직뿐만 아니라, 혈장 중 파클리탁셀의 상대적인 수준을 보여준다 3 시간 주입.

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Discussion

경동맥 동맥 주입은 파클리탁셀의 약물 동태의이 연구에서 중요한 기술이다. 경동맥 동맥 주입 빠르게 순환 시스템 ^(14)에 걸쳐 약물을 분배하는 방법이다. 3 시간 주입은 일시 주사보다 탁 산계로 약물의 임상 관리의 가까운 모방이다. 수술 신뢰성 한 개인에 의해 수행 될 수 있으며, 수술 시간이 비교적 짧고, 성공률은> 75 %이다. 샘플이 수집 된 후, 이들은 적절한 방법으로 분석해야한다. 우리는 혈장 및 조직 샘플의 파클리탁셀 농도를 결정하기 위해 질량 분석기를 사용했다. 추가로이 기술을 검증하기 위해, 우리는 분석을 위해 독립적 인 실험실로 혈액과 조직 샘플을 보냈습니다. 이 데이터는 각 동물 시험 (도 1)에 대한 개별 플라즈마 - 파클리탁셀 농도 곡선로서 플롯하고, 파클리탁셀의 분포가 다른 조직 (도 2)에 비교 하였다. 각각의 경우, 메신저 인약물과 관심의 시스템에 따라, 마약 유통 및 / 또는 신진 대사를 분석하는 가장 좋은 방법을.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
폴리에틸렌 튜빙 0.024 " 외경 X 0.011" 신분증	브레인트리 사이언티픽, Inc.	PE10
3 무딘 바늘 (30 게이지)	Braintree Scientific, Inc.	NB-30
스테인리스강 포트 플러그(28게이지)	Braintree Scientific, Inc.	PP-28	PE 튜빙 ID보다 약간 커서 꼭 맞고 단단히 밀봉됩니다.
스테인리스강 커넥터 플러그 2개(30게이지)	Braintree Scientific, Inc.	C-30
3 1cc 주사기	Becton, Dickinson and Co.
멸균 0.9% 식염수	Hospira	0409-7984-37
Cath-Loc HGS 헤파린/글리세롤 용액	브레인트리 사이언티픽, Inc.	HGS
실크 봉합사	Braintree Scientific, Inc.	SUT-S  113
Vanna Scissors (마이크로 가위)	World Precision Instruments	14122	이 모델은 팁이 구부러져 있지만 직선 팁 가위도 작동합니다.
Hartman Mesquito 지혈 겸자	세계 정밀 기기	501705
Betadine Swabsticks	Perdue Products L.P.	BSWS1S
부피바카인	호스피라	0409-1160-01	리도카인 또는 이와 유사한 국소 마취제로 대체될 수 있습니다.
Paclitaxel	LC Laboratories	P-9600
메탄올	Sigma-Aldrich	32213
마이크로 헤마토크릿 모세관 튜브, Heparinized	Fisher Scientific	22-362-566
마이크로 모세관 밀봉제	Fisher Scientific	02-678
C57BL/6J 마우스	Fox Chase 암 센터, 실험실 동물 시설 사육
API 4000 Q-Trap 질량 스페트로미터	Applied Biosystems