이 프로토콜은 쥐의 경동맥에 관내 부상의 원인이 이제부터는 신생 내막의 증식을 유도하는 풍선 카테터를 사용합니다. 이 부상에 대한 응답으로 혈관 재 형성의 메커니즘을 연구하는 잘 확립 된 모델입니다. 또한 널리 잠재적 인 치료 방법의 유효성을 결정하는데 사용된다.
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이 프로토콜은 쥐의 경동맥에 관내 부상의 원인이 이제부터는 신생 내막의 증식을 유도하는 풍선 카테터를 사용합니다. 이 부상에 대한 응답으로 혈관 재 형성의 메커니즘을 연구하는 잘 확립 된 모델입니다. 또한 널리 잠재적 인 치료 방법의 유효성을 결정하는데 사용된다.
쥐의 경동맥 풍선 손상 모델이 아니라 20 년 이상 설립되었습니다. 이는 혈관 평활근 탈분화, 신생 혈관 내막 형성 및 혈관 재 형성에 관여하는 분자 세포 메커니즘을 연구하는 중요한 방법 남아있다. 수컷 스프 라그 - 돌리 래트 모델에 대한 가장 자주 사용되는 동물이다. 여성 호르몬은 혈관 질환에 대한 보호하고, 따라서이 절차에 변화를 소개로 여성 쥐 바람직하지 않다. 좌측 경동맥은 전형적 우측 경동맥은 음성 대조군으로서의으로 부상된다. 왼쪽 경동맥 손상은 내피 세포를 denudes과의에게 혈관 벽을 넓히다 팽창 된 풍선에 의해 발생합니다. 손상 후, 이러한 화합물 및 약학 적 유전자 또는 shRNA를 전송 중의 사용과 같은 잠재적 인 치료 전략을 평가할 수있다. 일반적으로 유전자 또는 shRNA를 전송, 혈관 내강의 손상된 부분은 로컬 V를 30 분 동안 형질 도입한다손상된 혈관 벽에 전달 및 발현 단백질 또는 shRNA를 하나를 인코딩 iral 입자. 증식 성 혈관 평활근 세포를 나타내는 신생 내막 비후 보통 손상 후 이주에서 봉우리. 용기는 주로 세포 및 분자 세포 신호 전달 경로의 분석뿐만 아니라 유전자 및 단백질 발현이 시점에서 수확. 용기는 또한 의도 된 실험 목적에 따라, 특정 단백질 또는 경로의 발현 및 / 또는 활성의 개시를 결정하기 위해 이전의 시점에서 수확 될 수있다. 혈관 조직 학적 염색, 면역 단백질 / mRNA의 분석, 및 활성 분석을 사용하는 것을 특징으로하고 평가할 수있다. 같은 동물에서 그대로 오른쪽 경동맥 이상적인 내부 통제이다. 분자 세포 매개 부상 유발 변화는 내부 우측 제어 동맥 동맥 부상을 비교함으로써 평가 될 수있다. 마찬가지로, 치료 양식은이 다칠를 비교함으로써 평가할 수있다컨트롤에 D 및 치료 동맥은 동맥 부상.
풍선 카테터는 혈관에서의 혈전이나 죽종 막혀 사이트 (들)를 확대 할 목적으로, 혈관 성형술 절차에서 사용하는 의료 장치이다. 좁아진 혈관 내강이 팽창 된 풍선에 의해 강제로 개방되고, 혈액 공급은 협심증, 심근 경색, 다리 통증 등의 다운 스트림 허혈 증상을 완화하기 위해 순차적으로 복원 할 것입니다. 그럼에도 불구하고, 혈관 성형술의 큰 성공은 혈관 내강 (재 협착) 1의 재 협착 혈관 압력 손상 (풍선 부상), 즉 혈관 벽 리모델링을 일으키는 힘의 결과로 많은 경우에 수술 후 합병증으로 감소하고있다.
동물 모델의 수는 연구자가 풍선 부상 관련 혈관 벽 리모델링 (2) 기본 메커니즘을 이해하는 데 도움 혈관 성형술 절차를 흉내 개발되었다. 모델링에 이용 모든 동물 종 중에서, 래트는 가장 자주 사용되는 하나이다. C토끼, 개, 돼지에 ompared, 쥐의 장점은 낮은 비용, 사용의 상대적 용이성과 쥐의 생리의 현재 지식입니다. 마우스는 유전자 조작 된 균주의 넓은 범위에서 추가적인 장점을 가지고 있지만, 쥐 용기를 풍선 카테터를 삽입하기에는 너무 작다. 지난 3 년 동안 실험 쥐 연구자들은 3-6 리모델링 신생 내막 형성과 혈관의 토대 분자 및 세포 메커니즘을보다 잘 이해할 수있게되었다. 풍선 부상을 넘어, 혈관 재는 또한 죽상 동맥 경화증 7, 8, 고혈압 9 및 동맥류 (10) 등 대부분의 주요 혈관 질환에 참여하고 있습니다. 따라서, 지식 풍선 손상 모델을 통해 얻은 일반적으로 전체 혈관 벽 질환 연구에 도움이됩니다.
쥐 벌룬 손상 모델의 전체적인 목적은 단지 혈관 질환을 더욱 이해하기 위해뿐만 아니라, 신규 한 제제의 효능을 테스트하는 것이다질병 관리 (11, 12). 재 협착에 현재 임상 약물 치료 바로 혈관 성형술 후 혈관 내강을 통해 배치 약물 방출 스텐트에 의해 적용됩니다. 동물 모델에서 새 에이전트 시험을위한 효율적인 아직 더 경제적 인 방법은 잘 발달 된 지역 관내 관류 방법이다. 이 방법을 통해 테스트 한 후보 에이전트는 작은 분자 약물 복용 13, 14, 사이토 카인을 포함하거나 성장, 15, 16 인자 유전자 조작 에이전트 (의 cDNA 클론의 siRNA 등) 17 ~ 20, 및 새로운 의약품 제제 (21, 22).
지금까지 쥐 벌룬 손상 모델 혈관 질환 / 질병을 연구하는데 가장 유용한 모델의 하나로 남아있다. 이 첫 번째 단계는 생체 내에서 시험 관내에서 이동하는 일반적으로, 베드 사이드에서 벤치에 기초 단계이지만 마지막이어야한다. 쥐 실험의 결과는 더욱 심의 인간 번역 전에 특성화 될 필요때문에 혈관 침대와 혈관 해부학뿐만 아니라 인간과 쥐의 23 ~ 26 사이의 고유 종의 차이의 차이에 임상 적으로 사용. 그럼에도 불구하고, 여전히 병진 의학 연구에 필수적인 도구이다. 이러한 연구는 유전자 변형 된 쥐의 부족에 의해 제한하기 위해 사용하는 한편 징크 핑거로서 신규 게놈 접근법 29 녹아웃 생쥐는 쉽게 액세스 가능하게 한 27 클레아 TALENs 28 CRISPR-캐스 때문에 더 이상 문제가 없었다.
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참고 : 다음과 같은 실험 동물의 사용을 검토하고 기관 동물 관리 및 사용위원회 (IACUC)에 의해 승인되었다.
1. 수술 전 절차
2. 외과 적 치료
3. 수술 후 절차
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두 주 부상 후, 경동맥은 수확 단면 및 형태 학적 분석을 실시한다. 동맥이 교차 절단 및 H & E 염색있다 (그림 1, 2B, C 3). 쥐 경동맥 벽 분홍색 선으로 표시 탄성 얇은 판의 4 개의 레이어가 포함되어 있습니다. 라미 최 외부 탄성 박판 (EEL)과 최 박판 사이의 영역은, 내부 탄성 박판 (IEL)이 미디어 평활근 층 (도 1)이다. IEL 내부 영역 내막 그대로, 혈관 내피 세포의 단층이고; 부상당한 선박 또는 신생 내막의 증식. 부상 경동맥에서, 미디어는 평활근 세포의 증식에 의한 제어 배보다 두껍다. 신생 내막의 두께는 동일한 동맥 매체의 두께보다 비슷하거나 더 크다. 외막은 강력한 콜라겐 증착 (도 1b, D)으로 두껍게된다. REA 처리 용 동맥겐트 신생 혈관 내막 형성을 억제하는 능력에 대해 시험 (이 경우, shRNA를 STIM1), 단면의 신생 내막 면적을 작게 제어 부상 동맥 (도 ...
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쥐의 경동맥 풍선 손상은 잘. 2007 34 Tulis에 의해 기술 된 포괄적으로 박사 Tulis이 절차의 모든 세부 사항을 논의하고있다. 이 절차를 수행하기에 관심이있는 독자는 매우 Tulis '프로토콜을 읽을 것을 권장합니다. 그러나, 우리는 박사 Tulis으로 동의하지 않는 한 가지가 대신 식염수 또는 액체의 종류와 풍선을 팽창, 우리는 공기와 함께 팽창 제안했다. 우리의 개인적인 경험에 따르면, 액체로 팽창하는 것은 거의 공기 방울을 피할 수 없다. 또한, 유연하게 부상 과정 중에 압력을 조절하고 동맥에 여분의 스트레스와 부상을 초래할 수 더욱 어렵다. 또 다른 기술적 인 팁은 수술 중 동물의 목을 지원하기 위해 (종이 수건이나 거즈로 만든) 작은 "베개"를 사용하는 것입니다.
이전보고 랫트 성형술 절차와 몇 년간의 경험을 바탕으로, 저자는 약간 수정 simplifie를 생성 한D 프로토콜 (35). 또한, 오른쪽 손상 후 치료제의 관내 주입이 증명되었다. 이 약이 생존 수술 절...
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저자는 경쟁하는 금전적 이해관계가 없음을 선언합니다.
이 방법을 처음으로 개발하고 설명해 주신 Dr. Clowes에게 감사드립니다. 우리는 또한 우리의 과거, 현재 및 미래의 연구에 근본적으로 도움이 된 상세한 프로토콜에 대해 Tulis 박사에게 감사드립니다. 이 작업은 NIH에서 M.T.로 R01HL097111 및 R01HL123364 보조금으로, M.T.에 대한 미국 심장 협회 보조금 14GRNT18880008의 지원을 받았습니다.
촬영 과정에서 전문적인 기술 지원과 귀중한 도움을 주신 Rachel Newton에게 감사드립니다.
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| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 포가티 풍선 색전절제술 카테터, 2 프랑스어 | Edwards Lifesciences, 독일 | 120602F | |
| Deltaphase 운영 보드 - 패드 2개 및 절연체 2개 포함 | Braintree Scientific, Inc. | 39OP | |
| LED 광원 | Fisher Scientific | 12-563-501 | |
| Hartmann 모기 집게 4 "곡선 | Apiary Medical, Inc. 샌디에고, 캘리포니아 | gS 22.1670 | |
| Crile 견인기 4 "이중 종단 | Apiary Medical, Inc. | gS 34.1934 | |
| 기타 수술 기구 | Roboz Surgical Instrument Company, Inc., Gaithersburg, MD | ||
| 말초 정맥 주사(I.V.) 캐뉼라, 24 G | BD | 381312 | |
| 케타민 HCl, 100 mg/ml, 10 ml | 케타셋- Patterson Vet | 07-803-6637 | |
| 자일라진(AnaSed), 20mg/ml, 20ml | Ketaset- Patterson Vet | 07-808-1947 | |
| Buprenex, 0.3mg/1ml(5앰플/상자) | Ketaset- Patterson Vet | 07-850-2280 | |
| Nair 베이비 오일 제모 로션 - 9oz | Amazon/Walmart/CVS | N/A | |
| 인플레이션 장치 | Demax Medical | DID30 | |
| D300 3방향 스톱콕 | B.Braun Medical 주식회사 | ||
| 인공 눈물 연고 | 럭비 연구소, 덜루스, 조지아 | N/A |
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