이 콘텐츠를 보려면 JoVE 구독이 필요합니다. 로그인하거나 오늘 무료 평가판을 시작하세요.

방법 논문

서스펜션에 망막 색소 상피 세포를 제공하기 위해 설치류에서 망막 주사를 수행

17.5K 조회수

⸱

DOI:

10.3791/52247

⸱

2015년 1월 23일

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Cell and Molecular Biology, The Scripps Research Institute, 2Lowy Medical Research Institute

이 논문에서

요약

여기에서 우리는 쥐와 생쥐에 RPE 세포 덩어리를 망막하 주입하기 위한 멀티미디어 형식의 커뮤니티 승인 프로토콜을 제시합니다. 이 접근 방식은 망막 변성의 동물 모델에 이식할 때 이식된 RPE 세포의 구조 가능성, 안전성 프로필 및 생존 능력을 결정하는 데 사용할 수 있습니다.

초록

전기 자극으로 광 변환 외측 망막에서 발생 콘로드와 ​​감광체와 망막 색소 상피 (RPE) 세포에 의해 주로 수행된다. RPE는 감광체 및 사망 또는 RPE 세포의 기능 장애 연령 관련 황반 변성 (AMD), 명 55 세 이상에서 영구 실명의 주요 원인의 중요 특성 인 지원을 제공한다. AMD에 대한 치료법이 발견되지 않은 반면, 병변 RPE 건강한 눈 주입은 효과적인 치료를 증명할 수 있고, RPE 세포의 다수 용이 다 능성 줄기 세포로부터 생성 될 수있다. RPE 세포 전달의 안전성과 효능에 관한 몇 가지 흥미로운 질문 여전히 동물 모델에서 시험 될 수 있고, RPE를 주입하기 위해 사용되는 잘 용인 프로토콜이 개발되었다. 여기에 기재된 기술은 다양한 여러 연구 그룹에 의해 사용 된과 제 날카로운 바늘의 눈 구멍을 만드는 것을 포함한다. 블루와 다음 주사기세포로드 NT 바늘 구멍을 통해 삽입하고 부드럽게 RPE에 닿을 때까지 유리체를 통과한다. 비교적 간단하며 최소한의 설비를 필요이 주입 방법을 사용하여, 우리는 동물 모델에서 광 수용체 변성증의 상당량을 방지 호스트 RPE 사이에서 줄기 세포 유래 RPE 세포를 효율적이고 일관성있게 통합을 달성. 실제 프로토콜의 일부 있지만, 우리는 또한 주입하는 방법과 세포가 생체 내 이미징을에 사용하여 망막 하 공간에 주입되었는지 확인하는 방법에 의해 유도 된 외상의 범위를 결정하는 방법에 대해 설명합니다. 마지막으로,이 프로토콜의 사용은 RPE 세포에 한정되지 않는다; 이는 망막 하 공간에 임의의 화합물 또는 세포를 주입하는 데에 이용 될 수있다.

서론

감각 망막은 뉴런, 신경교세포, 내피 세포의 기능적 층으로 구성되어 있습니다. 망막 뒤쪽의 광수용체는 빛에 의해 활성화됩니다. 광전달을 통해 그들은 광자를 전기 신호로 변환하고, 이 신호는 인터뉴런에 의해 정제되어 뇌의 시각 피질로 전달됩니다. 광형질전환은 Mueller 신경교세포와 망막 색소 상피(RPE) 세포의 조화로운 노력 없이는 일어날 수 없습니다. RPE는 광수용체 바로 뒤에 있는 단층으로 구성되어 있으며 광수용체 기능 및 항상성에 필수적인 여러 다양한 기능을 수행합니다. 사실, RPE와 광수용체는 상호 의존적이어서 하나의 기능 단위로 간주됩니다. RPE의 사망 또는 기능 장애는 광수용체에 치명적인 2차 영향을 미치며, 이는 노인 실명의 주요 원인인 노화 관련 황반변성(AMD)과 관련이 있습니다1,2.

AMD에 대한 치료법은 발견되지 않았지만, 여러 임상 연구에서 RPE 세포 대체가 유망한 치료 옵션일 수 있음을 보여주었습니다3-13. 줄기세포 기술의 출현으로 이제 배아 및 유도 만능 줄기세포(hES 및 hiPS)로부터 기능적으로나 해부학적으로 체세포와 매우 유사한 많은 수의 RPE 세포를 in vitro에서 생성할 수 있습니다14-26. 줄기세포 유래 RPE는 또한 우리 그룹을 포함한 여러 독립 그룹에 의해 in vivo에서 자연 망막 변성을 가진 쥐 및 마우스 계통의 망막 변성을 상당히 늦추는 기능을 하는 것으로 나타났습니다16,18,21,22,25,28,29. 이러한 임상적 및 전임상적 근거의 조합은 매우 강력하여 줄기세포 유래 RPE 세포를 사용하여 망막 변성을 예방하기 위한 여러 임상시험이 현재 진행 중입니다30,31.

RPE는 hES 및/또는 hiPS에서 쉽게 파생될 수 있으며 다양한 유도 및 주입 기술을 사용하여 설치류의 망막하 공간에 이식될 수 있습니다32,33. (우리가 사용하는 지시된 차별화 프로토콜을 보여주는 멀티미디어 형식의 방법 논문은 Westenskow et al.을 참조하십시오.)34. 이식 시 외인성으로 전달된 RPE 세포의 안전성, 생존 및 기능적 능력에 관한 중요한 질문이 남아 있으므로 설치류에서 망막하 주사를 수행하는 능력은 중요한 기술입니다16,18,21,29,36,37. RPE의 전달은 사소한 일이 아니며 가장 효과적인 주입 기술에 대해 분야가 나뉩니다. 여기에서 설명하는 프로토콜은 RPE 세포의 덩어리를 망막하로 전달하는 간단하고 효과적인 방법이며, 줄기세포 유래 RPE 이식을 위한 첫 번째 임상시험에 사용되었습니다31. (독자는 설치류의 망막하 주사에 대한 대안적인 묘사를 위해 Eberle et al.의 다른 JoVE 기사를 참조할 수도 있습니다. 38년)

이 원고에 요약된 기술은 시각화할 수 없으며 외상은 피할 수 없습니다(모든 망막하 주사 기술과 마찬가지로). 이 수술은 변연 혈관 바로 아래에 구멍을 뚫고 경공막 경로를 따라 뭉툭한 바늘을 삽입하여 정반대 망막 아래에 세포 덩어리를 주입하는 방식으로 수행됩니다. 주사를 맞은 사람은 뭉툭한 바늘이 망막에 닿을 때 저항을 느낄 것입니다. 그러나 주사 후 세포를 직접 시각화할 수 있으며, 유도된 망막 박리의 정도는 RPE 세포에 일시적인 형광 마커를 표시하고 컨포칼 주사 검안경(cSLO)으로 검출하여 결정할 수 있습니다. 광간섭 단층촬영(OCT) 시스템을 사용하여 외상을 모니터링하고 주사 부위를 쉽게 식별할 수도 있습니다.

액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.

프로토콜

참고 : 모든 동물이 스크립스 연구소에 의해 설립 된 윤리 지침에 따라 처리 하였다.

사출 용 재료 1. 준비 (~ 20 분)

  1. 사전 따뜻한 세포 분리 솔루션 (바람직하게는 혈청 희석을 통해 비활성화되어 하나), 멸균 PBS, 문화 미디어 (표 1).
  2. 그것을 분해하고 15 분 동안 물에 부품을 끓여 무딘 바늘과 주사기를 소독.

사출에 대한 RPE 세포의 2. 준비 (~ 30 분 내지 1)

  1. 37 ℃에서 5-8 분 동안 예열 세포 분리 용액을 사용하여 RPE 세포를 분리.
  2. 여전히 연결되어 있는지 어떤을 해제 부드럽게 세포를 긁어.
  3. 배양액 대용량 (15ml의 튜브를 기입) 해리 용액을 비활성화하고 카운트하기로 세포를 희석.
  4. 펠릿 세포 5 분 동안 800 XG에 원심 분리기.
  5. 멸균 미리 예열 PBS에서 / μL 200,000 세포 (0.5 μL 볼륨에서 10 만 셀을 제공하기 위해)에서 세포를 재현 탁하고 1.5 ml의 마이크로 원심 튜브로 전송합니다.
  6. 선택적으로, 살아있는 세포 과도 형광 마커를 추가하고 30 ~ 45 분 동안 37 ℃에서 배양한다.
  7. 세포의 0.5 μL와 무딘 바늘과 주사기를로드합니다. 가능한 빨리 세포 주입한다.

3. 하위 망막 사출 (~ 사출 당 5 분)

참고 : 가능하면 윤부 선박 시각화 훨씬 용이하기 때문에, 성인 흰쥐와 기술을 배웁니다. 보다 쉽게​​ 주사 부위의 시각화를 용이하게하기 위해 (세포를 주입하기 전에) 배울 때 빠른 그린 용액을 주입한다.

  1. 쥐를 마취. 100 ㎎ / ㎖ 케타민 10 ㎎ / ㎖ 자일 라진 (xylazine) (20 μL / 10g 본체 w의 복강 내 주사를 사용하여이소 플루오 란 흡입을 통해 여덟)는 설치류를 기동 흡입기의 주둥이와 눈에 주입하기 어렵 기 때문에.
    1. 동물 깊이 그것의 발 중 하나를 집어 마취되어 있는지 확인합니다. 이 flinches 경우, 몇 분 이상 기다린 후 망막 주입을 시작하기 전에 다시 시도하십시오.
  2. 주입되는 눈이 천장을 향하도록 옆에 쥐를 놓습니다.
  3. 눈 소켓 (임시 안구 돌출)에서 튕겨 나올 그냥 귀 위의 턱으로 가볍게 눈꺼풀에 피부 평행 스트레칭 두 손가락으로 머리를 잡고 더 접근하기가되도록 해부 현미경 부드럽게 피부를 스트레칭 그래서 눈이 약간 소켓에서 팝업됩니다 (그림 1C 참조). 목에 너무 가까이 쥐를 잡지 마십시오.
  4. 30 G 날카로운 일회용 사전 멸균 바늘, 선박이 충돌하는 경우, 출혈입니다 b (즉시 윤부 아래에 구멍을중요한 전자와 나중에 구멍을 찾기 어려울 수)과 각도로 바늘 (그림 1D)으로 렌즈에 손이 닿지 않도록. 발생 날카로​​운 (또는 무딘) 바늘 또는 즉시 백내장으로 렌즈를 만지지 마십시오.
    참고 : 주사는 두 사람이 잘 작동. 이런 식으로 한 사람은 구멍이 어디에 초점을 유지하기 위해 날카로운 일회용 바늘로 첫 번째 구멍을 만든 후 주입 작업을하는 사람이 무딘 바늘 주사기를 전달할 수 있습니다.
  5. 머리에 그립을 유지하면서 눈에서 일회용 날카로운 바늘을 집어 넣으십시오. 구멍이 정확히 기억하십시오.
  6. 중 미세 조작기에 무딘 바늘로 사전로드 된 주사기를 장착하거나 손을 잡고, 렌즈를 만지지 조심스럽게 눈을 통해 밀어 다시는주의하면서 구멍을 통해 무딘 바늘 주사기의 끝 부분을 삽입 한 후 아주 부드럽게 느낌 저항 (그림 1D)까지.
  7. 케이최소한으로 모든 움직임을 eeping, 조심스럽게 천천히 망막 하 공간에 RPE 세포를 주입.
    참고 : RPE / 망막 박리가 유도 될 것이다; 이 불가피하다. 그러나, 청소기 주입 박리를 최소화 크게 재 부착 (도 1E)의 기회를 향상시킨다. 모든 과장된 움직임은 망막에 다시 바늘을 이동 할 수 있으며, 옆으로 움직임이 망막에 손상을 줄 수 있습니다. 분사 펌프의 사용은 선택적이지만, 매우 정확한 전달을 허용한다.
  8. 천천히 주사기를 집어 넣으십시오. 눈 보습을 적용하는 것은 수화 눈을 떼지 삭제합니다.
  9. 이 흉골 드러 누움을 회복 할 때까지 동물을 모니터링하기 위해 계속합니다. 무인 동물을 떠나거나 흉골 드러 누움을 회복 할 때까지 다른 경고 동물 케이지에 반환하지 않습니다.

액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.

결과

우리는이 논문에서 기재된 기술을 사용하여 신속하고 지속적으로 설치류 망막 하 공간 내로 RPE 세포의 현탁액을 제공 할 수있다. 필요한 것은 아니지만, 외상은 크게 그림 1A & B의 미세 조작기와 같은 설정을 사용하여 최소화 할 수 있습니다. 일시적인 안구 돌출 그림 1C에서와 같이 쥐를 잡으십시오. 미세 조작기 또는 손에 의해 수행되는 경우에 단계는 동일; 이 그림 1D의 만화에 묘사되어있다. 표지 RPE 세포로부터 완전히 수행하면 형광 cSLO과의 OCT 시스템 (도 2)를 사용하여 알 수있는 유도 망막 박리를 이용하여 검출 될 수있다. 그림 3에서 cSLO은 (망막 주입 후 즉시 캡처 한 그림 2와 그림 3에서 이미지) 여러 전체 주사 부위 주변의 이미지를 캡처하는 데 사용되었다. m은 박리 참고중앙 이미지 (3-5)의 심오한 (하지...

액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.

토론

이 문서에서 우리는 쥐와 생쥐에서 부유 망막 색소 상피 세포의 망막 주사를 수행하기위한 비교적 간단한 방법을 설명합니다. 이 프로토콜은 적은 외상에 번역 할 기술로 쉽게 배울 수 많은 경험이다 (그림 3, 이것은 더 나은 주사 중 하나를 나타냅니다) 미세 조작기는 (그림 1A)를 사용하는 경우에는 특히. 모든 외상은 cSLO 간섭 단층 시스템 (그림 2) 가능한 경우와 생체 내에서 모니터링 할 수 있습니다. 해상도가 높고 잡음이 적은 화상이 요구되는 경우, 당해 촬상 플랫폼 상태 뮤린 질병 모델에서 39-41 OCT를 행하는 우수한 프로토콜과 함께 사용 가능하다.

이 기술과 관련된 가장 흔한 합병증은 맥락막 출혈을 야기 과도한 망막 박리를 유도, 수술 중에 동물의 부적절한 위치에서 발생하고, 바늘에서 RPE 세포의 환류. 위치하는 경우부적절하게, 제 ...

액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.

공개 사항

저자 중 누구도 선언할 상업적 공개가 없습니다.

감사의 글

망막하 주사 기법 개발에 도움을 주신 Alison Dorsey에게 감사드립니다. 또한 이 프로젝트에 매우 관대한 자금을 지원해 주신 National Eye Institute(NEI 보조금 EY11254 및 EY021416), California Institute for Regenerative Medicine(CIRM 보조금 TR1-01219) 및 Lowy Medical Research Institute(LMRI)에 감사드립니다.

액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
2-메르캅토에탄올 (55 mM)Gibco 21985-02350 ml x 1 
Cell ScapersVWR89260-222케이스 x 1
CellTracker Green CMFDA분자 프로브C3455250 µ g x 20
DPBS, 칼슘 없음, 마그네슘 없음Gibco14190-144500 ml x 1 
패스트 그린시그마-알드리치F725825 g x 1 
Genteal Geldrops 중등도에서 중증의 윤활제 점안액 월마406094125 ml x 1
Hamilton 모델 62 RN SYRHamilton87942주사기 x 1 
Hamilton 바늘 33 G, 0.5", 포인트 3 (304 스테인리스 스틸)Hamilton7803-05바늘 x 6
Knockout DMEMGibco10829-018500 ml x 1 
KnockOut 세럼 교체용Gibco10828-028500 ml x 1 
L-글루타민 200 mMGibco25030-081100 ml x 1
자기 스탠드Leica Biosystems39430216스탠드 x 1
MEM 비필수 아미노산 용액 100X Gibco11140-050100 ml x 1
MicromanipulatorLeica Biosystems3943001Manipulator x 1
Penicillin-Streptomycin (10,000 U/ml)Gibco15140-122100 ml x 1
Slip Tip 주사기 without Needles BD  (3ml)   VWRBD309656팩 x 1
특수 사용 바늘 BD  (30g, 1인치)VWRBD305128박스 x 1
TrypLE 익스프레스 효소 (1X), 페놀 레드없음 Gibco12604013100 ml x 1
트

참고문헌

  1. Bird, A. C. Therapeutic targets in age-related macular disease. The Journal of Clinical Investigation. 120 (9), 3033-3041 (2010).
  2. Jong, P. T. Age-related macular degeneration. Med, N. . E. ngl. J. . 355 (14), 1474-1485 (2006).
  3. Abe, T. Auto iris pigment epithelial cell transplantation in patients with age-related macular degeneration: short-term results. The Tohoku Journal Of Experimental Medicine. 191 (1), 7-20 (2000).
  4. Algvere, P. V., Berglin, L., Gouras, P., Sheng, Y. Transplantation of fetal retinal pigment epithelium in age-related macular degeneration with subfoveal neovascularization. Graefes Arch. Clin. Exp. Ophthalmol. 232, 707-716 (1994).
  5. Binder, S. Outcome of transplantation of autologous retinal pigment epithelium in age-related macular degeneration: a prospective trial. Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 45 (11), 4151-4160 (2004).
  6. Binder, S. Transplantation of autologous retinal pigment epithelium in eyes with foveal neovascularization resulting from age-related macular degeneration: a pilot study. Am. J. Ophthalmol. 133 (2), 215-225 (2002).
  7. Juan, E., Loewenstein, A., Bressler, N. M., Alexander, J. Translocation of the retina for management of subfoveal choroidal neovascularization II: a preliminary report in humans. Am. J. Ophthalmol. 125 (5), 635-646 (1998).
  8. Falkner-Radler, C. I. Human retinal pigment epithelium (RPE) transplantation: outcome after autologous RPE-choroid sheet and RPE cell-suspension in a randomised clinical study. British Journal of Ophthalmology. 95 (3), 370-375 (2011).
  9. Joussen, A. M. How complete is successful 'Autologous retinal pigment epithelium and choriod translocation in patients with exsudative age-related macular degeneration: a short-term follow-up' by Jan van Meurs and P.R. van Biesen. Graefes. Arch. Clin. Exp. Ophthalmol. 241 (12), 966-967 (2003).
  10. Lai, J. C. Visual outcomes following macular translocation with 360-degree peripheral retinectomy. Arch. Ophthalmol. 120 (10), 1317-1324 (2002).
  11. Machemer, R., Steinhorst, U. H. Retinal separation, retinotomy, and macular relocation: II. A surgical approach for age-related macular degeneration? Graefes. Arch. Clin. Exp. Ophthalmol. 231 (11), 635-641 (1993).
  12. MacLaren, R. E. Autologous transplantation of the retinal pigment epithelium and choroid in the treatment of neovascular age-related macular degeneration. Ophthalmology. 114 (3), 561-570 (2007).
  13. Peyman, G. A. A technique for retinal pigment epithelium transplantation for age-related macular degeneration secondary to extensive subfoveal scarring. Ophthalmic Surgery. 22 (2), 102-108 (1991).
  14. Buchholz, D. E. Derivation of functional retinal pigmented epithelium from induced pluripotent stem cells. Stem Cells. 27 (10), 2427-2434 (2009).
  15. Carr, A. J. Molecular characterization and functional analysis of phagocytosis by human embryonic stem cell-derived RPE cells using a novel human retinal assay. Mol. Vis. 15 (4), 283-295 (2009).
  16. Carr, A. J. Protective effects of human iPS-derived retinal pigment epithelium cell transplantation in the retinal dystrophic rat. PLoS One. 4 (12), e8152(2009).
  17. Hirami, Y. Generation of retinal cells from mouse and human induced pluripotent stem cells. Neurosci Lett. 458 (3), 126-131 (2009).
  18. Idelson, M. Directed differentiation of human embryonic stem cells into functional retinal pigment epithelium cells. Cell Stem Cell. 5 (4), 396-408 (2009).
  19. Klimanskaya, I. Derivation and comparative assessment of retinal pigment epithelium from human embryonic stem cells using transcriptomics. Cloning Stem Cells. 6 (3), 217-245 (2004).
  20. Kokkinaki, M., Sahibzada, N., Golestaneh, N. Human Induced Pluripotent Stem-Derived Retinal Pigment Epithelium (RPE) Cells Exhibit Ion Transport, Membrane Potential, Polarized Vascular Endothelial Growth Factor Secretion, and Gene Expression Pattern Similar to Native RPE. Stem Cells. 29 (5), 825-835 (2011).
  21. Krohne, T. Generation of retinal pigment epithelial cells from small molecules and OCT4-reprogrammed human induced pluripotent stem cells. Stem Cells Translational Medicine. 1 (2), 96-109 (2012).
  22. Lund, R. D. Human embryonic stem cell-derived cells rescue visual function in dystrophic RCS rats. Cloning Stem Cells. 8 (3), 189-199 (2006).
  23. Meyer, J. S. Modeling early retinal development with human embryonic and induced pluripotent stem cells. Proceedings of the National Academy of Sciences. 106 (39), 16698-16703 (2009).
  24. Osakada, F. In vitro differentiation of retinal cells from human pluripotent stem cells by small-molecule induction. J. Cell Sci. 122 (17), 3169-3179 (2009).
  25. Vugler, A. Elucidating the phenomenon of HESC-derived RPE: anatomy of cell genesis, expansion and retinal transplantation. Exp. Neurol. 214 (2), 347-361 (2008).
  26. Westenskow, P. D. Using flow cytometry to compare the dynamics of photoreceptor outer segment phagocytosis in iPS-derived RPE cells. Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 53 (10), 6282-6290 (2012).
  27. Zarbin, M. A. Current concepts in the pathogenesis of age-related macular degeneration. Arch. Ophthalmol. 122 (10), 598-614 (2004).
  28. Li, Y., et al. Long-term safety and efficacy of human-induced pluripotent stem cell (iPS) grafts in a preclinical model of retinitis pigmentosa. Molecular Medicine. 18, 1312-1319 (2012).
  29. Wang, N. K. Transplantation of reprogrammed embryonic stem cells improves visual function in a mouse model for retinitis pigmentosa). Transplantation. 89 (8), 911-919 (2010).
  30. Ramsden, C. M. Stem cells in retinal regeneration: past, present and future. Development. 140 (12), 2576-2585 (2013).
  31. Schwartz, S. D. Embryonic stem cell trials for macular degeneration: a preliminary report. The Lancet. 379 (9817), 713-720 (2012).
  32. Carr, A. J. Development of human embryonic stem cell therapies for age-related macular degeneration. Trends in Neurosciences. 36 (7), 385-395 (2013).
  33. Westenskow, P., Friedlander, M. Ch. 111. The New Visual Neurosciences. Werne, J. S., Chalupa, L. M. , The MIT Press. Cambridge, MA. 1611-1626 (2013).
  34. Westenskow, P., Sedillo, Z., Friedlander, M. Efficient Derivation of Retinal Pigment Epithelium Cells from iPS. J. Vis. Exp. , Forthcoming Forthcoming.
  35. Furhmann, S., Levine, E. M., Friedlander, M. Extraocular mesenchyme patterns the optic vesicle during early eye development in the embryonic chick. Development. 127 (21), 4599-4609 (2000).
  36. Lu, B. Long-Term Safety and Function of RPE from Human Embryonic Stem Cells in Preclinical Models of Macular Degeneration). Stem Cells. 27 (9), 2126-2135 (2009).
  37. Zhao, T., Zhang, Z. -N., Rong, Z., Xu, Y. Immunogenicity of induced pluripotent stem cells. Nature. 474 (7350), 212-215 (2011).
  38. Eberle, D., Santos-Ferreira, T., Grahl, S., Ader, M. Subretinal transplantation of MACS purified photoreceptor precursor cells into the adult mouse retina. Journal Of Visualized Experiments. , e50932(2014).
  39. Huber, G. Spectral domain optical coherence tomography in mouse models of retinal degeneration. Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 50, 5888-5895 (2009).
  40. Kim, K. H. Monitoring mouse retinal degeneration with high-resolution spectral-domain optical coherence tomography. Journal of Vision. 53 (8), 4644-4656 (2008).
  41. Pennesi, M. E. Long-term characterization of retinal degeneration in rd1 and rd10 mice using spectral domain optical coherence tomography. Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 53, 4644-4656 (2012).
  42. Fisher, S. K., Lewis, G. P., Linberg, K. A., Verardo, M. R. Cellular remodeling in mammalian retina: results from studies of experimental retinal detachment. Progress in Retinal And Eye Research. 24 (3), 395-431 (2005).
  43. Hu, Y. A novel approach for subretinal implantation of ultrathin substrates containing stem cell-derived retinal pigment epithelium monolayer. Ophthalmic Research. 48 (4), 186-191 (2012).
  44. Diniz, B. Subretinal implantation of retinal pigment epithelial cells derived from human embryonic stem cells: improved survival when implanted as a monolayer. Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 54 (7), 5087-5096 (2013).

액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.

재인쇄 및 허가

태그

망막하 주입설치류 안구 수술세포 전달 기술둔침 주입예침 천자생체 내 영상화공초점 주사 안저검사광간섭 단층촬영세포 현탁액 조제
서스펜션에 망막 색소 상피 세포를 제공하기 위해 설치류에서 망막 주사를 수행
문의하기
도서관에 추천하기

개인정보 처리방침

이용 약관

정책

저작권 © 2026 MyJoVE Corporation. 모든 권리 보유.