급성 뇌 조각에서 신경 세포의 미세 회로의 전기 생리 및 형태 학적 특성은 페어 패치 클램프 녹음을 사용하여

Guanxiao Qi; Gabriele Radnikow; Dirk Feldmeyer

doi:10.3791/52358

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방법 논문

급성 뇌 조각에서 신경 세포의 미세 회로의 전기 생리 및 형태 학적 특성은 페어 패치 클램프 녹음을 사용하여

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DOI:

10.3791/52358

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2015년 1월 10일

Guanxiao Qi¹ , Gabriele Radnikow¹ , Dirk Feldmeyer¹^,²

¹Institute of Neuroscience and Medicine (INM-2), Research Centre Jülich, ²Department of Psychiatry, Psychotherapy and Psychosomatics, Medical Faculty, JARA, RWTH Aachen University

이 논문에서

요약

급성 뇌 절편에서 시냅스로 결합된 뉴런의 패치 클램프 기록 및 동시 세포 내 바이오사이틴 충전을 통해 구조적 및 기능적 특성의 상관 분석을 수행할 수 있습니다. 이 프로토콜의 목적은 뉴런 미세 회로에서 전기생리학적 기록의 필수 기술 단계와 후속 형태학적 분석을 설명하는 것입니다.

초록

동시에 세포 내 biocytin 충전 급성 뇌 조각 준비에 두 개 (또는 그 이상)의 시냅스 결합 뉴런 (쌍 녹음)에서 패치 클램프 녹음의 조합은 구조적 및 기능적 특성의 상관 분석을 할 수 있습니다. 이 방법으로 그들의 형태 및 전기 생리 학적 반응 패턴에 의해 모두 사전 및 시냅스 후 뉴런을 식별하고 특성화 할 수있다. 쌍으로 녹음이 뉴런 사이의 연결 패턴뿐만 아니라 모두 화학 및 전기 시냅스 전송의 특성을 연구 할 수 있습니다. 여기서, 우리는 신경 세포 형태의 최적의 복구와 함께 안정적인 페어링 녹화를 얻기 위해 필요한 절차를 단계별로 설명을 제공한다. 우리는 화학적 시냅스 또는 갭 접합을 통해 연결된 뉴런의 쌍 뇌 슬라이스 준비에서 확인하는 방법을 설명합니다. 우리는 뉴런 dendrit 그들의 3 차원 형태를 얻기 위해 재구성 방법을 간략하게 설명 할 것이다IC와 축삭 도메인과 방법 연접 식별 및 지역화됩니다. 우리는 또한 특히 뇌 조각의 준비 기간 동안 수지상 축삭 잘림과 관련된 사람들은이 강하게 연결 추정 영향을 미치므로, 한 쌍의 기록 기술의주의 사항 및 제한 사항에 대해 설명합니다. 그러나, 한 쌍의 기록 방법의 다양성으로는 뇌에서 확인 된 신경 세포의 미세 회로에서 시냅스 전달의 다양한 측면을 특성화에 유용한 도구로 유지됩니다.

서론

두 개의 뉴런 사이의 시냅스 결합 미소 신경은 뇌에서 대규모 네트워크의 구성 블록과 시냅스 정보 처리의 기본 단위이다. 이러한 신경 미세 회로의 특성을위한 전제 조건은 형태학 및 사전 및 시냅스 후 뉴런 파트너 모두의 기능적 특성, 시냅스 연결 (들) 및 그 구조 및 기능적 메커니즘의 유형을 아는 것이다. 그러나 시냅스 연결의 많은 연구에 저항기의 뉴런의 적어도 하나의 특징이 잘되지 않는다. 이것은 종종 시냅스 연결의 연구에 사용 비교적 비특이적 자극 프로토콜의 결과. 따라서 시냅스 전 뉴런의 구조적 및 기능적 특성은 모두 하나 또는 단지 약간 작은 정도로 식별되지 않은 (즉, 마커 단백질의 발현 등). 마커들에 의해 세포 내 염색과 함께 짝을 녹음biocytin, neurobiotin 또는 형광 염료 UCH는 작은 신경 세포의 미세 회로를 공부에 더 적합하다. 이 기술은 사람이 동시에 형태학 식별 시냅스 연결의 구조적 및 기능적 많은 파라미터를 조사 할 수있다.

두 개의 뉴런 사이의 소위 '단일'monosynaptic 연결은 급성 슬라이스 준비를 사용하여 두 피질 및 피질 뇌 영역 ^1-10 조사되었다. 먼저, 날카로운 미소 전극은 이들 실험에 사용 하였다;....