마우스의 얼굴 신경 Axotomy : 부상으로 운동 신경 응답을 연구하는 모델

요약

마우스의 안면 신경을 절개하거나 으깬 축삭 절개술을 수행하는 방법을 자세히 설명하는 수술 프로토콜을 제시합니다. 안면 신경 축삭 절개술은 신경 손상에 대한 생리적 반응을 연구하고 치료 기술을 테스트하는 데 사용할 수 있습니다.

초록

이 수술 프로토콜의 목표는 stylomastoid 난원에서의 출구에서 얼굴 근육을 innervates 안면 신경을, 노출 및 중 하나를 절단 또는 말초 신경 손상을 유도하기 위해 그것을 분쇄하는 것입니다. 이 수술의 장점은 이와 다른 신경 손상 모델에 비하여 비교적 가벼운 수술 결과 결과, 단순성, 재현성 및 후속 안면 마비에서 중요한 기능이나 이동성에 효과가 부족하다. 뇌 신경 손상 모델을 사용하는 주요 장점은이 운동 신경원 운동 신경 세포체 연구를 단순화 뇌교에서 안면 모터 핵 비교적 균질 한 집단에 존재한다는 것이다. 때문에 안면 신경의 신경 분포의 대칭성과 안면 모터 핵 사이의 크로스 토크의 부족, 동작 unaxotomized 사이드 페어링 내부 제어로서 일방적으로 수행 될 수있다. 분석의 다양한 엉덩이에 수술을 수행 할 수 있습니다이 문서의 범위를 벗어 그 세부 사항의 생리적 반응이야. 예를 들어, 근육 기능의 회복을위한 행동 reinnervation 마커로서 기능하거나, 운동 신경원은 세포 생존을 측정하기 위해 정량화 될 수있다. 또한, 운동 신경원 정확하게 분자 분석을위한 레이저 미세 절제를 사용하여 캡처 할 수 있습니다. 안면 신경 axotomy 침습 및 내약성이기 때문에, 유전자 변형 마우스의 다양한 상에 이용 될 수있다. 또한,이 모델은 수술 말초 신경 손상의 치료 효과를 분석하는데 사용될 수있다. 안면 신경 손상뿐만 아니라 운동 신경원을 조사하는 수단을 제공하지만, 중추 및 말초 미세 교세포, 면역계 및 목표 근육의 응답도. 안면 신경 손상 모델은 신경 손상과 재생을 연구하기위한 강력한 도구 역할을 널리 말초 신경 손상 모델이다.

서론

많은 말초 신경 손상 모델은 존재하지만, 운동 신경원의 연구를 위해 눈에 띄는 사람은 얼굴 신경 axotomy 모델입니다. 또한 뇌신경 VII로 알려진 안면 신경은 뇌교에서 유래와 얼굴 표정 ^1,2의 근육을 innervates. 이 수술 프로토콜에서 안면 신경은 stylomastoid 난원에서의 출구에 노출 자르거나 분쇄 중 하나입니다. 신경 손상의 중증도 순차 축삭 다발 감싸는 결합 조직층 인 축삭 endoneurium, 신경 외피 및 epineurium의 intactness에 기초하여 부상 차별화 랜드 ⁽³⁾ 분류, 다음 분류 될 수있다. 압박 손상 (axonotmesis)에서 축삭이 절단되지만, 신경 외피와 epineurium가 유지됩니다. 그대로 신경초가 축삭은 ^4,5를 자라게하는 내 도관 역할을하기 때문에 안면 신경 호감에서 완전한 기능 회복은 약 11 일 만에 발생합니다. 에다른 한편으로는, 절단 손상 (neurotmesis)에서 축삭 3 결합 조직층이 절단되고, 전체 말초 신경 근육 신경 분포를 복원 자라게한다. epineurium의 외과 재 연결이 자주 신경 절개 부상과 인간의 환자에서 수행하지만 복구 결과는 드물게 최적입니다. 또한이 연구는 신경 목표로 자라게 못하고 어떤 치료법이 개선 회생 프로세스를 가속화하기 위....

프로토콜

실행 모든 절차는 의학 기관 동물 관리 및 사용위원회의 인디애나 대학의 승인을 건강 지침의 국립 연구소 따릅니다.

1. 수술 기법

1. 멸균 장갑, 악기, 그리고 NIH 가이드 라인 ^(25)에 따라 멸균 수술 필드를 사용하여이 절차를 수행하는 동안 무균 기술을 유지한다. 를 오토 클레이브에 의해 수술을 시작하기 전에 도구를 소독 (전체 목록은 특정 시약 / 장비의 표 참조). 작업 중에 도구를 소독 유리 구슬 살균기를 사용합니다.

2. 마취 및 준비

1. 수의학 이소 플루 란 기화기 시스템을 이용하여 0.9 L / 분의 산소 및 2.5 %의 이소 플루 란 혼합물로 마취 상자에 마우스를 마취. 마우스가 상자에서 제거하기 전에 몸의 위치 변화에 응답하지 않습니다 있는지 확인하십시오.
2. 양해 각서 (MOU)에 안과 연고를 적용그 자체의 눈이 마르지을 보호 할 수 있습니다.
3. 코 콘에있는 상자에서 가스 흐름을 전환합니다. 콘 내부의 코와 입으로 수술 패드와 흡수 벤치 종이로 덮여 가열 패드의 왼쪽에 정면으로 마우스를 놓습니다. 지속적으로 마우스의 호흡 리듬과 속도를 모니터링하....

결과

안면 신경 axotomy이 수행 된 후, 운동 신경 손상 손실의 결과로 발생한다. 손상 후 운동 신경 생존은 모두 운동 신경 생존 데이터를 요약 성별, 수술시 동물의 연령, 운동 신경 카운트가 완료되는 평가시기 및 모란 그래버 검토 ^(24)과 진노와 야마다 리뷰 ⁽²²⁾ 등 많은 변수에 따라 달라집니다. 일반적으로 운동 신경원의 약 86 %는 사후 axotomy ^14,15,26 이십팔일에서 살아 남기. 운동 신경 손실의 속도론은 Serpe 등의 알에 설명되어 있습니다. 2000 년 그림 1은 여러 유전자 ​​변형 생쥐에서 운동 신경 생존의 변화를 보여줍니다. 유의 한 차이는 유전 적 변화는베이스 라인 계산에 영향을주지 않는 것을 나타내는, 제어 측의 안면 운동 신경 카운트에서 관찰되지 않습니다. 상당한 세포 손실은 마우스 모델에서 관찰된다 (도 1a, D 84 % ± 2.0) .......

토론

이 프로토콜의 중요한 단계는 수술이 시작되기 전에 마우스를 적절하게 배치하는 것입니다. 마우스가 옆으로 평평하게 누워 있지 않거나, 귀가 올바른 각도로 테이프로 붙어 있지 않거나, 절개가 잘못된 위치에 있으면 안면 신경을 찾는 것이 훨씬 더 어려워집니다. 이 기술을 숙달하면 마우스당 수술이 몇 분 밖에 걸리지 않습니다.

봉합사, 접착제 또는 상처 클립을 사용하여 상처를 봉합할 수 있습니다. 상처 클립은 절개 크기가 작고 적용할 수 있는 속도 때문에 선호됩니다. 우리는 상처 클립을 사용하고 쥐를 함께 수용하면 수컷이 함께 수용된 수컷이 종종 케이지메이트의 상처 클립을 제거하여 수술 부위에 감염을 일으키기 때문에 암컷 마우스가 수컷 마우스보다 더 잘 지내는 것으로 확인했습니다.

부상을 유발하기 위해 신경을 따라 위치를 변경하는 등 부상을 수정할 수 있습니다. 예를 들어, 상처는 안면 신경의 가지 중 하나를 따라 투여될 수 있다(

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
실체 현미경	Leica	M60
라벨링 테이프	Fisher Scientific	15-952
Vannas-Tü Bingen 스프링 가위 - 스트레이트/샤프/8.5 cm/5 mm 커팅 엣지	Fine Science Tools	15003-08	사용 전 살균
Dumont #5/45 펜치 - 표준 팁/각도 45도;/Dumoxel/11 cm	Fine Science Tools	11251-35	사용 전 살균
Michel 봉합 클립 - 7.5 mm x 1.75 mm	Fine Science Tools	12040-01	프로토콜에서 "wound clip"으로 설명됨, 사용 전 살균
Hagenbarth 크로스 액션 상처 클립 어플라이어 5"	George Tiemann & Co	160-910	상처 클립을 적용하는 데 사용되며, 사용 전에 살균하십시오
Michel 봉합 클립 애플리케이터 & 리무버 - 7.5mm 클립용	Fine Science Tools	12029-12	상처 클립을 제거하는 데 사용
0.9% 염화나트륨 주사, USP	Hospira	0409-4888-10
베타딘, 16 oz, 디스펜서 포함	Fisher Scientific	19-027132
70% 에탄올
유리 구슬 살균기