우리는 인간의 유방암에서 호르몬 작용을 연구하기위한 새로운 생체 모델을 개발했다. 이 조직 구조, 세포 간 상호 작용 및 분비 신호를 보존 수술 유방 조직 표본으로부터 분리 미세 조직에 기초한다.
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정오 공지
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요약
초록
인간의 유방암에서 호르몬 작용의 연구는 적절한 모델 시스템의 부족에 의해 방해되었다. 체외 배양시, 일차 유방 상피 세포는 호르몬 수용체 발현을 잃어버린다. 널리 사용되는 호르몬 수용체 양성 유방암 세포주는 생체 내 상황에 한정 관련이있다. 여기서 우리는 인간의 유방암에서 호르몬 작용을 연구하는 생체 모델을 설명합니다. 이러한 환원 mammoplasties mammectomies 같은 수술 또는 폐기 물질로부터 신선한 인간 유방 조직 표본 기계적 및 효소 적 덕트 및 소엽 복수 간질 세포 유형을 함유 조직편을 수득 소화된다. 성장 인자없이 기본 배지에서 유지 이러한 미세 조직은 세포 간 접촉, 조직 구조를 보존하고, 며칠 동안 반응 호르몬 남아있다. 그들은 쉽게 RNA 및 단백질 추출, 조직 학적 분석을 위해 처리 또는 중간 동결에 저장됩니다. 형광활성화 된 세포 분류 (FACS)는 특정 세포 집단을 위해 농축하는데 사용될 수있다. 이 프로토콜은 매우 복잡, 다양한 인간의 표본과 번역 연구에 대한 간단한 표준 접근 방식을 제공합니다.
서론
유방암 돌연변이 프리 대한 정보는 빠른 속도로 증가하고있다. 덜주의 유방암 개발 영향 전신 요인에 지불되고있다. 생식 호르몬에 노출되면 질병의 진행 1-3에 큰 영향을 미친다. 그러나, 생식 호르몬은 인간의 가슴에 충돌하는 메커니즘을 제대로 이해하고있다. 유전자 조작 마우스 모델에 대한 작업은 여러 다운 스트림 이펙터 (4)를 통해 세포 고유 및 분비 신호를 포함하는 것으로 밝혀졌다.
인간의 유방암에서 호르몬 작용에 대한 제한된 지식은 적절한 모델의 부족에 주로 기인한다. 에스트로겐 수용체 (ER) 및 프로게스테론 수용체 (PR)의 시그널링 메커니즘에 대한 대부분의 작업은 MCF-7 및 T47D와 같은 호르몬 수용체 양성 유방암 세포주, 수행되었다. 이러한 alrea했다 고급 유방암 환자에서 흉막 삼출에서 파생 된DY 여러 치료 (5)을 받았다. 인간의 유방의 단순한 체외 모델에서 연구 결과의 생물학적 관련성이 체외 모델에서 확인 된 의심과 대상 유전자 인 아르 동물 모델 (6)에서 식별 표적 유전자 다릅니다. 일차 인간 유방 상피 세포가 시험 관내에서 배양 할 때 그 호르몬 수용체 발현 따라서 호르몬 응답
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프로토콜
일반적인 고려 사항 : 시간의 앞서, 윤리 프로토콜을 설정은, 환자에 대한 설문 조사를 준비하고 임상 인력을 훈련하는 방법을 참조하십시오. 감소 mammoplasty 수술의 자료를 사용하기 전에 권한을 조달하고, 환자의 동의를 확인합니다. 조직은 전염성 따라 처리 될 필요가있다. 실험 암 연구 스위스 연구소 -이 프로토콜은 ISREC의 윤리위원회에 의해 승인되었다.
1. 조직 복구, 처리 및 바이오 뱅킹
바이오 뱅킹을위한 최적의 샘플의 품질을 향상시키기 위해, 다수의 단계는 실험실로 운반하기 전에 병원에서 실시된다.
병원에서 :
- 필요한 경우, 감소 mammoplasty 수술과 혈액 샘플에서 무균 조건 하에서 인간의 유방 조직을 얻습니다. 조직은 악성 병변의 존재를 배제하는 샘플 것 병리학 자에 의해 검토 될 필요가있다.
- 유방 t 배치멸균 보드에 후드를 발행하고 가위, 수술 메스 이미 증기 멸균기로 멸균 집게를 준비합니다. 엽니 다 메스를 사용하여 유방 조직의 다른 사이트에 깊은 상처를 확인합니다. 인간의 유방 조직에서 노란색 지방 조직에 포함 된 덕트 및 소엽, 구성 흰색 가닥을 찾습니다.
참....
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결과
에스트로겐과 프로게스테론의 역할을 연구하기 위해 더 나은 인간의 가슴에 자신의 분자 기능을 이해하기 위해, 우리는 그들의 동의를 얻은 후 감소 mammoplasties (그림 1)을받은 환자에서 신선한 인간의 유방 조직 표본을 수집합니다. 또한 환자의 의료 이력 및 생식뿐만 아니라 수술시의 혈청 프로게스테론 수준을 결정하기 위해 혈액 샘플을 얻었다. 신선한 감소 mammoplasties에서 조직 기계적 및 효소 분해된다. 그 결과 조직의 미세 구조는 원점 (그림 2A)의 유방 조직의 특성 덕트 및 소엽 있습니다. 아가로 오스와 근 상피 마커 ΔNp63 (그림 2B) 스테인드 파라핀 조직의 미세 구조의 면역 조직 화학적 분석은 미세 정상적인 유방 조직의 형태 학적 특성뿐만 아니라 CEL의 분자 프로파일뿐만 아니라 유지하는 것이 공개L 인구.
호르몬 반응을 평가하기 위해, 조직은 미세 합성.......
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토론
여기에 설명 된 생체 외 배양은 일반적으로 인간의 여성 유방 검색된 다른 세포 유형과 함께 그대로 덕트 및 소엽을 함유 유방 조직의 미세 구조를 제공한다. 일반적 환원 mammoplasties로부터 얻어진 인간 유방 조직의 처리에서는, 지방 조직, 간질 행렬의 기계적 및 효소 적 분해, 및 적혈구의 용해 제거 유관 단편과 단말 유관 소엽 단위 풍부. 우측 기간 동안 오른쪽 농도 부드러운 효소 소화, 미세 조직이 그대로 유지되도록 복수 종류의 세포를 유지하고 주로 세포 외 기질을 유지하는 것이 필수적이다. 주의 빠르게 한 번 환자에서 분리 한 조직 처리에 지불해야한다. 환자 샘플은 크게 변화하고 기계적 및 소화 효소가 연장 될 필요가 있으며, 그리고 / 또는 조직 콜라겐 함량이 특히 높은 경우에는 여분의 효소를 첨가 할 필요가있다.
마이크로 구조체가 최대 6 일 동안 90 %의 생존을 유지하지만,이 모델은 장기 자극 호르몬에 대한 제한을 갖는다. 상이한 세포 유.......
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공개 사항
저자가 공개하는 게 없다.
감사의 글
저자는 mammoplasty 사진을 제공하는 로잔 대학 병원의 M. 피시 감사, M. 워스와 실험 암 연구 스위스 연구소, 연구 분자 종양학의 경쟁력 국립 센터, 생명 과학 대학, 에콜 폴리 테크닉 대학 Fédérale 드의 A. Ayyanan 중요한 의견 맨체스터 대학의 기술 지원을위한 로잔 R. 클라크. 이러한 결과로 이어지는 연구는없는 보조금 계약에 따라 SNF3100A0-112090, Oncosuisse 531817, 그리고 혁신적인 의약품 이니셔티브 공동 된 기업의 지원을 받고있다. 유럽 연합 (EU)의 일곱 번째 프레임 워크 프로그램 (FP7 / 2007년부터 2013년까지)과 현물의 제약 산업 및 연관 기업의 유럽 연맹의 재정적 기여로 구성되어 자원이있는 115,188. 혁신적인 의약품 이니셔티브의 웹 주소는 http://www.imi.europa.eu/ . ....
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 마이크로리터 원심분리기 | Heraeus Biofuge 프레스코 | 75005521 | |
| 원심분리기 5810R | Eppendorf | 5810 000.327 | |
| Cryobox | Nalgene | 5100-0001 | |
| 제어된 비율 냉동고 EF600 그랜트 | 점근선 | EF600 | |
| CO2 인큐베이터 | Hera Cell Heraeus | 51022391 | |
| 롤러 믹서 SRT9D | Sturt | SRT9D | |
| 조직학 카세트 | Medizintechnik | 81-0021-00 | |
| 세포 여과기 | Falcon | 352340 | |
| Strile 수술용 칼날 | 에스큘랩 | BB536 | |
| 메스 | Aesculap | BB084R | |
| 펜치 | Aesculap | BD047R | |
| 가위 | Aesculap | BC374R | |
| 파라핀 베이스 몰드 | SAKURA | 4166 | |
| 최적 절단 온도 (OCT) 크라이오매트릭스 | 열과학 | 6769006 | |
| 페니실린/스트렙토마이신 | Life Technologies | 15070-063 | |
| 항생제/항진균제 | Life Technologies | 15240-062 | |
| DMEM F/12 | Life Technologies | 11039-021 | Prewarm (37 ° C) |
| 콜라겐 분해 효소 | Roche | 11 088 793 001 | 예열 (37 ° C) |
| Fetal Bovine Serum | Life Technologies | 10270 | Fetal Calf Serum |
| Cell Blood Lysis Buffer | Sigma | R7757 | |
| Dimethyl sulfoxide (DMSO) | Sigma | D2650 | |
| Trypsin-EDTA | Life Technologies | 15400-054 | |
| Agarose | Invitrogen | 16500-500 | |
| 으로 교체 가능포름알데히드 | 시그마 | F1635 | |
| 파라포름알데히드 | 로스 | 335 | |
| 이소펜탄 | 시그마 | M32631 | |
| 에탄올 | 머크 | 1009831000 | |
| 극저온 바이알(5.0ml) | VWR, International | 479-0820 | |
| 초저 부착 배양 접시 | Corning, NY 14831 | 3471 |
참고문헌
- Beral, V. Breast cancer and hormone-replacement therapy in the Million Women Study. Lancet. 362 (9382), 419-427 (2003).
- MacMahon, B., et al. Age at first birth and breast cancer risk. Bull World Health Organ. 43 (2), 209-221 (1970).
- Pike, M. C., Krail....
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재인쇄 및 허가
정오
Formal Correction: Erratum: An Ex Vivo Model to Study Hormone Action in the Human Breast
Posted by JoVE Editors on 2/01/2015. Citeable Link.
A correction was made to An Ex Vivo Model to Study Hormone Action in the Human Breast. There was an error with the author, Marie Shamsheddin's, name. The author's name has been corrected to:
Marie Shamseddin
instead of:
Marie Shamsheddin
