동맥 재 협착의 쥐 모델 : 대퇴 와이어 부상의 기술적 측면

요약

재 협착 마우스 대퇴 동맥 와이어 손상 모델 기술적 도전이다. 이 프로토콜에서 우리는 성공적으로 재 협착의 연구에 대한 일관성있는 신생 내막을 유도하는 와이어 부상을 수행하기위한 주요 기술 세부 사항은 필수 보여줍니다.

초록

아테롬성 동맥 경화증으로 인한 심장 혈관 질환은 선진국에서 사망의 주요 원인이다. 동맥 경화 반으로 인해 개발 성립 플라크 파열로, 혈관 내강 좁아, 심근 경색이나 뇌졸중 등의 각종 합병증 선도 정상적인 혈류를 중단. 이러한 혈관 성형술과 같은 병원 혈관 절차에서 일반적으로 루멘을 다시 수행한다. 그러나, 이러한 치료법은 필연적 과도한 치유 반응과 혈관 재 협착 (재 협착)을 일으키는 루멘 내로 연장 내막 플라크의 발전을 유발, 혈관 벽뿐만 아니라, 혈관 내피 세포를 손상. 재 협착은 동맥 경화 혈관 내 치료 실패의 주요 원인이 남아있다. 따라서, 재 협착의 전임상 동물 모델은 병진 혈관 개입 접근법뿐만 아니라 병리 생리 학적 메카니즘을 조사하는 매우 중요하다. 여러 쥐 experime 중이 밀접하게 내피 세포와 혈관 벽을 모두 상해를당한 혈관 성형술 절차를 닮았다고 ntal 모델은 대퇴 동맥 와이어 부상 널리 후 혈관 성형술 재 협착의 연구에 가장 적합한으로 허용됩니다. 그러나, 많은 연구자들은 기술적 난이도 높은 수준으로이 모델을 사용하는 어려움이있다. 이 금속 선재가 눈에 띄는 신생 내막을 유도하기에 충분한 손상을 생성하기 위해, 약 와이어보다 3 배 더 얇은 대퇴 동맥에 삽입 될 필요가 있기 때문에 주로이다. 여기서 우리는 효율적으로이 모델의 주요 기술적 인 어려움을 극복하기 위해 필수적인 외과 세부 사항을 설명합니다. , 제시된 절차에 따라 수행함으로써 마우스 대퇴 동맥 와이어 부상이 쉽게된다. 친숙하면 전체 공정을 20 분 내에 완료 될 수있다.

서론

다양한 심혈관 질환에 대한 혈관내 치료의 적용이 확대되는 시대에 혈관성형술 후 재협착은 이러한 치료를 받는 환자에게 가장 큰 문제 중 하나입니다. 혈관성형술 시 혈관 내피의 손상은 죽상경화성 배경과 함께 내측층에서 과도한 평활근 세포 증식을 유도하여 신생아 증식을 초래합니다. ^1,2 따라서 혈관성형술 후 신내막 증식을 재현하는 실행 가능한 동물 모델은 질병 메커니즘의 조사뿐만 아니라 이 병리를 치료하기 위한 효과적인 치료법의 개발에도 중요합니다.

Mice는 다음과 같은 이유로 신내막 증식을 재현하는 훌륭한 모델 동물을 나타냅니다 : 실험 마우스의 유전 적 배경은 잘 확립되어 있습니다.다양한 유전자 변형 균주를 사용할 수 있습니다. ² 동일한 배경의 리터메이트를 얻는 것은 쉽습니다. 그리고 동물의 비용은 상대적으로 저렴합니다. 동맥 결찰 모델(arterial ligation model)과 와이어 손상 모델(wire injury model)은 기계적으로 유도된 신내막 증식증의 가장 흔한 두 가지 마우스 모델입니다. 동맥 결찰 모델은 만들기가 쉽지만 실제 혈관 성형술 절차와 생리학적으로 다릅니다. 와이어 손상 모델은 실제 혈관 성형술 절차를 밀접하게 모방하지만 마우스 동맥의 크기가 작기 때문에 기술적으로 어렵....

프로토콜

참고 : 윤리 문 : 모든 절차는 위스콘신 대학에서 기관 동물 케어 및 사용위원회에 의해 승인 된 실험 동물의 관리 및 사용을위한 설명서 (국립 아카데미 프레스, 8 판, 2011), 및 프로토콜을 준수합니다. 모든 수술 (유량 2 mL / 분, 흡입을 통해) 이소 플루 란 마취 하에서 수행하고, 모든 노력은 고통을 최소화 하였다. 동물은 점차적으로 CO _2로 채워진 챔버에서 안락사시켰다.

전신 마취 및 피부 절개 1. 유도

1. 23-28g의 12-16주의 나이와 무게 남성 C57BL / 6 마​​우스를 사용합니다. 폐회로 마취 장치를 통해 이소 플루 란으로 마취 동물. 그 발가락을 곤란하게하여 적절한 마취를 확인합니다. 건조 함을 방지하기 위해 눈에 일부 인공 눈물 연고를 적용합니다.
2. 약간 납치 왼쪽 뒷다리와 무릎 관절 SL와 부정사 위치에 마우스를 놓습니다ightly 근육이 수축. 왼쪽 허벅지 지역 주변의 머리를 면도하고 클로르헥시딘으로 피부를 소독, 멸균면 팁 어플리케이터를 사용하여 세 번인가. 수술 중 멸균 악기를 유지하기 위해 뜨거운 구슬 살균기를 사용합니다.
3. 왼쪽 다리를 통해 멸균 거즈 드레이프를 놓습니다. 사타구니 (그림 1A)에

결과

수술을 다음과 같은 네 가지 주, 와이어 부상 대퇴 동맥을 수확하고 신생 내막 형성을 분석하는 파라핀 블록 표본을합니다. 상술 한 바와 같이 전신 마취를 유도한다. 바로 가슴을 열고 좌심실에 20 게이지 나비 바늘을 삽입합니다. 주입 병에 선을 연결합니다. 4 % 파라 포름 알데히드 (일반적으로 10 ~ 20 ml의 각) 다음 PBS의 점적 주입을 통해 관류 고정을 수행합니다. 동물은 다음 와이어 부상 CFA를 꺼내 4 ℃에서 하룻밤 4 % 파라 포름 알데히드에서 수정 20 분 동안 생리 pressure.Wait에서 관류되도록 주입 병은 심장 수준보다 약 140cm 이상 배치됩니다. 표준 조직 학적 기법을 이용하여 시료의 파라핀 블록을 만들어 조직 학적 염색을 위해 5 ㎛의 두께의 단면을 준비한다.

헤 마톡 실린 - 에오신 염색 와이어 부상 F 내부 신생 내막 형성의 명확한 시각화를 수emoral 동맥 (그림 3A, 와이어 부상 .......

토론

와이어 부상 절차는, 우리가 12~16주의 연령 수컷 C57BL / 6 마우스를 사용하는만큼 그 해부학 적 구조가 유사한 된 바와 같다.이 논문 ⁴ 생쥐 균주 모두에 적용 가능하다. 우리가 우리의 예비 연구에서 배운 바와 같이 10 주 미만 쥐의 대퇴 동맥은 종종 와이어 삽입은 매우 도전 너무 작습니다. 한편, 16주보다 이전 마우스에서 와이어 삽입 기술적 쉽지만 이상의 가변 신생 내막 과형성 초래하는 경향이있다. 여성 마우스는 남성보다 적은 신생 내막 형성을 초래하는 경향이있다. 와이어 부상 절차 대퇴 동맥의 양쪽에서 수행 될 수 있지만, 우리는 때문에 우원 사업자 해부학 접근성 왼쪽을 선호한다.

후 혈관 성형술 재 협착의 모든 마우스 모델 중 동맥 와이어 부상은 대부분 밀접하게. 내피 발가 벗김과 혈관 벽 overstreching에 의한 혈관 성형술을 모방이 ^2,5,6대퇴 동맥과 경동맥 : 2 와이어 부상에 대한 주요 대상 동맥이다........

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
고정 코어 와이어 가이드	쿡	G02426	직경 0.015인치, 직선
팽창 집게	Roboz	RS-4927	곡선, 뭉툭한 팁
Dumont Tweesers #5	World Precision Instruments	14095	직선, 날카로운 팁
Dumont Vessel 캐뉼레이션 집게 세계	정밀 기기	503373
McPherson-Vannas 가위	World Precision Instruments	501234
모기 집게	Precision Instruments	501291
Ethilon Nylon Suture 9-0	Ethicon	7717G	9-0, Black Nylon Monofilament
Micro ARO슈트처, 멸균 11-0, 70마이크로미터, MET Point	ARO수술	VT4A00N07	11-0, 블랙 나일론 모노필라멘트
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