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방법 논문

두뇌 활동의 중규모 넓은 필드 광학 이미징에 대한 큰 측면 개두술 절차

12.1K 조회수

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DOI:

10.3791/52642

⸱

2017년 5월 7일

 ,  ,  ,  , 

* These authors contributed equally

이 논문에서

요약

이 프로토콜은 마우스 대뇌 피질의 시간과 정수리 영역에 걸쳐 큰 일방적 개두술을 만들기위한 방법을 제시한다. 이것은 대뇌 피질 반구의 광대 한 지역에 걸쳐 실시간 영상에 특히 유용합니다.

초록

개두술은 생체 실험을 위해 뇌를 노출 일반적으로 수행 절차입니다. 마우스 연구에서 대부분의 실험실은 작은 개두술, 일반적으로 3mm X 3mm를 사용합니다. 이 프로토콜은 마우스 시간적 두정 피질 위에 대뇌 반구의 대부분을 노출시키는 대략 큰 7mm × 6 mm 두개 창을 생성하는 방법을 소개 (- 폭 4.5 mm - 0 6mm 예 2.5 정수리). 이 수술을 수행하려면, 머리는 약 30 ° 기울어해야하며, 시간적 근육의 대부분은 철회되어야한다. 때문에 뼈 제거의 많은 양이 절차는 수술과 실험을하는 동안 마취 동물 급성 실험을위한 것입니다.

혁신적인 많은 측면 창 두개의 주요 장점은 피질 모두 내측 및 외측 영역에 대한 동시 액세스를 제공하는 것이다. 이 대형 일방적 두개골 창은 세포 사이의 신경 역학을 연구하는 데 사용할 수 있습니다,다 전극 전기 생리 학적 녹음, 신경 활동 ( 예 : 내인성 또는 외인성 영상)의 영상화, 및 광 생성 자극을 조합하여 다른 피질 영역 사이에서도 가능합니다. 또한,이 큰 craniotomy은 대뇌 피질의 vasculature의 직접적인 조작을 허용 대뇌 피질 혈관의 큰 영역을 노출합니다.

서론

개두술 뇌의 일부분을 나타 내기 위해 신경 과학자들에 의해 사용되는 표준 절차이다. 전기 생리학의 새벽 이후, 개두술는 신경 과학 분야에서 전례없는 혁신을 허용했다. 전극 대뇌 피질의 밀도 매핑은이지도를 기반으로 실험 테스트 가설과 이론을 주도하고있다. 우리는 최근 개두술이 노출 된 영역 (5, 6), (7) 내 피질 활성의 실시간 시각화를 가능 피질 혈류 1, 2, 3 및 신경 혈관 구조 (4)의 생체 내 촬영에 이용되는 새로운 시대를 입력. 많은 연구 구조 및 피질 뉴런, 아교 세포의 기능 및 고전 공부 생체 내 광 이미징 기술과 결합 craniotomies를 사용하지만tical 혈관 (8, 9), 상기 조사에 노출 피질의 작은 면적에 의해 제한 (그러나

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프로토콜

다음 프로토콜은 레스 브리지 동물 관리위원회의 대학 (ACC) 가이드 라인을 다음과 동물 관리에 캐나다위원회 (CCAC)의 기준에 따라 수행한다.

1. 준비

  1. 장기간의 연구 기간 동안, 열려있는 모든 수술 소모품을 압력솥하고 불임 수술 동안 유지되어 있는지 확인합니다. 여러 수술이 필요한 경우 수술 사이의 오토 클레이브.
  2. 한편 뇌 버퍼 많은 (적어도 50 ㎖)가 확인. 용액은 134 mM 염화나트륨, 5.4 mM의 칼륨, 1 mM의 염화 마그네슘 육수화물, 1.8 mM의 염화 칼슘 이수화 물, 및 5 mM의 HEPES 나트륨, 5 M 염화수소 7.4 평형 pH가 이루어진다.
  3. 유도 챔버에 놓고 마우스를 마취 3 - 4 % 이소 플루 란. 수술하는 동안 유지 보수를 위해 2.0 %의 이소 플루 란 - 1.0 따릅니다. 영상 중 0.8 % - 또한 낮은 0.4로 감소S = "외부 참조"> 5, 13, 14, 15, 제공된 적절한 마취를 유지한다. 마취의 이러한 낮은 수준은 고통스러운 자극에 are....

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결과

한쪽 반구 내 대뇌 피질 부위 사이의 상호 작용을 연구하기 위해 우리는 시상 정맥동과 5 - 6 mm 측면을 가로 지르는 큰 두개 절개술을 사용했습니다. 이 두개골 창은 우뇌 반구의 일차 (모터, 체성 감각, 시각, 청각), 이차 (운동, 시각) 및 연관 (후퇴, 대뇌 피질, 정수리 연합) 피질을 포함했다 ( 그림 3A ). 이 연구에서 우리는 막 전위의 변화를 반영하는 전압 감응 형 염료 (VSD) 이미징을 사용했습니다 3 . 이 프로토콜은 다른 외인성 ( 예 : 칼슘 17 및 글루 탐 산염 18 이미징) 또는 내장 이미징 실험에도 유용합니다. 0.5 % isoflurane을 사용하여 가볍게 마취 된 마우스의 뒷다리, 앞다리, 수염, 시각 또는 청각 시스템을 자.......

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토론

큰 두개 창 혁신적인 프로토콜은 대뇌 피질의 시간적 정수리 부분 위에 동시 촬상을 가능하게한다. 광학 영상과 결합하여, 그 자발적 자극 유도 활성 영역 중에 피질 내의 신경 동성을 나타 내기 위해 도움이 될 수 있습니다. 이 넓은 개두술 또한 혈류와 허혈성 모델 외측 용기 직접 조작의 생체 내 이미징 있도록 중간 대뇌 동맥 (MCA)의 기단부를 포함한 피질 혈관계 네트워크의 큰 신장을 노출시킨다. 이 기술은 전압 및 칼슘 표시기 단백질 (23)을 표현하는 쥐의 최근 개발 라인을 위해 잘 사용 될 것입니다. 이 마우스는 피질에 전압에 민감한 염료를 배양의 필요성을 우회의 실질적인 이점을 제공합니다. 이러한 외부 염료는 적절하게 뇌 조직에 침투 시간이 걸릴 (~ 60-90 분)과 온화한 독성에 의해 제한됩니다. 대형 craniotomies도 있습니다이전에 VSDI (11)와 함께 개발 쥐의 뇌를 연구하기 위해 사용되었다. 신생아 .......

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공개 사항

저자는 공개 할 것이 없습니다.

감사의 글

이 작품은 자연 과학 및 캐나다의 공학 연구위원회 (NSERC) 디스커버리 부여 # 40352에 의해 지원되었다, 캠퍼스 MHM에 혁신 프로그램 의자, 앨버타 알츠하이머 연구 프로그램에 대한 앨버타, 및 NSERC는 MK에 BIF 박사 교제와 AIHS 대학원 교제 CREATE. 우리는이 프로토콜의 개발 및 수술 훈련 푸 민 왕 감사하고, 베루 미르자 아그와 디 샤오 사육.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
히팅 패드FHC40-90-2
파인 가위파인 사이14058-09
펜치 Fine Science Tools11251-352쌍 이상이 권장됩니다
봄 가위Fine Science Tools15000-00, 15000-101쌍은 dura 제거를 위해 지정되어야 합니다 
제트 치아 쉐이드 파우더LANG 치과제트 치아 쉐이드 파우더는 제트 리퀴드
제트 치아 쉐이드 액체
드릴 헤드 - 카바이드 버스 FG 1/4 389Midwest Dental385201
Agarose PowderSigma-AldrichA9793
GelfoamSinclair Dental CanadaPfizer Gelfoam
IsofluraneWestern Drug Distribution Centre Ltd124125
Lidocaine 2% EpinephrineWestern Drug Distribution Centre Ltd125299
덱사메타존 5  mg/mLWestern Drug Distribution Centre Ltd125231
부틸 시아노아크릴레이트 접착제(VetBond)Western Drug Distribution Centre Ltd12612
언스 도구 . . 와 혼합될 수 있습니다.

참고문헌

  1. Sigler, A., Mohajerani, M. H., Murphy, T. H. Imaging rapid redistribution of sensory-evoked depolarization through existing cortical pathways after targeted stroke in mice. Proc Natl Acad Sci U S A. 106 (28), 11759-11764 (2009).
  2. Shih, A. Y., et al.

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재인쇄 및 허가

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