동종 유도 혈관 거부 및 이식 동맥 경화 마우스 모델

요약

우리는 마우스의 대동맥 삽입 이식을 위한 프로토콜을 설명합니다. 이 프로토콜의 목표는 동맥의 동종면역 반응 및 그에 따른 장기 이식 실패에 기여하는 동맥 변화와 관련된 병리학적 과정 및 치료 전략을 연구할 수 있는 모델을 제공하는 것입니다.

초록

이식 동맥경화증(TA)을 유발하는

혈관 거부 반응은 만성 심장 이식 실패의 주요 징후입니다. TA에서 수혜자의 면역 체계는 동맥 벽의 손상과 내피 세포 및 평활근 세포의 기능 장애를 유발합니다. 이것은 내막 비후화(intimal thickening)와 내강 폐색(luminal occlusion)을 특징으로 하는 병리학적 복구 반응을 유발합니다. 면역 체계가 혈관 구조 거부 반응을 일으키는 메커니즘과 TA를 이해하는 것은 이식 실패를 관리하는 새로운 방법을 개발하는 데 도움이 될 수 있습니다. 여기에서는 혈관 거부 반응 및 TA의 병원성 메커니즘을 연구하는 데 사용할 수 있는 마우스 대동맥 삽입 모델에 대해 설명합니다. 이 모델은 기증 동물의 대동맥 분절을 동종 수혜자에 이식하는 것을 포함합니다. 동맥 분절의 거부 반응은 동종 면역 반응을 수반하며 혈관 거부 반응과 유사한 동맥 변화를 초래합니다. 우리가 설명하는 기본 기술적 접근 방식은 혈관 거부 반응 및 TA와 관련된 특정 질문에 답하기 위해 다양한 마우스 균주 및 표적 중재와 함께 사용할 수 있습니다.

서론

지난 30 년 이상 동안, 면역 억제제의 발전으로 인해 급성 거부 반응으로 이식 거부 반응을 감소했지만 만성 거부 반응은 주요 과제로 남아. 만성 심장 이식 거부의 주요 증상은 이식 동맥 경화증 (TA) ^{1, 2입니다.} 이 조건은 내막 증식증과 동종 동맥 혈관 운동 기능 장애를 특징으로하는 수신자 면역계 내피 및 평활근 세포의 표적화 면역의 결과로 발전된다. 호스트 선박 ^3을 살려주는 동안 때문에 외국 펩타이드 주요 조직 적합성 복합체 (MHC)의 인식에 이식 혈관의 구체적인 타겟팅 독점적으로 이식 동맥 (TA)의 개발에 의해 강조된다. 이을 유지받는 사람이 기증자하거나받는 사람이 T 세포와 B 세포 ⁽⁴⁾ 부족에 유 전적으로 동일한 경우 TA를 실험적으로 발생하지 않습니다 관측이다. 면역 매개 성 혈관 손상 및 dysfunctioN은 TA ^5, 내막의 비후 및 섬유증의 개발뿐만 아니라, 지질 및 ECM 단백질의 비정상적 축적을 야기한다. 내막의 비후는 전체 동맥 트리 전체에 동심 ^4-6지는 경향이있다. 그라프 손실 및 사망은 보통 동종 이식 혈관 내강 ^(4)의 폐색으로 인한 시브 허혈의 결과로서 발생한다.

1991 년 M....

프로토콜

본 연구의 모든 프로토콜을 검토하고 사이먼 프레이저 대학 동물 관리 윤리위원회에 의해 승인되었다. 사용을 Balb / cYJ (H2의 ^d) 공여 마우스 및 C57BL / 6 (H2의 ^b)받는 마우스 동종 반응을 조사. 마우스는 8-12주 세 사이의 실험에 사용된다. 여성 또는 남성 어느 마우스를 사용합니다. 동계 컨트롤 C57BL / 6 수신자에 C57BL / 6 기증자로부터 대동맥 세그먼트로 구성되어 있습니다.

1. 기증자와받는 사람 준비

참고 : 기증자와받는 사람 모두 마취 이식의 허혈을 최소화하기 위해 수술 전에 준비가되어 있습니다. 주 사용 마취제는 흡입 마취제의 전달을 위해 필요한 장치에 의해 동물의 폐색을 방지하기 위해 프로토콜에 사용된다. 그러나, 원하는 경우, 흡입 마취제는 적절한 대안이다. 마취제의 초기 주입에서 전체 절차를 완료하는 데 약 90 분 소요됩니다. 이식의 허혈 시간이 덜 그쪽입니다N 30 분.

1. 케타민의 복강 내 주사로 마우스를 마취 (100 ㎎ / ㎏를 10 ㎎ / ㎖)과 자일 라진 (10 ㎎ / ㎏, 1 ㎎ / ㎖). 마우스는 10 ~ 15 분 이내에 진정 될 것입니다. 동물 풋 패드의 지방산 부분을 협지함으로써 마취 깊이를 평가한다.....

결과

이 모델에서의 Balb / cYJ 마우스에서 복부 대동맥은 C57BL / 6 수신자의 infrarenal 대동맥에 삽입된다. 이는 동종 이식 동맥을 대상으로 동종 응답의 포괄적 인 평가를 허용한다. 이 모델에서 면역 매개 성 혈관 손상은 내막의 비후, 내강이 좁아 및 면역 세포의 모집 절정에 달하다 혈관 수복 반응 시작합니다 (그림 1, 2). 이러한 기준은 동종 반응의 정도, 혈관 제거 및 TA에 대한 판독 역할을한다. 절차의 성공은 동종 동맥 세그먼트 강력한 내막의 비후의 개발 및 syngraft 컨트롤 내막 비후의 유무에 의해 평가 될 수있다. 임상 적으로 관련된 면역 억제는 임상 이식 더 가깝게 닮은 모델과 함께 사용될 수있다. 이 모델은 또한 동종 반응에서 특정 단백질 / 경로의 효과를 연구하는 트랜스 제닉 동물을 사용할 수있다S 우리는 ^{14 일을했다.}

동종 이식 대동맥 세그먼트는 내막의 비후를 개발 .......

토론

우리는 면역 매개 성 혈관 거부와 TA를 연구하는 데 유용 쥐에 이식 대동맥 개재위한 프로토콜을 설명했다. 이 모델 TA의 요인뿐만 아니라, 신규 한 치료 전략의 개발을 조사하는데 사용될 수있다. 이것은 TA ^{14,17-21에서} 후천성 면역, 세포 독성 T 세포 반응, 사이토 카인 - 매개 CD4 T 세포의 효과기 응답 및 항체 - 매개 그래프트 손상 중요한 역할을 확립하기 이전에 사용되어왔다. 마우스에서 동맥 이식 인해 동물의 명백한 소형화하는 것은 곤란하다; 그러나, 실제로는 실사와, 성공적인 수술은 달성 될 수있다. 성공은 선박의 개통에 따라 달라집니다. 이것은 그래프트 부적절, 혈관 내강의 집게 용기, 수축 처리 용기의 뒷벽과 동일한 위치의 반복적 봉합을 봉합에 의해 손상되지 않도록 포함한다. 용기의 누설도 문제가 전자에주의가 요구스티치의 수와 위치는 혈관 벽 주위 고르게 나누어 nsure. 이것은 그래프트 허혈 30 분 이하로 최소화하는 것도 필요하다. 이에 의해, 95 % 초과의 성공률을 얻을 수.......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
C57BL / 6J (H-2B)	잭슨 연구소, 바 하버 ME	스트레인 # 000664
Balb / cBYJ	잭슨 연구소, 바 하버 ME	스트레인 # 001026
케타민 하이드로 클로라이드 주사 USP 100 mg / ml	케탈리안	DIN 00612316
자일라진 주사 20 mg / ml	롬퓸	DIN 02169592
케토프로펜 주사 100 mg/ml	Anafen	DIN 01938126
Butorphanol Tartrate  주사 10 mg/ml	Torbugesic	DIN 008450000
부프레노르핀 주사 0.3 mg/ml	Reckitt Benckiser	BN 5241
Atipamezole 염산염 멸균 주사 용액	Antisedan	DIN 02237744
Heparin Sodium Injection, USP, 1,000 units/ml	McKesson Distribution	DIN 02264315
Tears naturale 안과 연고	Alcon	DIN 02082519
실체현미경	Leica	M80
0.9% 염화나트륨, 멸균	Baxter Corporation
젖산 링거' s 용액, 멸균	Baxter Corporation
0.9% 염화나트륨 주사, 멸균, 10ml	Baxter Corporation
알코올 준비 패드	Loris
Povidone 요오드	베타딘
클로로헥시딘 글루코네이트 4% w/v	Germi-Stat
블랙 폴리아미드 모노필라멘트	ARO수술용 기구	T4A10Q07
봉합사, 10-0 봉합사, 70 미크론	Corporation
Blue 모노필라멘트 봉합사 5-0, P3 바늘	Ethicon	8698G
1ml 주사기	BD	REF 309659
10ml 주사기	BD	REF 309604
1cc TB 인슐린 주사기(28G 1/2	BD	REF 포함) 309309
25G 7/8, 피하 주사 바늘	BD	REF 305124
27 G 1/2, 피하 주사 바늘	BD	REF 305109
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