랑겐 돌프 - 관류 쥐 마음에 유도 및 허혈 - 재관류 손상의 평가

요약

고립된 쥐 심장은 허혈 재관류 손상에 대한 지속적인 모델입니다. 여기에서는 허혈성 모욕의 정도를 확인하기 위해 제자리 대동맥 삽 관술, 심장의 Langendorff 관류, 시뮬레이션된 허혈-재관류 손상 및 경색 염색을 통해 쥐에서 박동하는 심장을 채취하는 과정을 설명합니다.

초록

급성 환경에서 허혈 재관류 손상을 둘러싼 생화학적 사건은 흉부 수술의 심근 경색 및 심장 합병증에 대한 새로운 치료 옵션을 발전시키는 데 매우 중요합니다. 허혈 재관류 손상에 대해 심근을 전제 조건화하는 특정 약물의 능력은 여러 임상 시험으로 이어졌지만 거의 성공하지 못했습니다. 분리된 심장 모델을 사용하면 허혈-재관류 손상 창 이전 또는 내에서 언제든지 시행되는 다양한 약물 중재의 효과를 포함하여 허혈 재관류 손상의 기능적 효과를 실시간으로 예리하게 관찰할 수 있습니다. 짧은 기간의 허혈은 허혈성 손상에 대해 심장을 사전 조건화할 수 있기 때문에 사전 조절되지 않은 심근의 기능 평가를 허용하기 위해 현장 대동맥 삽관술이 수행됩니다. 식염수로 채워진 풍선을 좌심실에 삽입하여 압력 발생을 실시간으로 측정할 수 있습니다. 허혈성 손상은 관류 완충 흐름의 중단에 의해 시뮬레이션된 후 재관류가 뒤따릅니다. 허혈과 재관류의 지속 시간을 조절하여 주어진 시점에서 생화학적 사건을 검사할 수 있습니다. Langendorff 분리 심장 모델은 허혈 및 재관류에 영향을 미치는 전신 사건을 고려할 수 없지만, 허혈 재관류 손상 창 내에서 급성 기능 및 생화학적 사건을 조사하고 심장 사전 및 사후 조절에 대한 약리학적 중재의 효과를 조사하기 위한 훌륭한 모델입니다. 이 프로토콜의 목표는 Langendorff 모델에서 허혈/재관류 손상에 이어 제자리 대동맥 삽관 및 심장 절제를 수행하는 방법을 보여주는 것입니다.

서론

모두 허혈 및 재관류에 심장 응답의 기초가되는 사건의 해명은 대동맥 - 클램핑 ^(2)를 필요로 심근 경색 ⁽¹⁾ 심장 수술의 치료 개선에 필수적이다. 허혈 재관류 손상의 생체 내 모델이 매우 유용 종료점을 분석 할 수 있지만, 그들이 실시간으로 급성 허혈 재관류 손상의 작용 효과를 연구하기위한로서 효과적이지 않다. 생체 허혈 재관류 모델은 일반적으로 재관류시의 경색 크기에서 상당한 변동성 및 심장 약물의 직접 전달을 생산에 또한 도전. 허혈 재관류 손상을 연구 랑겐 돌프 격리하는 마음 시스템의 활용은 약물 치료, 경색 조직의 균일 한 영역, 직접 심근에 약물의 즉각적인 전달의 실시간 기능 평가를 할 수 있습니다.

먼저 B를 설명1895 년 ³ Y 오스카 랑겐 돌프는 랑겐 돌프 격리하는 마음은 지난 40 년 ^4,5에 대한 허혈 재관류 연구에 사용 된, 허혈 재관류 손상 연구를위한 강력한 모델이다. 여기에 일부 수정 기능 분석을 위해 고립 된 마음을 최적화하기 위해 만들어집니다. 대동맥의 현장 삽관에서 심장 박동이 심장 허혈 재관류 시험 ^(6)의 결과를 바꿀 것 허혈 양상을 경험하지....

프로토콜

여기에 나열된 모든 절차는 사우스 캐롤라이나 의과 대학에서 기관 애니멀 케어 및 사용위원회에 의해 승인되었습니다. 여기에 설명 된 실험 급성 비 생존 실험이다. 따라서,이 눈 연고의 아무 소용이 없으며 멸균 운영 스위트 룸은 필요하지 않습니다. 안락사는 마음의 수확시 방혈에 의해 달성된다.

1. 실험 준비

1. 일정한 압력 또는 일정한 흐름을 Langendorff 관류 장치 ^(4)를 설정합니다.
2. 수정 크렙스 Henseleit 버퍼의 4 L 준비 (MM의 : (112)의 NaCl, 5 KCl을, 1.2 _황산을 1, K ₂ HPO _4, 1.25 염화칼슘 _2, 25 _NaHCO3를, 11 D- 글루코스, 0.2 옥 탄산, 산도 = 7.4).
   1. 10 배 재고 버퍼를 확인합니다.
      1. 3 L의 초순수에의 NaCl, KCl을, _황산, 및 K ₂ HPO _4를 녹여.
      2. 500ml의 초순수 위스콘신에 _{CaCl2를 녹이고}1 N 염산 40 mL로 일.
      3. 천천히 1.2.1.1에서 ....

결과

좌심실 풍선 장치는 좌심실 수축 (도 1)에 의해 개발 된 압력의 실시간 모니터링을 허용한다. ^{앞서도 7과} 같이,이 압접 흔적은 심실 기능 많은 매개 변수를 계산하는데 사용될 수있다. 이러한 계산은, 기준 위상뿐만 아니라 재관류 위상 이루어진 각 그룹 내에서 여러 트레이스 대하여 평균, 우리는 이전에 ^9했던 것처럼 약리학 적 개입, 심장 전처리에 기인 한 것인지를 결정하기 위해 비교 될 수있다. 하나의 이러한 파라미터는 수축기 혈압과 이완기 종료 압력 사이의 차이로서 계산 내압이다. 정상 관류 쥐 마음에 개발 압력이 70 ~ 130 mmHg로 (그림 1A)에 이르기까지 다양 할 수 있습니다. 허혈 후에 개발 된 압력이 감소되고, 확장기 혈압의 단부로 상승 (도 1b). 때 래트는이러한 클래스 I 및 ¹⁸ 심장 절제에 앞서 개발 된 압력의 감소 및 허혈 재관류 손상과 관련된 단부 .......

토론

절연 관류 래트 심장 성공적 허혈 재관류 손상 ⁹ 심장 전처리에 약리학 적 개입의 효과를 연구하기 위해 사용될 수있다. 그러나, 재현 가능한 결과를 보장하기 위해 표준화되어야 절차와 몇몇 중요한 단계가있다. 시스템 내에서 37.4 ℃의 온도를 유지하는 것은 심지어 가벼운 저체온증과 고열이 심장 컨디셔닝 ^{10, 11의 원인이되므로} 중요하다. 케타민에 장기간 노출이 심장 컨디셔닝 ^(12)을 방해 할 수 있으므로 마음의 절제에 마취제의 주입에서 경과 전체 시간은 최소로 유지해야합니다. 시츄 대동맥 적시 삽관 심장 절제 전에 심장 또는 동물의 방혈 내의 저산소증의 발달을 예방에 필수적이다. 전반적으로, 마음의 제거에 처음 절개까지의 시간은 더 이상 6-8 분 이상 없어야합니다. 왼쪽 심실 바lloon은 각 실험 전에 누출을 점검하고, 필요한 경우 교체해야합니다. 시스템이 심하게 각 실행 후 증류수로 전체 장치를 세척 및 배관의 내부의 누출 또는 오염을 방지하기.......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
염화나트륨	시그마 알드리치	S3014
염화칼	시그마 알드리치	P9541
황산마그네슘	시그마 알드리치	203726
인산칼륨 이염기	성 시그마 알드리치	RES20765-A7
염화칼슘 이수화물	시그마 알드리치	C8106
나트륨 중탄산염	시그마 Aldrich	S5761
D-글루코스	시그마 Aldrich	G8270
옥탄산	시그마 Aldrich	C2875
2,3,5-트리페닐테트라졸륨 클로라이드	시그마 Aldrich	T8877
의료용 압력 변환기	MEMSCAP	SP844
Masterflex 연동 펌프	Cole Parmer	EW-07521-40
Masterflex 이지 로드 펌프 헤드	콜 파머	EW-07518-10
가열 순환 수조	Lauda	M3
튜빙 흐름 모듈	천음속	TS410
모듈식 연구 콘솔	천음속	T402
인라인 유량 센서	천음속	ME2PXN
PowerLab 데이터 수집 장치	AD Instruments	PL3508
LabChart 데이터 수집 소프트웨어	AD Instruments	MLU60/8

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