과도 대뇌 저산소증 - 허혈을 기반으로 혈전 성 뇌졸중 모델

요약

혈전색전성 뇌졸중 모델은 재개통 치료를 최적화하기 위한 중요한 도구입니다. 본 연구에서는 혈전증 및 경색을 유발하는 일과성 대뇌 저산소성 허혈성(tHI) 모욕에 기초한 쥐 혈전성 뇌졸중 모델을 보고하며, 뇌졸중 환자와 유사한 치료 창에서 조직 플라스미노겐 활성제(tPA) 매개 섬유소용해에 호의적으로 반응합니다.

초록

스트로크 연구는 임상 적으로 신경 치료를 번역에 많은 좌절을 견디고있다. 반대로, 실제 치료 (TPA의 혈전)이 거의 스트로크 전임상 연구를 지배 기계적 폐색 기반 실험 모델의 이익을 생성하지 않는다. 벤치와 침대 옆 간의 분할 전임상 행정 연구 TPA에 반응하는 모델을 채용 할 필요성을 시사한다. 이를 위해, 간단하고 TPA에 반응성 혈전 성 뇌졸중 모델 발명은 여기에 설명된다. 37.5 ± 0.5 ° C에서 동물의 직장 온도를 유지하면서,이 모델은, 30 분 동안 마우스에서 성인 안면 마스크를 통해 일방적 경동맥 및 7.5 %의 산소의 전달의 일시적 폐색 이루어져있다. 일방적 경동맥 또는 저산소증 가역 결찰 각 만 일시적 뇌 혈류를 억제하지만, 양쪽의 조합 욕설 재관류 결핍, 혈소판 피브린 침착, 및 대형 infar 지속 야기중간 대뇌 동맥 제공 영토에서 CT. 중요한 것은, 꼬리 정맥 0.5, 1, 또는 4 시간 후의 생 (10 밀리그램 / kg)에서 재조합의 TPA 주입 사망률 경색 크기의 시간에 따른 감소를 제공 하였다. 이 새로운 뇌졸중 모델은 단순 및 실험 결과를 비교하는 실험실에 걸쳐 표준화 될 수있다. 또한, 두개 절제술 또는 예비 형성된 색전을 도입하지 않고, 혈전증을 유도한다. 이러한 독특한 장점을 감안할 때, 티 모델은 전임상 뇌졸중 연구의 레퍼토리에 유용한 추가이다.

서론

혈전 용해 및 개통은 임상 ¹ 급성 허혈성 뇌졸중의 가장 효과적인 치료입니다. 그러나, 임상 신경 연구의 대부분은 혈관 폐색 제거하여 뇌 혈류의 신속한 복구가 발생하고, 단자 위치 보장 혈전에 의해 아무 효과는 거의 도시 과도 정비공 폐색 모델 (관내 봉합 중간 대뇌 동맥 폐쇄)에서 수행 하였다. 이는 뇌졸중 모델의 선택 모호한 환자에게 신경 치료 ^2,3- 변환하는 어려움에 적어도 부분적으로 기여한다고 제안되었다. 따라서, 전임상 연구에서 TPA에 반응 혈전 색 전성 뇌졸중 모델을 사용하는 증가 통화가 있지만, 이러한 모델은 기술적 인 문제 (토론 참조) ^{4-7 있습니다.} 여기에서 우리는 일방적 과도 저산소 허혈성 (THI) 모욕과 정맥의 TPA 치료 ^8의 응답에 따라 새로운 혈전 성 뇌졸중 모델을 설명합니다.

생 스트로크 모델은 1960 ⁹ 성인 쥐 실험을 위해 발명 된 레빈 절차 (챔버 일시적인 저산소증에 노출 다음 일방적 경동맥의 영구 결찰)를 기반으로 개발되었다. 원래 레빈 절차는 무명에 머 금고 있기 때문에 그것은 단지 변수 뇌 손상을 생산하지만, 1981 ¹⁰ 신생아 저산소 성 허혈성 뇌증 (HIE)의 모델로 로....

프로토콜

이 프로토콜은에 모리 대학의 기관 동물 관리 및 사용위원회 (IACUC)의 승인을 실험실 동물의 관리 및 사용을위한 건강 지침의 국립 연구소를 다음입니다.

1. 설치

1. 수술 전 적어도 15 분 동안 37 ℃에서 열 펌프와 연결 온난화 패드에 수술 침대를 준비합니다. 수술 침대에 3 ML의 주사기의 배럴을 사용하여 목 롤을 놓습니다. 의료 공기에 2 % 이소 플루 란 마취 가스를 준비합니다.
2. 멸균 된 집게, 가위, 마이크로 니들 홀더, 지혈제, 면봉과 봉합을 준비합니다. 조직 접착제와 눈 연고를 준비합니다.
3. 가열 램프와 직장 프로브 저산소증 시스템과 온도 컨트롤러를 설정합니다. 92.5 %의 N _2로 균형 7.5 %의 O _2의 2 % 이소 플루 란과 저산소증 가스를 준비합니다.
4. 한 시간 수술 전, 마우스는 서방 멜 록시 캄 (4.0 ㎎ / ㎏)의 피하 주사에 의해 analgesized된다.

2. 과도 대뇌 저산소증 - 허혈 (그림 1B)

1. 10~13주 세 남성 C57BL을 마취 / 동물이 발 짜기에 응답하지 않는 한 다음 전자 면도기를 사용하여 오른쪽....

결과

이차원 레이저 스페 클 대비 이미징 (LSCI) ^{16을 30} 분 과도 일방적 경동맥 폐색 (tCCAO), 저산소증에 30 분간 노출 (7.5 % 산소), 및 30 분 일방적으로 뇌 혈류 (CBF)의 변화를 비교하기 위해 사용 하였다 저산소증 (THI)에서 결찰을 경동맥. 이 실험은 tCCAO가 normoxia에서 경동맥 결찰 반구에서 CBF를 억제하는 것으로 나타났다에 ~ 빨리 경동맥 폐색 (그림 2A에서 R)의 출시 이후 85 % 이상으로 회복 초기 값의 50 %. 전신 저산소증에 노출 혼자 일시적으로 정상 산소 분위기 (그림 2B)로 복귀 한 후 130 ~ %로 반등 기준 값의 약 75 %에 CBF 감소. 빠르게 거의 경동맥 ligatio 릴리스 후 20 분에서 30 % 이상으로 회복되지 10 분, 주위 기준값의 20 % 이하로 동측 반구 CBF 감소 저산소증 하에서 콘트라스트 경동맥 결찰 (THI) 중N과 normoxia로 돌아. CBF는 반.......

토론

스트로크는 노화 인구 어떤 사회 중요성을 성장의 주요 건강 문제입니다. 전 세계적으로 뇌졸중이 사망 원인 ^(18)의 11.1 %에 해당하는 2010 년 추정 5,900,000 치명적인 이벤트와 사망의 두 번째 주요 원인이다. 스트로크는 장애 조정 생명 년의 세 번째 주요 원인이다 (DALYs)은 1990 ^(19)에 다섯 번째 위치에서 상승, 2010 년에 전 세계적으로 패했다.이 역학 데이터가 급성 (허혈성) 뇌졸중의보다 효과적인 치료의 필요성을 강조 표시합니다. 그러나, 임상 신경 치료에 강렬한 연구에도 불구하고, TPA에 혈전이 동물 실험에서 여러 번 약속 신경 에이전트가 임상 시험에 실패하면서, 미국 식품의 약국 (FDA)의 승인을 급성 허혈성 뇌졸중의 특정 치료 남아있다. 환자에게 신경 보호 요법을 번역하는 어려움은 많은 요소를 가지며, 현재 강조 좋은 실험실 practi에CE, 여러 데이터 세트의 메타 분석, 국제 협력 전임상 뇌졸중 연구 ^{(20, 21)을} 향.......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
성인 수컷 마우스	Charles River	C57BL/6	10-13주령(22-30 g)
모바일 실험실 동물 마취 시스템	VetEquip	901807	마취
의료 공기 (압축) 공기 탱크	Airgas	UN1002	마취
Isoflurane	Piramal Healthcare	NDC 66794-013-25	마취
멀티 스테이션 실험실 동물 마취시스템	Surgivet	V703501	저산소증 시스템
7.5% O2 92.5% N2 탱크로 균형을 이룹	Airgas	UN1956	저산소증 시스템
온도 조절기와 가열 램프가 있습니다.	콜 파머	EW-89000-10	온도 컨트롤러
직장 프로브	Cole Parmer	NCI-00141PG	온도 컨트롤러
해부 현미경	올림푸스	SZ40	수술 설정
히트 펌프와 워밍 패드	Gaymar	TP700	수술 설정
미세 곡선 집게(톱니)FST		11370-31	수술 도구
미세 곡선 집게(매끄러운)	FST	11373-12	수술 도구
마이크로 가위	FST	15000-03	수술 도구
마이크로 바늘 홀더	FST	12060-01	수술 도구
Halsted-Mosquito 지혈	FST	13008-12	수술 도구
5-0 실크 봉합사	하버드 기구	624143	수술 용품
4-0 나일론 모노필라멘트 봉합	LOOK	766B	수술 용품
조직 접착제	Abbott Laboratories	NC9855218	수술 용품
Puralube Vet 연고	Fisher	NC0138063	안구 건조 예방
MoorFLPI-2 혈류 이미저	Moor	780-nm 레이저 소스	레이저 스페클 콘트라스트 이미징
만니톨	시그마	M4125	생체 내 TTC
2,3,5-트리페닐테트라졸륨 클로라이드(TTC)	Sigma	T8877	in vivo TTC
Vibratome	Stoelting	51425	뇌 절편in vivo TTC
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