당사의 독점 장치를 사용하여 간 채취, 삽관 및 관류를 위한 제시된 기술은 쥐 간에서 탈세포화 및 재세포화 실험을 개선하기 위한 정교한 관류 설정을 가능하게 합니다.
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이 논문에서
요약
초록
실질 기관의 탈세포화와 재세포화는 체외에서 기능적 기관의 생성을 가능하게 할 수 있으며, 설치류 간 탈세포화를 위한 여러 프로토콜이 이미 발표되었습니다. 우리는 문맥 및/또는 간 동맥을 통해 선택적 관류를 가능하게 하는 독점적인 관류 장치를 구축하여 탈세포화 과정을 개선하는 것을 목표로 했습니다. 또한, 우리는 탈세포화의 균질성을 개선하기 위해 진동하는 주변 압력 조건에서 관류를 수행하려고 했습니다. 관류 탈세포화의 균질성은 현재까지 과소평가된 요인이었습니다. 탈세포화(decellularization) 과정에서 관류가 잘 되지 않는 기관 내 영역에는 여전히 세포가 포함되어 있을 수 있는 반면, 관류가 잘 되는 영역의 세포외 기질(ECM)은 이미 알칼리성 세제의 영향을 받았을 수 있습니다. 진동 압력 변화는 호흡 중에 발생하는 복강 내 압력 변화를 모방하여 간 내부의 미세 관류를 최적화할 수 있습니다. 여기에 제시된 연구에서 탈세포화된 쥐 간 매트릭스는 조직학적 염색, DNA 함량 분석 및 부식 주조를 통해 분석되었습니다. 간동맥을 통한 관류는 문맥 관류보다 더 균질한 결과를 보여주었습니다. 진동 압력 조건의 적용은 관류 탈세포화의 효과를 향상시켰습니다. 간 동맥을 통해 관류된 간과 진동하는 압력 조건에서 간이 가장 좋은 결과를 보였습니다. 당사의 독점 장치를 사용하여 간 채취, 캐뉼레이션 및 관류를 위해 제시된 기술은 쥐 간에서 탈세포화 및 재세포화 실험을 개선하기 위한 정교한 관류 설정을 가능하게 합니다.
서론
탈세 포화하고 recellularization 시험관에 1 작용 성, 이식 가능한 장기의 생성을 가능하게 할 수있다. 제거 세포와 항원 물질에 의해 (예., DNA는 알파 - 갈 에피토프)에서 기관은 이하 비 - 면역 세포 외 기질 (ECM)을 얻을 수있다. 이 행렬은 기관의 입체 microanatomy을 보존하고 다른 가능성이 이종 기원의 세포 다시 채우기위한 이상적인 biomatrix로서 역할을 할 수있다. 따라서, 탈세 포화 된 쥐 간 매트릭스는 인간 간 세포 증식을 할 수있다. 이 인간화 마이크로 간 질환 (예., 선천성 대사 질환, 바이러스 성 질환 또는 악성 종양) 또는 전임상 제약 테스트 3에 대한 연구를위한 생체 모델이 될 수 있습니다.
쥐의 간 관류 탈세 포화에 대한 몇 가지 다른 프로토콜은 이미 4-13 발표되었다. 모든 프로토콜에서, decellular화는 유관 간문맥 통해 알칼리 이온 성 또는 비이 온성 세제의 관류에 의해 달성 하였다. 우리가 아는 한, 우리는 문맥 및 / 또는 쥐 간 동맥 (14)를 통해 선택적 관류에 의해 쥐의 간 탈세 포화를보고 첫 번....
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프로토콜
동물 실험 의학 (FEM, 샤리 테, 베를린, 독일)의 시설에 보관하고, 모든 실험 프로토콜을 검토하고, 국가 보건 및 지역 담당 사무소 (LAGeSo, 베를린, 독일의 승인을 하였다. 등록 번호 O 0365 / 11).
1. 간 수확
- 수술 전 준비
- 고정을 위해 코르크 판을 사용합니다. 접시에 의료 드레이프를 넣어. 네 바늘을 사용하여, 수술 흡입 마취의 코르크 판에 흡입 마스크를 고정한다.
- 포털 정맥 정맥의 사전 약속
- 세 방향 꼭지에 말초 정맥 카테터 (G 20)을 연결합니다. 정맥 카테터는 약의 길이, 비스듬히 절단한다. 1.5 cm.
- 드 에어 링거 용액으로 가득 10 ML의 주사기를 사용하여 시스템. 그것은 신중하게 해제 공기 가스 색전증 부정적인 관류 탈세 포화에 영향을 미칠 수 있기 때문에 매우 중요하다.
- 사전 약속동맥 정맥의
- 나비 캐 뉼러를 사용하여 5 mm의 길이로 절단 바늘. 5mm 바늘과 superglue로 수정, 5cm 튜브 (외경 0.96 mm ID 0.58 mm)를 장착한다. 더 큰 튜브에와 superglue로 수정, 2cm 길이의 튜브 (외경 0.61 mm ID....
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결과
균질성 따라서 다른 탈세 포화 프로토콜의 효과를 육안 관찰, 조직 학적 분석, 탈세 포화 간 매트릭스 내의 나머지 DNA 함량 분석에 의해 평가 하였다. 또한, 부식 주조 탈세 포화 후 간 손상의 microanatomy을 시각화 하였다.
Macroscopy
탈세 포화 동안, 간 세포는 콘텐츠의 제거를 나타내는, 루슨트된다. 문맥을 통해 관류 된 간을 탈세 포화 동안 및 (흰색 화살표) 후에 육안 가시 나머지 세포, 불균일 해명 (따라서 탈세 포화)를 보였다. 간동맥을 통해 관류 간은보다 균일 한 탈세 포화 코스와 눈에 보이는 남아있는 세포를 보였다. 간은 진동 압력 조건의 적용을 관류 한 경우, 나머지 세포는 무관 관류 경로 보이지 않았다.
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토론
쥐의 간 수확 및 탈세 포화에 대한 발표 기술은 쉽게 재현 할 수 있지만, 고려해야 할 중요한 특정 단계가 있습니다 :
이 혈액 응고를 활성화하고 간 내 혈전 형성으로 이어질 수 있기 때문에 간 수확을 준비하는 동안, 그것은 심한 출혈을 방지하는 것이 중요하다. 우리의 의견으로, 그 문맥을 통해 관류 동안 간동맥을 통해 혈액의 유입을 방지하기 위해 포털 정맥 삽관 직전 복부 대동맥을 절개하는 것이 바람직하다. 간이 삽관 명확 관류되면, 혈전 형성이 더 이상 문제가 없다.
관류 원형으로 가스 기포의 유입 가스 색전증을 방지하기 위해 회피되어야하기 때문에 관류 장치 간 교통 수확 후 관류 장치 간 연결의 특히 중요한 공정이다. 또한, 삼방 밸브를 미리 기입하는 것이 유용하다 IPBS를 관류 시스템에 밸브를 연결하기 전에 직접 주사기 및 얇은 캐뉼라를 사용하여, 캐 뉼러 간 접속 s는.
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공개 사항
저자는 공개할 것이 없습니다.
감사의 글
저자는 이 프로젝트를 진행하는 동안 도움을 준 슈테펜 리퍼트(Steffen Lippert), 칼리드 알리예프(Khalid Aliyev), 코린나 요렌스(Korinna Jöhrens), 카타리나 스트루커(Katharina Struecker)에게 감사의 뜻
을 전한다.....액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 자체 제작 동맥 캐뉼라 | |||
| Portex 비멸균 폴리에틸렌 튜빙 | SIMS Portex | REF 800/110/100 | 0.28 mm ID 0.61 mm OD& |
| nbsp; Portex 비 멸균 폴리에틸렌 튜브 | SIMS Portex | REF 800/110/200 | 0.58 mm ID 0.96 mm OD |
| Venodrop Safe butterfly catheter | Fresenius Kabi | 3275851 | 21 G |
| 포털 정맥 캐뉼라 | |||
| 주변 정맥 카테터 | BD | 393224 | BD Venflon Pro 20G |
| 3 방향 스톱콕 | 스미스 의료 | 888-101RE | |
| 면 스틱 | Hecht-Assistent | 4302 | |
| 면 패드 | Shaoxing Zhengde 외과 드레싱 | 13H118-03 | |
| 거즈 붕대 | 후베이 Haige 의료 기기 | 14388 | |
| Ringer Solution | Fresenius Kabi | 13 HKP022 | 1000 ml |
| 10 ml 주사기 | 브라운 | 4606108V | 10 ml/ 루어 솔로 |
| 5 ml 주사기 | 브라운 | 4606061V | 5 ml /루어 솔로 |
| 봉합사 (실크 6/0) | Resorba | H1F | LOT 105001.81 |
| 의료용 드레이프 | Shaoxing Zhengde 외과 드레싱 | D0613011 | |
| surgical 악기 | |||
| 바늘 홀더 | Geuder | 17570 | |
| 마이크로 집게 | Inox-Electronic | 91150-20 | |
| 마이크로 가위 | Martin | 11-740-11 | |
| 마이크로 집게 | S& 티 | ||
| 클램프 | Aesculap | BH111R | |
| 가위 | F S T | 14501-14 | |
| 수술용 겸자 | Aesculap | BD 557 | |
| 탈세포화 | |||
| 호흡기 | Resmed | 14.24.11.0004 | SmartAIR ST |
| 관류 장치 | Charite, 의료 공학 연구소 | 맞춤형 장치 | 탈세포화 장치 |
| 연동 펌프 ismatec reglo ICC | IDEX | ISM4408 | 4채널 |
| 하이델베르거 연장 75cm | Fresenius Kabi | 2873 | 75 cm |
| MS/CA 펌프세그먼트 | IDEX | IS 3510 | MS/CA/클릭앤고/POM-C |
| CA 2-스토퍼 튜브 | Pharmed | BPT NSF-51 | |
| 버블 트랩 | 맞춤 제작 아이템 | ||
| Luer Lock 호스 커넥터 | Neolab | No. 02-1887 | |
| 세제 | |||
| SDS 펠릿 | Carl Roth | CN30.4 | 2.5kg |
| 트리톤 X-100 | 칼 로스 | 3051.1 | 10 |
| PBS | Gibco | 14190-094 | DPBS |
| staining | |||
| Eosin 1% | Morphisto | 10177 | |
| Mayer hematoxylin | AppliChem | A4840 | |
| gomori staining | Morphisto | 11104 | |
| AlcainBlue-PAS staining | Morphisto | 11388 | |
| Direct Red 80 | 시그마 알드리치 | 365548 |
참고문헌
- Struecker, B., Raschzok, N., Sauer, I. M. Liver support strategies: cutting-edge technologies. Nat Rev Gastroenterol Hepatol. 11, 166-176 (2014).
- Crapo, P. M., Gilbert, T. W., Badylak, S. F. An overview of tissue and whole organ decellularization processes. Biomaterials
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