마우스의 심장 수축력의 조사에 대 한 격리 유두 근육의 수축력 측정

요약

뮤린 좌심실 유두근는 체외에서 심근 수축력을 조사하는데 사용될 수있다. 이 문서 자세히 분리 실험 프로토콜 심장 수축 특성을 연구에 대해 설명합니다.

초록

성인 마우스 마음에서 격리 유두근는 다른 생리 / 병리 적 조건에서 심장 수축력을 연구하는 데 사용할 수 있습니다. 수축 특성은 독립적으로 혈관 TONUS neurohumoral 또는 상태와 같은 외부의 영향을 평가할 수있다. 그것은 고립 된 심장 근육 세포와 단일 세포 측정 사이와 심 초음파 등의 생체 내 연구의 과학적인 접근 방식을 보여줍니다. 우수한 모델이 심장 생리학 / 병태를 연구하고되는 약물에 의해 변조 또는 트랜스 제닉 동물 모델의 탐색과 같은 조사를 위해 사용될 수있다, 따라서, 유두근 제제는 역할을한다. 여기, 우리는 장기 목욕 설정에서 심장 수축력을 조사하기 위해 쥐의 좌전 유두근을 분리하는 방법을 설명합니다. 심실 벽으로부터 격리 근육 스트립 제제와 대조적으로, 유두근은 근육 tissu TOTO을 손상시키지 않고 제조 할 수있다심각 전자. 장기 화장실 설치는 여러 온도 조절, 기체를 첨가 전극 장착 된 장기 목욕 챔버로 구성되어 있습니다. 격리 된 유두 근육 기관 목욕 실에서 해결 전기적 자극한다. 경련 유발 력은 그러한 힘 진폭 트 및 동력학 분석되는 트 같이 압력 변환기 및 파라미터를 이용하여 기록된다. 다른 실험 프로토콜 같은 카테콜아민 또는 다른 약제로서 수축 화제의 칼슘 및 주파수 별 수축뿐만 아니라, 용량 - 반응 곡선을 조사하기 위하여 수행 될 수있다. 또한 허혈과 같은 병리학 적 급성 조건을 시뮬레이션 할 수있다.

서론

심장 수축성 그들의 역할을 참조 이온 채널 단백질 등의 조사는 다른 pathomechanisms를 발견하고 그러한 허혈 및 심장 마비와 같은 심장 질환에 대한 새로운 치료 전략을 구축하는 것이 필수적이다.

포유류 심근 수축 기능은 다양한 이온 채널, 전송기 및 다른 단백질에 의해 조절되는 것으로 알려져있다. 활동 전위는 ^{2 +} 채널이 세포 외 공간에서 ^칼슘 유입에 이르게이어서 칼슘 ^{2 +에} 휴대 수축 ² 트리거 칼슘 ^{2 +} 릴리스 (CICR ^1), 유도 된 칼슘 전압 의존 sarcolemmal의 L 형의 활성화를 불러 일으켰다. 생리 학적 또는 병리학 적 스트레스에 심장 수축력과 적응에 중심적인 역할을 -signaling ^칼슘. 카테콜아민 따라서 캠프를 합성 아데 닐 레이트 사이 클라 (AC)을 자극, 심장 β 아드레날린 수용체를 활성화합니다. 활성화되는, PROTEIN 칼슘 ^{2 +} 과도 심장 수축력의 ^1,3,4의 수정의 결과로 L 형 ^칼슘 채널, phospholamban 및 ryanodine 수용체와 같은 다른 세포와 막 관련 단백질을 인산화 ....

프로토콜

주 : 분리 과정의 기본 단계는도 1에 도시 된 모든 단계가 다음 프로토콜에서 상세히 설명된다.. 유두근 분리, 기관 목욕 챔버에 장착, 수집 및 분석은 연속적인 의무 시간 척도에서 수행된다.

모든 동물 실험은 동물의 보호에 관한 독일 법률에 따라 수행하고, 하이델베르크 대학의 윤리 심사위원회에 의해 승인되었다.

계측 1. 준비

1. 수축력을 위해 측정은 다중 챔버 기관 목욕 설정을 사용합니다. 생체 수축력 기관 목욕 설정의 구성 요소는 그림 2에 표시됩니다.
   참고 : 유두근의 준비 및 실험 프로토콜의 시작 사이의 시간 설정, 장비를 최소화하고 실험 tissue.This를 수집 제공하기로 버퍼를 사전 준비하려면조직 실험을 실시 가능한 남아있는 시간의 양을 최대 ES.
2. 컴퓨터와 데이터 수집 장비를 시작합니다. 장기 목욕 열 (사전에 32 ° C)의 전원을 켜고 설정 온도에 단위를 할 수 있습니다.
3. 수집 장비를 준비합니다. 소프트웨어 설명서에 언급 된 데이터를 기록 시작합니다.
4. 확인하고 각 채널 (필요한 경우) 캘리브레이션을 수행하고 인....

결과

절연 뮤린 유두근 제제의 수축력 측정이 원고의 프로토콜은 생리 학적 조건 하에서 실험 재현성있는 결과를 달성하기 위해 최적의 상태로 조정된다. 최적의 실험 조건을 정의하기 위해 우리는 기관 욕 온도 및 세포 외 칼슘 농도 (도 ¹² 참조) 가변 파일럿 실험을 수행 하였다. 여기에 설명 된 프로토콜은 1.5 mm의 세포 외 칼슘 농도 및 32 ° C의 온도로 수행 하였다.

기저 수축 특성

시간 피크, 속도 경련, 경련 힘 진폭 기저 수축 특성, 매개 변수 특성화 및 휴식 50 시간 (반 최대 완화 시간 (5 % 기저부터 최대 수축력에 도달하는데 필요한 시간으로 정의)에 필요한 시간으로 정의 ) 휴식 힘의 절반에 도달이 프로토콜에 사용됩니다. TW의 대표적인 추적가렵다 이들 파라미터들의 분석은도 3A-B에 도시되어있다.

칼슘 의.......

토론

이 논문에서는 마우스에서 심장 생리학 및 병리학 관련된 여러 과학 질문에 응답뿐만 아니라 형질 전환 라인 분석 및 새로운 약학 적 접근법의 검색을 지원하는 데 사용할 수있는 시험 관내 뮤린 유두근 수축력을 조사하는 방법을 서술 심장 기능 장애를 치료한다. 우리는 심근 수축력의 생리 병리학 적 및 약리학 적 특성을 평가하기 위해,이 방법의 사용을 예시한다 (도 3 참조). 추가 응용 프로그램을 여기에 예시 된 다른 약리 에이전트를 사용하여 세포 내 경로의 평가를 포함하지 (도 ¹² 참조).

같은 허혈성 심장 질환과 심장 마비 등 심장 질환 저명한 임상 문제를 표시하고 전세계 ²² 사망률과 이환율의 주요 원인이 남아있다. 중심부에 표현 된 많은 단백질, 심장 수축력을위한 그들의 역할은 STIL입니다난 제대로 이해 또는 지금까지 공부하지. 격리 된 유두 근육의 수축력 측정은 마우스 모델에서

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
염화나트륨	Sigma-Aldrich	S7653
중탄산나트륨	Sigma-Aldrich	S5761
염화칼	Sigma-Aldrich	P9333
포도당	Sigma-Aldrich	D9434
나트륨 피루브산	시그마-알드리치	P5280
염화칼슘 이수화물	시그마-알드리치	223506
마그네슘 황산염 헵타하이드레이트	시그마-알드리치	230391
인산칼륨 일염기	성 시그마-알드리치	P 5655
2,3-부탄디온 모노심	시그마-알드리치	B0753
3-이소부틸-1-메틸크산틴	시그마-알드리치	I5879	위험 문구 H 302, DMSO Dimethyl
sulfoxide (DMSO)	에서 해결 Sigma-Aldrich	D2650
이소프레날린 염산염	Sigma-Aldrich	I5627	위험 문구 H 315-H319-H335
Sodium Heparine 250.000 IE/10 ml	ratiopharm	PZN 3874685
Histamine dihydrochloride	Sigma-Aldrich	H7250	위험 문구 H 315-H 317-H319- H334-H335

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