숙주-병원체 상호 작용에 대한 체외 연구는 특정 면역 반응의 특성을 규명할 수 있지만 복잡한 반응의 영향을 관찰하려면 생체 내 모델이 필요합니다. 칸디다 알비칸스(Candida albicans) 노출 후 녹농균(Pseudomonas aeruginosa) 매개 폐 감염을 사용하여 인공호흡기 관련 폐렴 병원성과 관련된 미생물 상호 작용에 대한 쥐 모델을 확립했습니다.
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이 논문에서
요약
초록
호스트 병원체 상호 작용을 공부하는 것은 미생물 감염시 병원성의 기본 메커니즘을 이해하기 위해 우리가 할 수 있습니다. 호스트의 예후는 병원균 1에 대한 적응 면역 반응의 참여에 따라 달라집니다. 면역 반응은 병원체 및 여러 면역 또는 비 면역 세포 유형 2의 상호 작용에서 복잡하고 결과입니다. 시험관 연구는 이러한 상호 작용의 특성과 세포 - 병원균 상호 작용에 초점을 맞출 수 없습니다. 또한, 특히 화농성 만성 폐 질환 또는 기계적 환기 환자에서 환자의기도 3에서는 polymicrobial 커뮤니티 존재 및 호스트 병원균 작용을 복잡. 녹농균 및 칸디다 알비 칸스 모두 문제가 자주 기관지 샘플로부터 단리 4 병원균되고 특히 중환자 5, 심각한 감염과 연관된. 미생물 상호 작용이체외에서 이러한 병원체 사이에보고하지만, 이러한 상호 작용의 임상 적 영향은 6 불분명 남아되었다. C. 알비 칸스과 경찰 사이의 상호 작용을 연구하는 애 루기 노사, C.의 뮤린 모델 P. 다음에 알비 칸스기도의 식민지, aeruginosa- 매개 급성 폐 감염을 행 하였다.
서론
동물 모델, 특히 마우스는 병원체에 대해 광범위 면역 반응을 조사하는 데 사용되어왔다. 타고난 및 획득 면역은 설치류와 인간 (7) 사이에 차이가 있지만, 번식의 용이성과 다양한 유전자 녹아웃의 개발, 면역 반응 (8)을 연구하기 위해 쥐에게 훌륭한 모델을합니다. 면역 반응은 복잡하고 병원균의 상호 작용의 결과, 상주 미생물 식물과 여러 면역 (림프구, 호중구, 대 식세포) 및 비 면역 (상피 세포, 내피 세포) 세포 유형 2. 시험 관내 연구는 관찰 허용하지 않습니다 이러한 복잡한 상호 작용은 주로 독특한 세포 병원체의 상호 작용에 초점을 맞추고있다. 동물 모델 사용할 때는주의 매우 특이적이고 중요한 문제로 제한해야하지만, 마우스 모델은 생체 내에서 포유 동물의 면역 반응에 대한 우수한 통찰력을 제공하고 중요한 임상 문제 (7)의 일부를 해결할 수있다.
기도에서 미생물 커뮤니티는 다른 미생물 (6)의 다수 관련 복잡하다. 무엇 "정상"기도 마이크로 바이 옴을 구성하는 결정 남아 있지만, 주민 커뮤니티 자주 polymicrobial 있으며, 다양한 생태의 원본. 화농성 만성 폐 질환 (낭포 성 섬유증, bron....
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프로토콜
동물 실험에 대한 지역 윤리 지역위원회는 임상 연구 지침에 국내 및 국제 동물 보호 및 사용에 따라,이 방법을 승인했다.
1. 샘플 컬렉션
- 샘플 저장
- 저하를 방지하기 위해 냉동 저장 될 때까지 20 ° C 또는 얼음에 -에 저장 즉시 모든 샘플을 수집하고. 기관지 폐포 세척액 (BAL) 성능을 향상시키기 위해 얼음 멸균 인산 완충 식염수 (PBS)를 배치했다.
- 외과
- 오토 클레이브를 사용하여 모든 수술 장비 소독.
참고 : 가능하면이 교차 오염을 방지하기 위해 복부 및 흉부 단계는 악기의 두 가지 세트를 사용하는 것이 좋습니다. 필수 해부 장비는도 4a에 자세히 설명되어 있습니다
- 오토 클레이브를 사용하여 모든 수술 장비 소독.
2. 마우스, 세균과 효모 균주
- 다시 동물의 지방의 사용을 준수 하우스 마우스때문에 바이오 안전성 레벨 2 미생물의 사용으로 바이오 안전성 레벨 2 주택 시설, 음식과 물을 적량으로, 케이지 당 5 마우스를 초과하지 않고 통풍이 랙에서 검색위원회 지침 : P. 녹농균 및 C 알비 칸스.
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결과
프로토콜 정보 중 미리 알 수있는 바와 같이, 실험 (: 실험 막대도 1)을 완성해야 오일. 하나의 오퍼레이터는 실험의 전체 동작 동안 권유되고 10 마우스의 최대 프로세스를 처리 할 수있다. 더 동물이 필요한 경우, 두 사람이 특히 수술 시료 채취를 위해 필요하다. 실제로 모든 샘플은 마지막 마우스에서 FITC 표지 된 알부민의 증가 패시브 폐포 모세 혈관 누출을 방지하기 위해 2 시간에 따라 수집되어야한다.
첫 번째 단계는 C.의 제조이다 알비 칸스 접종 물 및 비강 내 점적은 C. 의한기도 집락을 얻었다 알비 칸스. 4일 지속성 모델 C. 5 × 105 CFU의 비강 내 점적 주입에 의해 얻어진다 마우스 당 알비 칸스 (그림 2B). 이 사일 동안, 마우스는 L를 유도하지 않습니다 5 ×
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토론
동물 모델, 특히 포유 동물은 면역의 분야에서 호스트 병원체 상호 작용의 복잡한 메커니즘을 규명하는데 유용하다. 물론, 단지 필수적이어야 동물 모델에서 얻을 수있는 정보의 필요성; 그렇지 않으면, 동물의 사용은 체외 모델로 교체해야합니다. 이러한 동물 모델은 병원체 간의 상호 작용이 다 성분 호스트 응답에 의해 매개되기 때문에 단지 동물 모델에 의해 제공 될 수있는 통찰력을 나타낸다. 현재이 호스트 병원체 상호 작용을 연구하는 데 사용 마우스는 성숙하고 변경되지 않은 면역 반응과 6~10주 세 젊은 성인입니다. 선천성 면역 반응에 집중하면, C57BL6 / J 마우스 배경이 바람직하다. 섹스와 면역 반응에 호르몬주기 (특히 에스트로겐)의 영향을 방지하기 위해, 남성은 따라서 최선의 선택입니다. 통계적 유의성을 달성하기 위해, 그룹이 실험의 끝에서 적어도 5 개인이 있지만, 모든 동물 experimen 의해 제안해야테이션 가이드가 사용 동물의 수는 엄격한 최소한으로 감소하고 정제한다.
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공개 사항
저자는 공개할 것이 없습니다.
감사의 글
저자는 릴 대학과 릴 파스퇴르 연구소, 특히 동물 사육, 사육 안전 및 축산을 담당하는 티에리 샤사(Thierry Chassat)와 장 피에르 드카벨(Jean-Pierre Decavel)에게 감사를 표합니다. 이 연구는 "Société de Pathologies Infectieuses de Langue Française"(SPILF)의 지원을 받았습니다.
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참고문헌
- Casadevall, A., Pirofski, L. -A. The damage-response framework of microbial pathogenesis. Nat. Rev. Micro. 1 (1), 17-24 (2003).
- Eddens, T., Kolls, J. K. Host defenses against bacterial lower respiratory tract infection. Curr. Opi. Immunol. , (2012).
- Beck, J. M., You....
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