적응 면역은 T 세포와 항원 제시 세포 사이에 형성된 역동적인 '면역학적 시냅스'에 의해 제어됩니다. 이 프로토콜은 연구가 부족한 생리학적 APC이자 새로운 유형의 '평면 세포 APC 모델'로서 내피 세포를 조사하는 방법을 설명합니다.
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이 논문에서
요약
초록
적응성 면역 T 세포와 항원 제시 세포 ( '장갑차') 사이의 동적 인 상호 작용에 의해 조절 '면역 시냅스'라 칭한다. 이러한 친밀한 세포 - 세포 인터페이스 내에서 MHC / AG-TCR, F - 굴지, 접착의 개별 하위 세포 클러스터 및 신호 분자가 형성 빠르게 개조. 이러한 역학은 중요한 효율성과 개발 면역 반응의 품질 모두의 결정 때문에 병리학 적 면역 대 보호의 것으로 생각된다. 생리적 장갑차와 면역 시냅스의 현재 이해는 얻을 수있는 영상 해상도의 무능력에 의해 제한된다. 인공 기판 모델 (예를 들면, 평면 지질 이중층)이 우수한 해상도를 제공하며 매우 유용한 도구되었을지라도, 이들은 본래 비 생리적 및 과도하게 단순화된다. 혈관과 림프 내피 세포는 '반 직업의 중요한 말초 조직 (또는 기질) 구획으로 등장알 장갑차 '. (전문 장갑차의 분자 기계의 대부분을 표현할)이 거의 평탄한 장갑차 세포 표면을 형성하는 독특한 특징을 갖고 (형광성 단백질 리포터로, 예) 형질 용이하다. 여기서 기본 접근법을 설명한다 신규하고 개선 된 이미징 및 항원 기본적인 시그널링 프로세스 심문 생리적 '평면 셀룰러 APC 모델'내피 세포 등을 구현한다.
서론
T 림프구는 주요 조직 적합성 복합체 (MHC)에 효율적으로 결합 된 펩티드 항원은 (Ag)을 인식하는 능력을 특징으로 적응 면역계의 분기 아르는 T 세포 수용체 (TCR도 1)를 통해 분자. 나이브 림프구 구조적 마이그레이션 '전문의 Ag 제시 세포'(장갑차; 예 : 수지상 세포)을 주사 메모리 / 효과기 T 세포가 효과적으로 말초 조직 내의 장갑차 및 잠재 표적 세포의 매우 넓은 범위를 조사 할 필요가 있지만, 림프절 내.
APC에 동족의 Ag의 최초 인식 다음 분에서 자신의 마이그레이션을 체포하고 전문 친밀한 세포 - 세포 인터페이스라고 '면역 시냅스'를 형성하기 시작 림프구 (IS). 지속 (즉, 30 ~ 60 분) 접점이 증폭 2-7 신호를 유지해야한다. 새로운 연구는 IS 내에, 그것이 연속 형성하고 신속한 R이라고 파악강도와 면역 반응 2-7 결과의 품질을 결정 (즉, MHC / AG-TCR, F - 굴지, 접착 및 신호 분자를 포함) 이산 서브 셀룰러 신호 마이크로 클러스터의 emodeling. 그러나, 이러한 방법의 세부 사항 및 동적 규제기구는 불완전 8,9 이해된다.....
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프로토콜
이 프로토콜에 설명 된 모든 실험은 기본 인간 T 세포 및 시판 차 인간의 내피 세포 인체를 이용한 (피부 또는 폐 미세 혈관되는 EC) .ANY 연구 프로토콜은 기관 검토위원회의 승인을 받아야한다 서면 동의서가에서 제공해야합니다으로 실시하고 있습니다 각 혈액 기증자. 이 프로토콜을 사용하여 수행 실험 베스 이스라엘 집사 의료 센터의 IRB 승인했다.
1. 준비 인간의 CD4 +받은 Th1 이펙터 / 메모리 T 세포
- 알코올과 정맥을 닦아, 기증자의 팔에 지혈대를 적용하고 바늘을 삽입합니다. 천천히 항응고제로 EDTA를 사용하여 vacutainer에 혈액 15ml를 그립니다. 혈액 인출되었을 때, 바늘을 제거하기 전에 지혈대를 푼다. 즉시 바늘을 제거 할 때 멸균 거즈로 상처 압력을 적용합니다.
- 50 ML 튜브에 혈액을 전송합니다. 1 희석 (최종 부피 30 ㎖) : 1 실온에서 RPMI-1640을 추가합니다. 조심스럽게 희석 오버레이이러한 실온에서 피콜 - 페이크로 림프구 미리 필터링 된 절연 매체의 15 ml에 포함 된 두 개의 50 ㎖ 튜브 위에 D 혈액입니다.
- 스윙 버킷 로터에서 1,200 XG에 실온에서 30 분 동안 원심 분리하여 그라데이션. (RPMI-1640 500 ㎖, 50 ㎖의 FCS,....
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결과
내피 세포를 사용하고 생리적 복잡성 및 전문 장갑차의 변형성을 가진 평면 지질 이중층 모델의 해상도의 이점을 조합 한 새로운 촬상 방식은 (도 1)을 개발 하였다. (2)이 관찰] 이주 칼슘 플럭스 및 위상 역학의 예를 제공 도표 접근. 내피에 처짐의 부재 하에서, SAG 특정 CD4 +받은 Th1 림프구 빠르게 편광 확산 칼슘 플럭 싱없이 내피 표면 (도 2a)을 통해 측 방향으로 이동 (미도시). ~ 5 ~ 10 분 이내에 이러한 림프구는 내피를 통해 윤회를 시작합니다. 내피 위에 SAG로드의 존재에서, '기름에 튀긴 된 계란'토폴로지 대칭 확산 림프구 (즉, 30 ~ 60 분) 세포 내 칼슘 플럭스 (그림 2B, 영화 1) 유지를 개시 할들이 전시되는 시간 동안을거.......
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토론
전반적으로,이 프로토콜은 I) 파악 하였다 생리적 장갑차로 내피 세포를 조사하기위한 방법을 설명하고, II) '평면 세포 APC 모델'의 새로운 유형으로. 전자와 관련하여, 이는 점차 적응 면역 반응을 형성하는데 16-18 (조혈 장갑차에 비해, IE)를 둘레 비 조혈 (또는 '기질') 장갑차 중요한, 비 중복 역할을하는 것으로 인식되고있다. 이러한 '세미 프로'장갑차, 혈관과 (크게 전문 장갑차를 능가) 림프 내피 세포 중 최고의 16-18 평가 중입니다. 그러나, 신호 이벤트의 세부 사항과 결합 면역 시냅스는 주로 uninvestigated 남아있다. 여기에 설명 된 방법은이 새로운 영역에 대한 이해를 증진하기위한 기초를 제공한다. 예를 들어, 별개의 adaptiv을 나타내는 것으로 공지되어 다른 조직으로부터 내피 형성 ISS의 연구에 이러한 방법을 적용전자 면역 기능 (예를 들어, 간, 림.......
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공개 사항
저자는 공개할 것이 없습니다.
감사의 글
대표 이미지 중 일부를 생성하는 데 도움을 주신 Peter T. Sage 박사님께 감사드립니다. 이 작업은 C.V.C.(HL104006)에 대한 NIH R01 보조금의 지원을 받았습니다.
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참고문헌
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