코어 텍스, Hippocampus-, Thalamus-, Hypothalamus-, 횡 중격 Nucleus-과 줄무늬 별<em&gt; 자궁 내</em&gt; C57BL / 6 마​​우스에서 Electroporation에

Jan Baumgart; Nadine Baumgart

doi:10.3791/53303

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방법 논문

코어 텍스, Hippocampus-, Thalamus-, Hypothalamus-, 횡 중격 Nucleus-과 줄무늬 별

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DOI:

10.3791/53303

⸱

2016년 1월 18일

Jan Baumgart¹ , Nadine Baumgart¹

¹TARC (Translational Animal Research Center), University Medical Center, JGU Mainz

이 논문에서

요약

이 프로토콜은 자궁 내 전기천공법을 통해 C57BL/6 중추신경계의 다른 영역을 구체적으로 transfection하는 방법을 자세히 설명합니다. 이 프로토콜에는 피질, 해마, 시상, 시상하부, 외측 중격 핵 및 선조체로 발달하는 영역의 형질주입에 대한 자세한 지침이 포함되어 있습니다.

초록

자궁 내 전기천공법은 설치류 중추신경계의 다양한 유전자를 빠르고 효율적으로 시공간 조작하기 위해 널리 사용되는 기술입니다. 원하는 유전자의 과발현은 shRNA 매개 기능 손실 연구와 마찬가지로 가능합니다. 따라서 광범위한 응용 프로그램을 제공합니다. 별개의 영역에 있는 특정 세포를 표적으로 할 수 있는 가능성은 이 매우 유용한 방법의 잠재적 응용 범위를 더욱 증가시킵니다. 특정 영역을 효율적으로 대상으로 하기 위해서는 배아 단계, 적용할 전압, 가장 중요한 전극의 위치와 같은 미묘함에 대한 지식이 필수적입니다.

여기에서는 C57BL/6 마우스 중추 신경계의 여러 영역에 대한 자궁 전기천공법에서 특정적이고 효율적인 방법을 제공하는 상세한 프로토콜을 제공합니다. 특히, 후비장 피질(retrosplenial cortex), 운동 피질(motor cortex), 체성 감각 피질(somatosensory cortex), 이상형 피질(piriform cortex), 각진 암모니(cornu ammonis) 1-3, 치상회(dentate gyrus), 선조체(striatum), 외측 중격 핵(lateral septal nucleus), 시상(thalamus) 및 시상하부(hypothalamus)로 발달하는 영역을 transfection하는 방법을 보여줍니다. 적절한 배아 단계에 대한 이러한 정보를 위해 해당 배아 단계에 대한 적절한 전압이 제공됩니다. 가장 중요한 것은 양극의 적절한 위치를 나타내는 각도 맵이 묘사되어 있다는 것입니다. 이 표준화된 프로토콜은 자궁 내 전기천공법의 효율성을 촉진하는 데 도움이 되며, 이는 또한 동물 수를 감소시킬 수 있습니다.

서론

3 개의 독립적 인 그룹 ^1-3에 의해 2001 년 처음 소개 이후 N 자궁 일렉트로는 설치류 중추 신경계에서의 유전자 발현을 분석하기 위해 널리 사용되는 표준 도구가되었다. 지속적으로 개선 기술, 아직 시간과 돈 단순하기 때문에, 자궁 내 전기 호소 소비에도 불구하고,이다 녹아웃 마우스의 세대에 비해. 따라서, 자궁 내 전기는 신속하고 효율적인 이득이 손실-의 기능 연구 ^(4)를 할 수 있습니다.

뇌 영역 트랜, 음으로 하전 된 플라스미드를 함유하는 용액이 뇌실 내로 주입된다. 전기 펄스 동안, 음으로 하전 된 DNA는 양극으로 이동한다 따라서 형질 영역은 양극의 위치를 변경하여 간단하게 선택할 수있다. 그것은 자주 중추 신경계의 다양한 영역 (TA)이 될 수 있음을 보여왔다^3,5-8를 rgeted. 예를 들어, 최근의 연구는 해마, 배 모양의 피질이나 줄무늬 ^9-11의 특정 형질을 보여줍니다. 그러나, 해당 위치에 대한 정보는 거의 종종 표준화되지 않고, 항상 상이한 마우스 균주로 전송할 쉽지 않다.

특정 배아 단계의 형질 사소한는 거리가 ....