아밀로이드-β (Aβ)의 동물 모델에 정의 된 수량 및 Aβ 단편 종의 관리를 가능하게하고 각 연구 그룹 내의 개별 차이를 줄여 주사 하였을. 이 프로토콜은 정상 마우스에서 알츠하이머와 같은 행동 이상의 생산을 가능하게 정위기구없이 Aβ의 뇌실 (ICV) 주입을 설명합니다.
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이 논문에서
요약
초록
Amyloid-β (Aβ)는 가족성 및 산발성 알츠하이머병(AD)의 주요 병리학적 매개체입니다. 알츠하이머병 환자의 뇌에서 Aβ 올리고머와 플라크의 점진적인 축적이 관찰됩니다. 이러한 Aβ 이상은 장기적인 강화를 차단하고 시냅스 기능을 손상시키며 인지 결핍을 유발하는 것으로 여겨집니다. 임상 및 실험적 증거에 따르면 뇌에서 Aβ 수치의 급격한 증가는 알츠하이머와 유사한 표현형의 발달을 가능하게 합니다. 따라서 많은 경우에 Aβ의 ICV(intracerebroventricular) 주입을 통해 AD 마우스 모델을 급성으로 생성하는 방법을 설명하는 자세한 프로토콜이 필요합니다. 이 프로토콜에는 펩타이드 준비부터 행동 이상 테스트에 이르기까지 Aβ 주입 마우스를 사용한 실험 단계가 포함되어 있습니다. 주사 전에 도구와 동물 피험자를 준비하는 과정, ICV 주사를 통해 Aβ를 마우스의 뇌에 주입하는 과정, 인지 장애의 정도를 평가하는 과정은 프로토콜 전반에 걸쳐 쉽게 설명되며, Aβ의 효과적인 ICV 주사를 위한 팁에 중점을 둡니다. 연구자들은 지정된 Aβ 주사로 AD의 특정 측면을 모방함으로써 노화 과정을 우회하고 Aβ 이상의 다운스트림 병리학에 집중할 수 있습니다.
서론
알츠하이머 병 (AD)의 병리학 적 특징은 그 아밀로이드 β (Aβ)을 감안할 때, AD의 동물 모델의 개발은 Aβ의 신경 과발현에 초점을 맞추고있다. 아밀로이드 전구체 단백질 (APP) 또는 프레 (PS)의 돌연변이는 Aβ 평형 외란 궁극적 가족 성 AD (1)의 발병을 유도하기 때문에, APP 또는 PS 유전자 돌연변이를 포함하는 마우스 모델이 일반적으로 허용되고있다. 형질 전환 마우스의 넓은 범위 중, 원형 마우스 모델은 다음과 같습니다 : TG2576, PDAPP, APP / PS1과 APP23합니다. 뇌에서,이 마우스는 일반적으로 Aβ 응집 결국 노인반을 나타내고; 플라크 형성은 그들이 학습과 기억의 행동 테스트에서 성능 저하를 표시하도록 유의 한인지 장애옵니다. 천연 인간 AD 병리를 모방하는 트랜스 제닉 마우스를 사용하여 생성을 따라서 다이의 진행을 모니터하기 위해 우리시킴으로써 AD 연구 사회에 기여한sease. 이 Aβ 플라크를 개발하기 위해 마우스 개월 취하고 더 긴 Aβ 유도 시냅스 또는 2,3- 행동 이상을 표시하기 때문에, 트랜스 제닉 마우스를 사용하는 것은 비 경제적으로 시간 소모적이다. 원래 형질 전환 마우스 모델의 단점을 극복하기위한 대안으로 개발 된, 비 - 형질 전환 모델은 또한 일반적으로 그....
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프로토콜
모든 동물 실험 (1978 개정, NIH 간행물 번호 8023) 실험 동물의 관리 및 사용을위한 건강 가이드의 국립 연구소에 따라 수행과의 기관 동물 관리 및 사용위원회의 동물 관리 및 사용위원회와 함께했다 KIST (서울, 한국).
1. 동물 준비
- 7 주령의 수컷 ICR 마우스 (또는 C57BL / 6) 군을 준비한다.
- 쥐가 항상성을 복원 전송 ~ 7 일 동안 적응 과정을 통해 가자. 일반적으로, 각 장에 4-5 마우스 그룹을 올려 놓고 12/12 시간의 명 / 암주기, 22 ~ 23 ° C에서 40 % 습도에서 그들을 유지한다. 물과 음식 광고 무제한을 제공합니다.
순응 과정이 새로운 주택, 음식, 물 운송 및 적응의 스트레스에서 회복을 허용하는 것이 중요합니다, 새로운 케이지 빛 사이클뿐만 아니라 냄새 :합니다. 이 실험에서, 마우스는 SPE에있는 개별 환기 케이지 (IVCs)에 수납 된cific 병원체 무료 (SPF) -grade 시설 - 각 마우스의 무게를 측정하고, 그 중량 평균에서 ± 10 %를 벗어나는 주제를 제외 할 수 있습니다.
- 두 그룹으로 주제를 나누어 : 차량 주입 그룹 (Aβ를 (-))와 Aβ 주입 그룹 (Aβ (+)). 실험은 특정 약물 후보의 효능을 테....
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결과
이 섹션에서는 Aβ 집계 및 메모리 적자의 Y-미로 평가의 확인에 의해 얻을 수있는 결과의 예를 보여줍니다. 전장 Aβ를 사용하여 42 개의 아미노산 Aβ 모노머, 올리고머의 혼합물, 및 피 브릴 (도 3)의 (1-42) 펩티드를 제조 하였다. HFIP 유도 monomerization 공정을 통해, 상대적으로 균일 한 단량체 (레인 B)를 얻었다. 7 일간 배양 한 후, Aβ 집계 (레인 C)의 다양한 크기를 개발했다. 삼량 체 및 사량은 Aβ의 올리고머 형태 중 우점종이었다. 작업 메모리 공간은 Y 미로 시험에서 교대 통해 Aβ 주입 된 마우스에서 평가 하였다. 각 마우스 자유롭게 미로를 탐험 할 수있는 동안 팔 선택의 순서와 전체 팔 항목의 수를 기록했다. 더 그대로인지 능력은 마우스보다 덜 최근에 방문한 아암 알테 들어가는 경향이 있어야그 팔 선택을 rnating. Aβ 주입 마우스 그룹인지 결핍 (도 4)의
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토론
이 프로토콜에서 가장 중요한 단계는 Aβ의 ICV 주입입니다. 이 프로토콜은 정위기구 (11, 12)없이 마우스의 ICV 영역으로 Aβ를 주입하도록 설계되었습니다. 실험을 시작하기 전에, 대신 Aβ의 파란색 염료와 연습 주사의 예비 기간은 충분한 손재주를 달성하기 위해 장소를해야한다. 즉시 주사 한 결과, 안료 분사가 적절하게 수행되었는지 여부를 확인할 필요가있다. 조심스럽게 뇌를 꺼내 해당 영역이 파란색으로 염색되었는지 여부를 확인합니다. 색소 라인에 도달하지만,의 ICV 영역의 깊이를 초과 할 수 없습니다. 일반적으로 50 개 이상의 ICV 주사 한 후 달성 90 % 성공률 최소가 제안된다. ICV 주입하는 동안, (브레 그마 영점에 가까운) 시상 동을 주입하여 혈관의 손상을 방지.
Aβ 주입 한 후, 통계적으로 유의 한 기억 손상이 관찰되었다Aβ 주입 그룹과 행동 테스트를 Y가-미로 사용하여 대조군 사이 라. 행동 실험의 종류는 13 미로
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공개 사항
저자는 공개할 것이 없습니다.
감사의 글
이 연구는 한국의 보건 복지부, 공화국 (: H14C04660000 허가 번호)에 의해 투자 한국 보건 산업 진흥원을 통해 한국 의료 기술 R & D 프로젝트의 기금에 의해 지원되었다.
....액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| ICR 마우스 | Orientbio | 남성, 6-8 주, 체중 27-29g | |
| C57BL / 6 마우스 | Orientbio | 남성, 6-8 주, 체중 21-23g | |
| Amyloid-beta1-42 | 집 합성 | 재고 농도 : 1 mM / DMSO, 주입 농도 : 100 μ M/10% DMSO 및 90% PBS | |
| ICV 주입 주사기(26s 게이지) | Hamilton | 80308 | |
| Evans blue dye (EBD) | abcamBIochemicals | ab120869 | 1% EBD in PBS |
| DMSO | Sigma | D2650 | |
| PBS | gibco | 10010-023 | |
| Gradi-GelTM II Gradient PAGE 분석 키트 | ELPiS Biotech | EBS-1056 | 15% 젤 |
| Precision Plus ProteinTM Dual Xtra Standards | Bio-Rad | 161-0377 | |
| 은 염색 키트 | GE-Healthcare | 17-1150-01 | |
| LabDiet | Orientbio | 5053 |
참고문헌
- Kam, T. I., Gwon, Y., Jung, Y. K. Amyloid beta receptors responsible for neurotoxicity and cellular defects in Alzheimer's disease. Cell Mol Life Sci. 71, 4803-4813 (2014).
- Elder, G. A., Gama Sosa, M. A., De Gasperi, R. Transgenic mouse models of Alzheimer's disea....
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재인쇄 및 허가
