C57BL / 6 마​​우스의 전신 홍 반성 루푸스의 BM12 유도 성 모델 (SLE)

요약

bm12 림프구가 C57BL/6 수용자로 이식되는 것은 전신 홍반성 루푸스의 확립된 모델입니다. 여기에서는 이 모델을 사용하여 질병을 시작하는 방법과 유세포 분석을 통해 T 여포 보조 세포, 생식 중심 B 세포 및 형질 세포를 특성화하는 방법을 설명합니다.

초록

전신성 홍반성 루푸스(SLE)는 다양한 임상적, 면역학적 증상을 보이는 자가면역 질환입니다. 여러 자발적이고 유도 가능한 동물 모델은 bm12 전달 모델을 포함하여 인간 질병의 일반적인 구성 요소를 반영합니다. bm12 비장 세포 또는 정제된 CD4 T 세포의 이식 시, C57BL/6 마우스는 높은 수준의 순환 항핵 항체를 수반하는 T 여포 보조 세포(Tfh), 생식 중심(GC) B 세포 및 형질 세포의 큰 빈도로 빠르게 발달합니다. 이 모델은 순수한 C57BL/6 배경의 마우스를 사용하기 때문에 연구원들은 비교적 짧은 기간에 형질전환 또는 녹아웃 마우스 균주의 질병 진행을 빠르고 쉽게 연구할 수 있습니다. 여기에서는 다중 색상 유세포 분석을 통한 모델 및 정량 Tfh, GC B 세포 및 형질 세포의 유도를 위한 프로토콜에 대해 설명합니다. 중요한 것은 이러한 프로토콜이 SLE의 대부분의 마우스 모델에서 질병을 특성화하고 다른 질병 모델에서 Tfh, GC B 세포 및 형질 세포를 식별하는 데에도 사용할 수 있다는 것입니다.

서론

전신성 홍 반성 루푸스 (SLE)는 항핵 항체 (ANA) 생산 및 사구체 신염을 특징으로 prototypically 복잡한자가 면역 질환이다. 많은 다른 피부를 포함하여 후유증, 심장 - 폐 및 간 병변은 몇몇 개인의 질병과 관련이있다. 미국에서 보급 추정치는 여성과 소수 민족 ^(3)에서 특히 높은 빈도로, 150,000-1,500,000 ^{1, 2에서} 널리 다릅니다. SLE의 원인이 식별 곤란 하였지만, 전신성자가 면역에 절정 다양한 유전 적 및 환경 적 요인의 상호 작용으로부터 발생하는 것으로 생각된다.

많은 동물 모델은 질병 발병과 진행으로 이어지는 요인을 연구하기 위해 사용되었다. SLE의 클래식 마우스 모델은 P 등 안에 1000mg F1 모델과 NZM 유도체, MLR / LPR 변형 및 BXSB / YAA 변형 및 유도 시스템 NZB x를 포함하여 유 전적으로 걸리기 마우스 균주를 포함ristane 및 만성 이식편 대 숙주 질환 (cGVHD) 모델 ^4. GVHD 모델에서자가 항체 생산의 초기 보고서는 F1 전송 ^5에 부모에 대한 다양한 마우스 균주 또는 햄스터 균주를 사용 ^{- 8;} 루푸스와 같은 질병을 연구하는 데 더 일반적인 방법은....

프로토콜

동물의 작업은 평가 및 실험 동물 관리 국제 인증 및 우리의 기관 동물 관리 및 사용위원회 협회 (IACUC)에 의해 설정 지침에 따라 특정 병원균이없는 조건에서 수행 하였다.

주 : 이러한 도너받는 동물 또는 가능한 경우에 하나로서 CD45.1 congenic 마커를 발현하는 마우스 통합, 이것은 도너 그래프트 효율과 도너 CD4 T 세포의 특정 집단 팽창을 모니터링 할 수있게하기 때문이다. 도너 또는 수신자 달리 유전자 변형 마우스의 사용을 고려하는 경우, 균주가 적절 B6 배경에 backcrossed되거나 전송 세포 거부-이는 될 수 대표적인 결과 및 토론 섹션에서 더욱 상세히 언급 될 것이다 보장.

참고 : 12-16 쥐를 주입하기에 충분한 세포를 생성한다 마우스 BM12 수확 4 기증자에 대한 다음 절차의 세부 볼륨. 여섯십이주 된 BM12 마우스에 약 25 % CD4 T 세포와 약 100-140000000 림프구를 얻을 수 있습니다. 위 또는 아래로 따라 마우스의 다른 번호 또는 다른 마우스 변종, 규모의 볼륨으로 시작합니다. C57BL / 6 마​​우스는 일반적으로 20 % CD4 T 세포에 가까운 유사한 수익률을 제공합니다.

결과

병에 걸린 마우스는 질량과 세포 수 (그림 2)의 측면에서 비장을 2 ~ 3 회 건강한 쥐의 크기를 나타내는, 적은 14 일 종대을 개발한다.

비장 세포는 순차적으로 빛 산란 (SSC-에 의해 FSC-A)에 문이있다, 이중선 (FSC-으로 FSC-W 또는 -H), 생존 세포 (생존 염료의 낮은 염색) 및 CD4 ⁺ TCRβ ⁺ (그림의 제거 3A). 공여 세포는 CD45.1 및 CD45.2 (도 3b, 왼쪽 아래)에 기초하여 수신자 세포로부터 구별된다. PD-1, CXCR5,과 Bcl-6, 및 ICOS (도 3B, C)의 상향 조절을 특징으로 공여 세포는 주로, T의 모낭 헬퍼 (TFH) 세포의 표현형을 채택한다. 수신자 CD4 T 세포 집단의 일부는 또한 TFH (도 3b.......

토론

BM12 유도 모델은 SLE의 세포 및 분자 프로세스를 연구하는 비교적 간단하고 효율적인 방법입니다. 자기 항원에 대해 지시 적응 적 전송 CD4 T 세포의 활성화는 만성 여기 기술 된 바와 같이, 유동 세포 계측법에 의해 측정 될 수 TFH, GC B 세포와 플라즈마 세포의 축적에 이르게. 빠르고 쉽게 SLE 환자에서 발생하는 것과 유사하고, 궁극적으로 병리 적자가 항체의 축적을 제어하는​​자가 면역 배 중심 공정에서 후보 유전자 및 신규 치료법의 역할을 할 수 심문이 모델을 이용하여 미래 연구. 또한, 여기에 설명 유세포 분석을 비롯한 면역 글로불린의 추가 개발을 포함 마우스 모델을 연구하는 데 사용하지만,자가 면역, 감염, 및 알레르기에 한정 될 수 없다.

인간의 질병의 모든 동물 모델과 마찬가지로이 모델은 한계가있다. 어떤 질병 (STABLE)와 속도 감안할 때OPS와 그 크기는 SLE의 개발에 관련된 모든 유전자는이 모델에 필요한 병원성 될 가능성이 없다. 데이터가 .......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
나6. SJL-Ptprca Pepcb/BoyJ	The Jackson Laboratory	001162	CD45.1+ BoyJ 마우스 균주
B6(C)-H2-Ab1bm12/KhEgJ	The Jackson Laboratory	001162	Bm12 마우스 균주
FastDigest PsuI	Life Technologies	FD1554	유전형 분석을 위한 제한 소화 효소
1X RBC 용해 버퍼	eBioscience	00-4333-57
IMDM	GE Healthcare	SH30228.01
혈장 분리 튜브 (PST)	BD	365974	디칼륨 EDTA
혈청 분리 튜브 (SST)	BD	365967	혈액 수집 튜브와 응고 활성제 / SST 젤
Ficoll	GE 헬스케어	17-1440-02	고밀도 세포 분리 솔루션
Lympholyte-M	Cedarlane	CL5030	고밀도 세포 분리 솔루션
GL-7-biotin	eBioscience	13-5902-82
Streptavidin-BUV395	BD	564176
CD138-BV421	BioLegend	142508
CD4-BV510	BioLegend	100559
TCRβ-BV605	BD	562840
CD45.1-BV711	BioLegend	110739
CD45.2-FITC	BioLegend	109806
PD-1-PE	BioLegend	135206
CD19-PerCP	BioLegend	115532
Fas-PE-Cy7	BD	557653
CXCR5-APC	BioLegend	145506
고정 생존도 염료 ef780	eBioscience	65-0865-18
CD4-BV421	BioLegend	100443
1.2ml FACS 튜브 인서트, 랙형	USA Scientific	1412-1400
BD Falcon™ 라운드 바텀 튜브	BD	352017