방법 논문

멀티 채널 듀얼 전기장 미세 유체 칩을 이용하여 폐암 세포의 Electrotaxis 연구

DOI:

10.3791/53340

⸱

2015년 12월 29일

 ,  , 
1Research Center for Applied Sciences, Academia Sinica, 2Institute of Biophotonics, National Yang-Ming University, 3Biophotonics & Molecular Imaging Research Center (BMIRC), National Yang-Ming University, 4Department of Mechanical and Mechatronic Engineering, National Taiwan Ocean University, 5Ph.D. Program in Microbial Genomics, National Chung Hsing University

이 논문에서

요약

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

많은 미세유체 장치가 전기택시 연구에 사용하기 위해 개발되었습니다. 그러나 이러한 칩 중 어느 것도 세포에 대한 동시 화학 및 전기장(EF) 효과를 효율적으로 연구할 수 없습니다. 우리는 전기택시 연구에 사용하기 위해 더 잘 제어되고 공존하는 EF 및 화학적 자극을 제공하는 폴리메틸메타크릴레이트 기반 장치를 개발했습니다.

초록

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직류 전계 (dcEF) 아래 방향 세포 이동의 동작 electrotaxis로 지칭된다. 배아 개발, 세포 분화 및 상처 치유하는 동안 세포의 이동을 안내에 생리 dcEF의 중요한 역할은 많은 연구에서 입증되었다. electrotaxis 분석에 미세 유체 칩을 적용함으로써, 조사 과정을 단축하고, 실험 오차가 최소화된다. 최근, 마이크로 유체 장치는 고분자 물질 (예를 들면, 폴리 메틸 메타 크릴 레이트, PMMA, 아크릴) 또는 폴리 디메틸 실록산 (PDMS) 넓게 전기 자극에 세포의 반응을 연구에 사용되었다 만들었다. 그러나, PDMS 소자를 제조하는 데 필요한 다수의 단계와는 달리, 칩 uidic FL 아크릴 마이크로 간단하고 신속한 구조 장치 시제품 및 생산 모두에 적합하다. 그러나보고 된 장치 중 어느 것도 동시 화학 및 DCE의 효율적인 연구를 촉진하지세포에 F 효과. 이 보고서에서, 우리는 우리의 디자인 및 폐암 세포에 화학적 및 전기 자극의 효과를 동시에 조사하는 아크릴계 멀티 듀얼 전계 (MDF) 칩의 제조를 설명한다. MDF 칩은 하나의 시험에서 전기 / 화학적 자극의 여덟 조합을 제공합니다. 이 칩은 크게 필요한 실험 시간을 단축뿐만 아니라 electrotaxis 연구의 정확성을 증가뿐만 아닙니다.

서론

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직류 전계 (dcEF) 아래에 애노드 또는 캐소드 측으로 이동 부착 세포의 거동 electrotaxis로 지칭된다. 셀 electrotactic 동작은 배아 발생, 신경 재생과 상처 치유에 중요한 역할을한다. 이러한 쥐 전립선 암 세포, (2) 유방암 세포, 3, 폐 선암 세포 4-8로서 1 종양 세포가인가 dcEF하에 electrotactic 이동을 보여 주었다 . 생리 EF는 샘 조직에서 측정되었다. 9,10- Electrotaxis 또한 그랜드 - 관련 종양 세포에서보고되었다. 2,3- 암세포의 electrotaxis가 전이 인자로 간주되고, 종합적. 11의 전기 안내 제어 dcEF 하에서 암 세포는 암 치료를위한 미래의 잠재적 접근 할 수있다. 그러나 오늘, electrotaxis의 상세한 분자 메커니즘은 논란이 남아있다. 따라서, INF의 조사암 세포의 이동에 대한 전기 자극의 luence 암 치료 전략의 개발을 촉진 할 수있다.

최근 바이오 마이크로 유체 장치는 시험 관내에서 12 화학적 구배, 전기 자극 (13) 및 4 전단력을 유동 세포 반응을 연구 제작되었다. (또한 아크릴로 알려진 PMMA), 폴리 디메틸 실록산 (PDMS) 또​​는 폴리 메틸 메타 크릴 레이트를 사용하여 바이오 미세 유체 소자의 제작이 성공적으로 실험의 실패율을 감소시켰다. 또한, 생물학적 인 피사체를 조사하기위한 시제품으로서 아크릴계 마이크로 유체 장치를 이용하여 PDMS 칩을 사용하는 것보다 간단하다. 아크릴계 장치의 각종 기능은 electrotaxis 연구 개발되어왔다. 그러나, 이전 디자인의 것도 동시에 electrotaxis 연구를 위해 세포에 다양한 화학 조건의 효과와 전기 분야를 테스트 할 수 없습니다. 따라서, 우리는 미세 유체 장치 MU 개발ltichannel 이중 전기 분야 (MDF) 칩 포함하는 4 개의 독립적 인 문화 채널과 하나의 칩에 8 개의 다른 실험 조건을.

처음 허우에 의해보고 된 아크릴 기반 MDF 칩, 등., 8은 전기 자극과 여러 화학적으로 고립 채널을 통합합니다. 이러한 화학적으로 절연 한 채널 실험에서 배양 세포의 다른 유형을 사용할 수있다. 채널에 dcEF은 전력 공급에 의해 생성된다. 두 개의 독립적 인 전기장인가 전계 강도 (EFS) 0 EFS 또 다른 하나는, 각각의 화학적으로 절연 채널에서 수행된다. 이러한 방식으로, 칩 나은 제어 공존 EF 화학적 자극을 제공한다. 또한, MDF 칩 내부 화학적 확산의 수치 시뮬레이션 결과는 전혀 교차 오염이 24 시간 후 실험 기간 사이에 채널이 발생하지 것을 나타낸다. (8)

데비 비교리 의해보고 세륨 등., 14 MDF 칩은 전기적으로 자극 된 세포의 생화학 적 분석을 위해 더 큰 허용 배양 공간을 제공한다. 또한, 칩의 MDF 큰 관찰 영역보다 세포는 시험에서 관찰 할 수 있으므로, 전기적으로 자극 된 세포의 이동 속도 나 directedness의 분석은 더 정확하다. 황 등. (4) 및 영 외. (15)에 의해보고 된 이전 연구의 단일 채널 칩 설계는 셀 또는 화학 물질의 한 타입이 테스트 될 수 있도록. 그러나, MDF 칩 electrotaxis 다양한 화학 물질의 영향뿐만 아니라, 다른 종류의 세포에 대한 전기 자극의 영향을 조사하기 위하여 사용될 수있다. 즉, MDF 칩은 화학 선량 의존성 효율적인 학습을 허용한다.

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프로토콜

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1. 디자인 및 MDF 칩의 제조

  1. 이나 AutoCAD와 같은 상용 소프트웨어를 사용하여 개별 아크릴 층 패턴을 그리고 패턴을 저장합니다.
    1. 도 1A에서 4 층 아크릴 시트 패턴의 설계를 검토하고 층간 접속을 확인한다.
  2. 모든 아크릴 시트 및 CO 2 레이저 스 크라이 빙 (도 1B, 2A, 및 2B)를 이용하여 레이저 어블 레이션에 의해 양면 테이프를 제작한다. (16)
    1. 레이저 스크 라이버를 켜고 제어 노트북 컴퓨터를 연결합니다.
    2. 상용 소프트웨어를 실행하고 클릭하여 단계 1.1 설계 패턴을 열고 "디자인 패턴 파일을."
    3. 레이저 스크 라이버의 XYZ 스테이지에 빈 아크릴 시트 또는 양면 테이프의 조각을 놓습니다.
    4. 자동 alignmen와 아크릴 시트 또는 양면 테이프의 표면에 레이저 빔의 초점을 설정레이저 스크 라이버의 제조업체에서 제공하는 T 스틱.
    5. 아크릴 시트 또는 양면 테이프를 직접 가공에 레이저 스크 라이버에 디자인 패턴을 보냅니다.
  3. 집게를 사용하여 아크릴 시트에서 보호 종이를 제거하고 질소 가스로 깨끗한 표면을 날려.
  4. 아크릴 시트를 스택 (110)에서 45 분 동안 열 본더에 2kg / ㎠의 압력 하에서 이들을 접합 흐름 / 전기 자극 채널 조립체를 형성하기 위해 C를 °.
  5. 칩의 세포 배양 용 기재로서 현미경 용 커버 유리를 준비한다.
    1. 염색 항아리에 커버 유리를 넣고 재료 목록에 세제를 10 배 희석 항아리를 채우십시오.
    2. 초음파 steri 청소기의 커버 유리와 염색 항아리를 넣고 15 분 동안 커버 유리를 청소하십시오.
    3. , 염색 항아리에서 희석 한 세제를 붓고 증류수로 항아리를 보충하고, 단계 1.5를 반복합니다.2 3 회.
    4. 양면 테이프로 부착하기 전에 질소 가스를 불어 넣어 세정 커버 유리를 건조.
  6. 단계 1.2 패터닝 양면 테이프 흐름 / 전기 자극 채널 어셈블리 세정 커버 유리를 부착.
  7. 슈퍼 접착제와 MDF 칩 어셈블리의 제 1 층에 개별로 개구 아크릴 어댑터 (13)의 부착 편. MDF 칩 조립체는 완전한 (도 2d)이다.
  8. 사용하기 전에 UV 조사 30 분으로 완료 MDF 칩 어셈블리를 멸균.

MDF 칩의 소금 브리지 네트워크 2. 설정

  1. 사용 (121)에서 15 분의 유지 시간을 설정하여도 3b에 도시 된 모든 플라스틱 튜브, 손으로 조인 견과류 및 마이크로 원심 튜브 살균 종래 오토 클레이브에서 C를 °.
  2. 매체 입구를 통해 MDF 칩 어셈블리에 불소 수지 튜브 (도 3B-I)을 연결및 출구 어댑터는도 1a에 도시.
  3. 그림에 플라스틱 튜브를 매체 입구의 루어 테이퍼를 연결하고 콘센트 3B-나는 3 방향 마개에.
  4. 3 ㎖ 주사기를 사용하여 CO 2 -equilibrated 인산염 완충 식염수 (PBS), 2.5 mL를 취하여 입구 플라스틱 튜브의 3 방향 스톱 콕에 주사기를 연결한다. 출구 플라스틱 튜브의 3 방향 스톱 콕에 빈 3 ㎖ 주사기를 연결한다. 두 주사기 따라서 MDF 칩을 통해 서로 연결되어있다.
    참고 : (37)의 PBS를 품어 ° C 5 % -CO 2 세포 배양 인큐베이터 O / N은 CO 2는 PBS를 -equilibrated 얻을 수있다.
  5. 백색 고체를 손으로 조인 너트와 레이어 1 PMMA 시트에있는 파란색의 개구부 및 녹색 어댑터 (그림 1A)를 밀봉 (그림 3B-III).
  6. CO 2 염다리 채널 배양 챔버를 채우기 설정 단계 2.4에 기재된 주사기에 PBS를 -equilibrated. 기피기포의 형성.
  7. 이어서, CO 2 넣어 O / N 항온 배양 용의 37 ° C, 5 % -CO 2 세포 배양 인큐베이터에서 MDF 칩을 PBS가 함유 -equilibrated. 이는 양면 테이프에 용해 공기 챔버에 버블을 형성 할 수있다.
  8. 두 개의 주사기를 사용하여 채널에서의 빠른 흐름에 의해 PBS 채널에서 거품을 얻어 플러시. 앞뒤로 필요 PBS 펌프.
  9. 매체 배출관에 연결된 3 방향 스톱 콕을 통해 채널에서 PBS 드레인.
  10. CO 2는 둘 베코 변형 이글 중간 (DMEM)를 -equilibrated 새로운 3 mL를 주사기를 사용하여, 2.5 mL를 취하여 (단계 3.5 참조), 및 새와 입구에 연결된 주사기를 교체한다. 매체 채널을 리필.
  11. 염다리 네트워크의 제조.
    1. 일시적으로 고체 너트 (그림 3B-III) 녹색 어댑터 (그림 1A)를 제거하고 (> 70 ° C) 아가로 오스에 소금 BRI를 뜨거운 3 %를 주입녹색 어댑터 (그림 1A)에있는 구멍을 통해 당선 총재 채널.
      주 : 뜨거운 아가로 오스의 제조 : PBS 50ml에 아가로 오스 분말 1.5 g을 녹인다. 오토 클레이브에서 121 ℃에서 20 분의 유지 시간을 설정하여 살균.
    2. 액체 염다리 채널의 길이의 3/4을 채우면 아가 주입 멈춘다.
    3. 아가로 오스 주입 후 고체 너트를 (그림 3B-III) 나사에 의해 녹색 어댑터 (그림 1A)에 구멍을 밀봉합니다.
    4. 반투명 튜브를 손으로 조인 너트 (그림 3B)과 푸른 어댑터 (그림 1A)에 고체 너트를 교체합니다.
    5. 3 % 통 너트 (그림 3B-IV)에 아가로 오스 예열을로드합니다.
    6. 전 통 너트로의 Ag / AgCl을 전극 (그림 3B-V) (그림 3B-IV)을 포함아가로 오스의 응고.
  12. 염다리 네트워크의 설정을 완료 한 후, 한 번에, 배양 챔버로 한 실을 CL1-5 폐암 세포를 주입.

3. 암 세포의 준비 및 Electrotactic 실험에 대한 설정

  1. 폐암 세포주 CL1-5의 레귤러 배양.
    1. 37 75T 세포 배양 플라스크에서 완전 배지에서 교수 팬 Chyr 양, 17에서 얻은 배양 CL1-5 폐암 세포, 5 % CO 2 분위기에서 C를 °. 완전 배지는 DMEM, 10 % 소 태아 혈청 (FBS)으로 구성된다. 하위 문화 세포마다 3-4일. electrotaxis 실험 수행에 사용되는 세포는 원본에서 25 미만의 통로이다.
  2. 기하 급수적으로 증가 CL1-5 세포에 0.25 % 트립신 버퍼 2 ㎖를 추가하고 37에서 2 분 동안 품어 세포 detachmen에 대한 ° C 5 % -CO 2 세포 배양 인큐베이터티.
  3. 10 % FBS DMEM 6 ml의 분리 처리를 종료하고 RT에서 5 분 동안 300g로 원심 분리하여 세포. 이어서 배지를 버리고 PBS 5 ㎖과 세포 펠렛을 중지.
  4. PBS에서 세포의 수를 계산. 이어서 RT에서 5 분 동안 300g에 1 × 106 세포를 원심 분리를 수행.
  5. PBS를 폐기하십시오. 미리 예열 CO 2 -equilibrated DMEM으로 세포를 중단하고 1 × 106 세포 / ml가되도록 세포 밀도를 조절한다.
    참고 : 37 완전한 매체를 품어 ° C CO 2를 얻기 -CO 2 세포 배양 인큐베이터 O / N은 DMEM을 -equilibrated 5 %.

4. Electrotactic 실험에 대한 설정

  1. MDF 칩의 출구에서, 칩에 셀 1 × 106 / mL의 0.3 mL로, 주사.
  2. 세포 배양 인큐베이터에서 셀 시드 MDF 칩을 인큐베이션 (37 ℃ 설정 2-4 시간 동안 ° C와 5 % CO 2).
  3. MDF 마이크로의 설정유체 시스템.
    1. 투명 인듐 주석 산화물 유리 (ITO) 위에 히터 MDF 마이크로 유체 시스템을 설치한다. MDF 칩과 ITO 유리 사이 클립핑 K 형 열전대를 가진 MDF 칩의 온도를 측정한다. 비례 적분 미분 (PID) 컨트롤러와 ITO 히터를 제어 할 수 있습니다. 37 MDF 미세 유체 시스템 배양 온도를 설정 PID 제어기와 C를 °.
      주 : ITO 히터의 제조 및 세포 배양 물 가열 시스템의 설치 이전의 보고서에 기재되어있다 (18, 19).
    2. 거꾸로 현미경에 컴퓨터 제어 XYZ 전동 무대에서 온도 조절 MDF 칩 어셈블리를 장착합니다. 전동 무대의 사용 단계 5.1에 설명되어 있습니다. 4 채널 주사기 펌프 유입구를 통해 챔버로 배양 완전 배지 펌프.
  4. 20 μL / hr의 유속 MDF 칩으로 완전 배지 펌프. 아웃에서 문화 폐기물(그림 3a에 "쓰레기"로 표시)의 microcentrifuge 튜브에 수집 할 수 있습니다.
  5. MDF 칩에 37 ℃에서 또 다른 16 ~ 18 시간 동안 세포를 품어.
  6. 배지를 교체하기 위해 10 분 동안 20 μL / 분의 유속에서 각 배양 챔버로 각각 50, 25, 5, 0 μM 키나아제 억제제를 함유하는 배지를 펌프.
    주 : 10.6 mg의 키나아제 억제제로 멸균 3 ㎖을 첨가하여 회합 단백질은 Rho 키나아제 억제제의 Y27632의 10 mM 스톡 용액을 준비한다. 10 % FBS DMEM 배지를 이용하여, 각각 50, 25, 5 μM로 10 mM의 원액을 희석.
  7. 37 ℃에서 또 다른 60 분 동안 키나아제 억제제로 세포를 배양한다. / 시간 20 μL에 중간 유량을 설정합니다. 동일한 배양 온도를 사용하는 단계 및 이후에 상기 유량.
  8. 칩의 Ag / AgCl을 통해 전극 MDF 칩에 DC 전원을 접속하는 전기 배선을 사용한다.
  9. 직렬 I 전류계를 연결N 전기 회로. MDF 칩에 전류를 모니터링하는 전류계를 사용한다.
  10. DC 전원을 켜고 V. 15 내지 19에 전원 전압을 조정하여 86.94 μA 전류를 전류계로 설정
    주 : 옴의 법칙을 고려 I는 벌크 재료를 통해 흐르는 전류, 즉, electrotactic 챔버 내의 배양액이고, E = I / (ΣA의 EFF), σ (= 1.38 Ω -1 m - 1)이고 배양 배지 (0.07 mm 높이 × 3mm의 폭 = 0.21 mm 2) EFF의 전도도 electrotactic 챔버의 유효 단면적, 및 300 MV / mm를 생성하기 위해 필요한 전류 (I) 인 MDF 칩의 EF는 86.94 μA이다.

5. 수집 및 세포 이미지 분석

  1. MATLAB GUI 프로그램을 사용하여 모터 단계를 제어 할 수 있습니다. microsco에 장착 된 MDF 미세 유체 시스템과PE, 전동 단계를 사용하여 관찰 영역에 칩을 이동합니다.
  2. 디지털 일안 리플렉스 카메라를 사용하여 기록 세포의 현미경 사진에 탑재.
  3. 2 시간 동안 15 분 간격으로 4 배 대물 렌즈를 사용하여 미세한 이미지를 가져 가라.
  4. 세포 이동의 분석.
    1. NIH ImageJ에 1.47 (V)를 실행
    2. 셀의 중심의 최종 위치로 초기부터 거리를 분석한다.
    3. "이미지 시퀀스" "파일"→ "가져 오기"→로 이동하여 세포 이동 분석을위한 9 개의 이미지를 가져옵니다. 제 화상은 제로 시간의 결과이고, 마지막 이미지가 120 분의 결과이다.
    4. → "측정 설정" "분석"에 가서 옆에있는 상자 "무게 중심"을 확인
    5. "자유형 선택"아이콘을 클릭합니다.
    6. 첫 번째 이미지에서 선택된 셀의 에지를 도시한다.
    7. "편집"로 이동 → "선택"→ "관리자 추가"
    8. 아홉 번째 이미지로 이동하여 첫 번째 이미지에서 선택한 같은 셀의 가장자리를 묘사. 셀의 위치는 이미지 여덟째 제를 사용 추적 될 수있다.
    9. → "관리자 추가" "편집"→ "선택"으로 이동
    10. 반복 90 ~ 100 세포에서 데이터를 수집하기 위해 5.4.5 5.4.9에 단계를 반복합니다.
    11. 선택한 셀의 초기 및 최종 위치의 결과를 얻을 → "측정"을 "분석"로 이동합니다.
      주 : 이동 속도는 시간 당 평균 기포 이동 길이로 정의된다. directedness는 (애노드로부터 캐소드로) dcEF의 벡터 및 최종 위치에 셀의 시작점에서 벡터 사이의 코사인 각도로 정의된다. directedness는 음극쪽으로 마이그레이션 셀의 양극쪽으로 마이그레이션 세포 -1과 +1. 무작위 마일의 그룹에 대한세포 격자, directedness 0 2

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결과

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MDF 장치의 제조 및 조립

아크릴계 MDF 칩의 개략도는도 1a에 도시되어있다. 네 아크릴 시트, 하나의 커버 유리, 아크릴 어댑터 (13), 양면 테이프의 조각이 완료 MDF 칩 (도 2D)의 조립에 사용 하였다. MDF 장치의 네 개의 독립 채널을 배양이있다. 그러나, 온 - 칩 염다리 네트워크는 칩의 여덟 부분에 8 개의 다른 실험 조건을 생성한다. 세 염다리, 79, 90 (도 1a의 계층 2에서 청색 채널), 길이 80mm는, 화상의 관찰을 방해하지 않고 MDF 칩의 두번째 층에 결합되었다. 0이 염다리 네트워크 및 배양 챔버들 사이의 작은 기공 (블루 입방 레이어 3의 채널과도 1a의 4),0.25...

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토론

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우리는 까다로 MDF 칩의 제 1 층 상에 아크릴 어댑터를 부착하는 과정을 발견 하였다. 슈퍼 접착제 단지 1 내지 2 μL의 응용 단단히 MDF 칩 상에 어댑터를 부착하기에 충분하다. 접착제의 큰 금액은 슈퍼 접착제 및 준수 실패의 불완전한 중합 결과. 아크릴 어댑터 단단히 MDF 칩에 부착 한 후, 마이크로 유체 시스템의 액체 누출이 거의 발생하지 않았다. 또한, 진공 챔버 내부의 O / N 항온 처리는 양면 테이프 / 커버 유리 또는 양면 테이프 / 아크릴 시트 인터페이스 사이에 포획 된 공기를 제거하는 데 도움을 주었다. 따라서,이 프로세스는 MDF 칩 배양 챔버의 안정성을 향상시킨다.

염다리 네트워크의 제조시 3 % 아가로 오스의 온도 제어가 중요하다. 아가의 온도가 주입 중에 충분히 높지 않으면, 아가 신속 주사기 내부 고화와 연결할 수없는염다리 네트워크에 주입 될 수있다. 더욱이, 아가로 주입하는 동안, 그것은 염다리 네트워크 내의 어떤 기포 형성을 방지하는 것이...

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공개 사항

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저자는 경쟁하는 금전적 이해관계가 없음을 선언합니다.

감사의 글

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

이 작업은 대만 과학기술부(Ministry of Science and Technology, Taiwan)의 재정 지원을 받고 있습니다(계약 번호. MOST 103-2113-M-001 -003 -MY2) 및 대만 Academia Sinica의 나노 과학 및 나노 기술 연구 프로그램.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
Reagent
DMEM mediumGibco,Invitrogen, USA12800-017
Fetal Bovine SerumGibco,Invitrogen, USA16000-044
TrypsinGibco,Invitrogen, USA25200-072
PBSBasic LifeBL2651
Y-27632 (hydrochloride)케이맨 화학10005583
아가 로스LONZO, 미국SeaKem LE AGAROSE
주사기테루 모3ml 루어 테이퍼
3 방향 스톱 콕Nipro루어 테이퍼
PMMA (아크릴)HiShiRon Industries CO., Ltd, 대만두께 1mm, 2mm
아크릴 어댑터KuanMin Technology Co., Ltd, 대만 타이중1/4-28 포트, 10x10x6mm맞춤형
너트Thermo Fisher Scientific Inc.UPCHURCH:P-206x, P-200x, F120x, P-659, P-315x
현미경 커버 유리Deckglä ser, 독일24x60mm
양면 테이프3MPET 8018
슈퍼 접착제3M스카치 리퀴드 플러스 슈퍼 접착제
TFD4 세제Franklab, 프랑스TFD4
초음파 steri 클리너LEO ULTRASONIC CO., LTD., 대만
Thermo bonderKuanMin Technology Co., Ltd, Taichung, Taiwan맞춤형
CO2 레이저 스크라이버LTT 그룹, 대만ISL-II
비례 적분 파생(PID) 컨트롤러JETEC Electronics Co., JapenTTM-J40-R-AB,
K형 열전대TECPELTPK-02A
4채널 주사기 펌프KdScientific, 미국250P
DC 전원 공급 장치GWInstek, 대만
X-Y-Z 모터 스테이지TanLian, E-O Co. Ltd., 대만맞춤형
도립 현미경올림푸스, 일본CKX41
디지털 SLR 카메라캐논, 일본60D

참고문헌

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. McCaig, C. D., Rajnicek, A. M., Song, B., Zhao, M. Controlling cell behavior electrically: current views and future potential. Physiol Rev. 85, 943-978 (2005).
  2. Djamgoz, M. B. A., Mycielska, M., Madeja, Z., Fraser, S. P., Korohoda, W. Directional movement of rat prostate cancer cells in direct-current electric field: involvement of voltagegated Na+ channel activity. J Cell Sci. 114, 2697-2705 (2001).
  3. Pu, J., et al. EGF receptor signaling is essential for electric-field-directed migration of breast cancer cells. J Cell Sci. 120, 3395-3403 (2007).
  4. Huang, C. W., Cheng, J. Y., Yen, M. H., Young, T. H. Electrotaxis of lung cancer cells in a multiple-electric-field chip. Biosens Bioelectron. 24, 3510-3516 (2009).
  5. Huang, C. W., et al. Gene expression of human lung cancer cell line CL1-5 in response to a direct current electric field. PLoS One. 6, e25928(2011).
  6. Sun, Y. S., Peng, S. W., Lin, K. H., Cheng, J. Y. Electrotaxis of lung cancer cells in ordered three-dimensional scaffolds. Biomicrofluidics. 6, 14102-1410214 (2012).
  7. Tsai, H. F., et al. Evaluation of EGFR and RTK signaling in the electrotaxis of lung adenocarcinoma cells under direct-current electric field stimulation. PLoS One. 8, e73418(2013).
  8. Hou, H. S., Tsai, H. F., Chiu, H. T., Cheng, J. Y. Simultaneous chemical and electrical stimulation on lung cancer cells using a multichannel-dual-electric-field chip. Biomicrofluidics. 8, (2014).
  9. Faupel, M., et al. Electropotential evaluation as a new technique for diagnosing breast lesions. Eur J Radiol. 24, 33-38 (1997).
  10. Szatkowski, M., Mycielska, M., Knowles, R., Kho, A. L., Djamgoz, M. B. Electrophysiological recordings from the rat prostate gland in vitro: identified single-cell and transepithelial (lumen) potentials. BJU Int. 86, 1068-1075 (2000).
  11. McCaig, C. D., Song, B., Rajnicek, A. M. Electrical dimensions in cell science. J Cell Sci. 122, 4267-4276 (2009).
  12. Das, T., Maiti, T. K., Chakraborty, S. Traction force microscopy on-chip: shear deformation of fibroblast cells. Lab Chip. 8, 1308-1318 (2008).
  13. Lin, F., Butcher, E. C. T cell chemotaxis in a simple microfluidic device. Lab Chip. 6, 1462-1469 (2006).
  14. Li, J., Zhu, L., Zhang, M., Lin, F. Microfluidic device for studying cell migration in single or co-existing chemical gradients and electric fields. Biomicrofluidics. 6, 24121-2412113 (2012).
  15. Tsai, H. F., Peng, S. W., Wu, C. Y., Chang, H. F., Cheng, J. Y. Electrotaxis of oral squamous cell carcinoma cells in a multiple-electric-field chip with uniform flow field. Biomicrofluidics. 6, 34116(2012).
  16. Cheng, J. Y., Wei, C. W., Hsu, K. H., Young, T. H. Direct-write laser micromachining and universal surface modification of PMMA for device development. Sensors and Actuators B: Chemical. 99, 186-196 (2004).
  17. Chu, Y. W., et al. Selection of invasive and metastatic subpopulations from a human lung adenocarcinoma cell line. Am J Respir Cell Mol Biol. 17, 353-360 (1997).
  18. Cheng, J. Y., Yen, M. H., Kuo, C. T., Young, T. H. A transparent cell-culture microchamber with a variably controlled concentration gradient generator and flow field rectifier. Biomicrofluidics. 2, 24105(2008).
  19. Cheng, J. -Y., Yen, M. -H., Hsu, W. -C., Jhang, J. -H., Young, T. -H. ITO patterning by a low power Q-switched green laser and its use in the fabrication of a transparent flow meter. Journal of Micromechanics and Microengineering. 17, 2316(2007).
  20. Pu, J., Zhao, M. Golgi polarization in a strong electric field. J Cell Sci. 118, 1117-1128 (2005).
  21. Zhao, M., Bai, H., Wang, E., Forrester, J. V., McCaig, C. D. Electrical stimulation directly induces pre-angiogenic responses in vascular endothelial cells by signaling through VEGF receptors. J Cell Sci. 117, 397-405 (2004).
  22. Yao, L., Shanley, L., McCaig, C., Zhao, M. Small applied electric fields guide migration of hippocampal neurons. J Cell Physiol. 216, 527-535 (2008).

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