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방법 논문

신생아 돼지에서 림프의 창자 림프 트렁크와 컬렉션의 장기 도관

9.3K 조회수

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DOI:

10.3791/53457

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2016년 3월 5일

 ,  ,  ,  , 

이 논문에서

요약

원심성 림프에서 다량의 지질 대사 성분을 채취하기 위해 신생아 돼지의 장 림프통에 카테터를 삽입하는 수술을 제시합니다.

초록

신생아 돼지에서 장 림프 줄기의 카테터 삽입은 대량의 장(중심) 원심성 림프를 장기간 수집할 수 있는 기술입니다. 중요한 것은 장에서 중앙 림프를 수집함으로써 연구자들이 지질 대사, 장 염증 및 암 전이와 관련된 메커니즘과 지질 구성물뿐만 아니라 면역 기능 및 면역 감시에 관여하는 세포를 모두 연구할 수 있다는 것입니다. 복부 정중선 수술 접근법은 두개골 복부에 대한 탁월한 수술적 노출을 허용하고 췌장 근처에 있는 장 림프통 혈관과 오른쪽 간엽의 내장 측면 아래에 있는 문맥의 오른쪽 복부 분절에 비교적 쉽게 접근할 수 있습니다. 혈관을 꼼꼼하게 해부하여 주변 근막에서 분리한 다음 봉합사로 확장시켜 카테터를 혈관에 삽입하고 고정할 수 있습니다. 카테터는 외부로 삽입되며 7일 동안 약 1L/24시간의 림프를 채취합니다. 이 기법을 사용하면 장기간에 걸쳐 많은 양의 중심 림프를 채취할 수 있지만, 성공 여부는 신중한 외과적 절개, 조직 취급 및 적절한 수술 기법에 대한 세심한 주의에 달려 있습니다. 이는 어린 동물을 대상으로 한 수술의 경우 림프관이 쉽게 찢어질 수 있어 수술 및 실험적 실패로 이어질 수 있기 때문에 특히 중요합니다. 이 비디오는 장 림프 채취를 위한 탁월한 수술 기술을 보여줍니다.

서론

림프 시스템은 생리학의 파악 하였다 영역입니다. 림프 카테터의 전임상 모델은 다른 동물 종 1-8에서 발생하는 지질 8-12 및 약물 대사 13-15, 실험적인 치료 (17)와 암 전이 (16)에 관여하는 메커니즘을 조사하기 위해 제약 산업 및 연구 기관에 의해 사용되며, 면역 기능 (18) -26. 본 연구는 지단백질 대사의 성분을 측정하는 돼지 모델에서 장 림프 트렁크 카테터의 사용을 탐구한다. 지단백질 대사는 생산과 분비 킬로 미크론의뿐만 아니라 연관된 지질 및 총 단백질의 변화에​​ 관여한다. 일반적으로 사용되는 설치류 모델과 인간 사이와 같은 지질 대사에 큰 차이가 있기 때문에이 날 지질 연구를 더 비교 정보를 제공 할 수있는 장 림프를 수집하기 위해 돼지 모델을 사용, 중요한 고려 사항입니다사람들 27-31에서 tabolism.

여러 가지 수술 기법은 많은 동물 종에서 장 림프 수집하는 데 사용됩니다 두개골 어깨 접근 방식 (즉, 흉부 덕트 카테터) (5), 측면 상부 측면의 접근 방식 32-34, 및 복부 정중선 또는 paramedian....

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프로토콜

비디오와 원고 모두에 설명 된 실험 동물의 모든 절차는 동물 케어의 캐나다위원회가 설정 한 가이드 라인을 기관 동물 관리 및 사용위원회의 승인을 관찰 하였다.

1. 수술 마취 및 신생아 돼지의 수술 준비

  1. 된 azaperone (0.3 ㎎ / ㎏), 케타민 하이드로 클로라이드 (10 ㎎ / ㎏), 덱스 메데 토미 딘 (15 μg의 / kg) : 분리 대기실에서 25kg에 포함 된 근육 진정 마취 약물 칵테일 목의 기지 근처에 돼지를 premedicate.
    참고 : 향상된 내 수술 통증 조절에 대한 사전 마취 약물 칵테일에 부 프레 노르 핀 (0.005-0.02 ㎎ / ㎏)를 추가합니다.
  2. 안면 마스크를 사용하여 (500 ㎖-1000 ml / 분의 O이 4-5 %의 이소 플루 란) 흡입 이소 플루 란 흡입 가스 돼지 마취. 수의학 후두 범위 (17~25cm 긴 직선 칼날)를 사용하여 성대 시각화 및 보컬 국소 10 % 리도카인 중성화 적용코듀로이 바지. 리도카인 스프레이 성대 경련 및기도 폐쇄의 가능성을 줄이기 위해 삽관에 30 ~ 60 초 전에 성대에 문의 할 수 있습니다.
  3. 이소 플루 란 가스로 마취 성대 사이에 수갑을 차고 기관 내 튜브 (5.0-7.0 ....

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결과

신생아 돼지의 창자 림프 트렁크의 림프 카테터는 7 일 동안 약 1 L 중앙 림프의 / 24 시간의 모음을 할 수 있습니다. 이 실험에서 수집 된 림프 지질 대사, 즉 총 림프 단백질, ApoB48 지단백, 중성 지방, 총 단백질, 콜레스테롤의 구성 요소가 포함되어 있습니다. 표 1 주요 세 돼지 풀 림프 샘플에서 이러한 지질 성분의 대표 양. 특히, 림프의 흐름과 지질 성분은 인라인 장 림프 혈관 카테터 다음 다른 연구자에 의해보고 중앙 림프의 값 (림프 570 ± 158-979 ± 284 ㎖ / 24 시간 25, 360 ± 120 MLL / 24 시간에 흐름이다 1080 720 ± ㎖ / 24 시간 (26), 중성 지방 687 ± 110 밀리그램 / dL로 9 콜레스테롤 63.1 ± 5.6 밀리그램 / dL로 9) 림프 혈관 내 카테터의 적절한 배치를 나타내는.

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토론

장 림프를 수집하는 다양한 실험 동물 모델에서 지질 8-12 및 약물 13-15 대사, 암 전이 16, 17, 셀 인신 매매와 면역 기능 18-26에 관여하는 메커니즘을 조사 할 수있는 좋은 방법입니다. 실제로, 장기간에 걸쳐 어느 주연 (심성) 및 중앙 (원심성 큰 트렁크 용기) 림프 다량 수확 할 수있는 능력은 면역 변조 제 18-22을 가진 도전 다음 세포 집단에서 발생하는 시간 변화를 이해하는데 특히 중요했다 , 25, 26. 마찬가지로, 중앙 림프의 컬렉션 지단백 대사 8-12에 관여하는 과정을 서술하는 데 도움이되고있다. 림프 컬렉션의 유틸리티는 카테터 절차의 성공과 림프 혈관 내 카테터의 개통에 따라 달라집니다.

관련된 주요 림프 혈관 카테터큰 동물의 창자 림프 배수는 일반적으로 세 가지 수술 방법 중 하나를 사용합니다. 제 1.......

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공개 사항

저자는 공개할 것이 없습니다.

감사의 글

이 작업은 앨버타 축육류국(Alberta Livestock and Meat Agency)과 자연과학 및 연구 위원회(Natural Science and Research Council)의 디스커버리 보조금(Discovery grant to S. D. Proctor)의 자금 지원을 받았습니다.

....

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
밀러 후두경 블레이드Welch Allyn68044182mm 길이
Surgivet advisor: 바이탈 사인 모니터SurgivetV9203
직장 온도 프로브SurgivetV3417
모노 폴라 전기 수술 발전기Valley Lab
Metzenbaum 가위Fine Science14518-18
Tuffier 견인스티븐스162-11-676
모기 겸스티븐스162-7-10
켈리 겸자 곡선 (14cm)스티븐스162-7-38
알리스 조직 집게 스티븐스162-7-38
집게 드레싱 아이 (10.2cm)스티븐스162-18-780
집게 옷 매무새 - 아디슨 (12.1cm)Stevens162-17-2510
니들 드라이버Stevens162-V98-42
아이리스 가위파인 사이언14058-11
순환수 펌프JorvetJ-783X
Maxitherm-Vinyl 담요JorvetJ-784C
Q 팁 애플리케이터Fisher Scientific22-037-960
카테터 삽입  튜빙 (4.06 OD X 2.31 ID)Braintree Scientific Inc.MRE-160마이크로 르네탄 이식 튜브
2-0 실크 봉합EthiconLA556
2-0 폴리글락틴 봉합사EthiconJ443H2-0 vicryl
대형 동물 재킷Lomir Biomedical Inc.SSJ2YC
폴리 프로필렌 세척 병Fisher Scientific03-409-22C500 ml
페니실린-스트렙토마이신시그마 알드리치D4333
EDTA시그마 알드리치60-00-4
암포테리신 B시그마 알드리치A2411
아자페론엘랑코 동물 건강스트레스닐
Dexmedetomidine hydrochlorideZoetis6295Dexdomitor
IsofluraneAbbott Animal  건강05260-5IsoFlo
케타민 염산염Zoetis2626Ketaset
Bupenorphine 염산염챔피언 Alstoe 동물 건강DIN : 02347510
6mm 기관내 튜브JorvetJ-165d
10 % 리도카인 스프레이AstraZenecaDIN : 02003767
4 % 클로르헥시딘 수술 스크럽Partnar 동물 건강PCH-011희석 : 2.0 % 용액
3M 외과 steri- 드레이프3M 건강 관리1040
SDS 페이지 젤InvitrogenEA0375BOX3-8 % 트리스 아세테이트
폴리 비닐 리덴 플루오 라이드 막MilliporeIPVH000100.45 μ m 기공 크기
ApoB 항체 EMD MilliporeAB7421:4000 희석
당나귀 안티-염소 IgG-HRP산타크루즈 생명공학Sc-2304
ECL 프라임 웨스턴 블로팅 시약GE 헬스케어 생명과학RPN2232     
트리글리세라이드 키트Wako Pure Chemicals998-40391/994-40491
총 콜레스테롤 키트Wako Pure Chemicals439-17501
총 단백질  피어싱 23225비신코닌산 분석
기 자 스 사

참고문헌

  1. Lindsay, F. E. F. The cisterna chyli as a source of lymph samples in the cat and dog. Res. Vet. Sci. 17, 256-258 (1974).
  2. Kohan, A. B., Howles, P. N., Tso, P. Methods for studying rodent intestinal lipoprotein production and metabolism. Curr. Protoc. Mous....

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