치근단 절제술 마우스 모델은 초기 포유류의 심장 재생을 연구하는

요약

이 연구에서는 정점 절제술의 단계별 비디오 프로토콜이 입증되었습니다. 정점 절제술은 포유류 심장 재생 연구에서 최근 주목받고 있는 수술 방식입니다. 이 연구는 심장 재생의 기저에 있는 메커니즘에 대한 연구에서 정점 절제술의 표준 방법론으로 적용을 촉진할 수 있습니다.

초록

심혈관 질환으로 인해 집중적 인 생활 습관의 변화로 전 세계를 재앙. 심장 재생은 수리 인한 부상과 질병에 손실 심근 세포를 복원하는 큰 약속을 보유하고있다. 특정 낮은 척추 동물의 강력한 심장 재생과는 달리, 성인 포유류의 마음은 일반적으로 심장 재생 및 수리를위한 최소한의 용량을 보여줍니다. 그러나, 최근의 연구 (P7에 P1) 1-7 출생 후의 일 사이에, 신생아 마우스 마음이 혀끝의 절제 (즉, 수술 절단 및 좌심실 정점의 노출) 후 상당한 회생 가능성을 유지, 연구 결과와 상당한 과학적 관심을 촉발했다. 이 발견을 통해 하나의 주요 논쟁은 복제하거나이 중요한 발견에 확장하기위한 노력에 사용되는 다양한 수술 관련 절차로 인해 수 있습니다. 이 지침은 동적으로 마우스 모델에서 혀끝의 절제에 대한 자료와 방법론을 제시한다. 이 설치류 surviva의 두드러진 단계L 수술은 저체온 마취, 개흉술, 심장 심실 정점의 수술 절단 및 봉합와 마우스의 회복을 포함한다. 심장 혈관 연구를위한 치근단 절제술 마우스 모델의 응용 프로그램을 확장 할 수 설명하는 방법.

서론

인간의 수명이 길어지면 주요 사망 원인인 심부전을 포함한 다양한 노화 및 생활 습관 관련 질병이 발생합니다. 그러나 손실되거나 기능 장애가 있는 심장 근육 세포를 대체하지 않으면 현재의 치료법은 심장 기능을 일시적으로 개선할 수 있을 뿐이다^{1, 2}. 따라서 심장 재생 및 복구를 위한 혁신적인 전략을 발견하고 개발해야 합니다. 다 자란 포유류의 심장은 재생 잠재력이 제한적입니다. urodele 양서류와 teleost fish와 같은 하등 척추 동물에 대한 연구는 심장 재생의 기저에 있는 분자 및 세포 메커니즘에 대한 전례 없는 통찰력을 제공했습니다^{3, 4}. 최근에는 심장 재생에 대한 신생아 마우스 모델이 등장하여 인간의 심장 재생에 필요한 보다 진화적으로 보존된 병태생리학적 사건을 식별하고 특성화할 수 있습니다⁵.

정점 절제술은 좌심실 정점을 외과적으로 제거하는 것을 말합니다. 이 절차는 1-7일 된 생쥐(P1-P7) 생쥐로 제한되는데, 그 이유는 나이가 많은 생쥐에서 치사율이 높기 때문이다⁶. 정점 절제 후 신생아 마우스의 심장 재생 과정은 다음과 같을 것으로 예상됩니다: (I) 정점을 밀봉하고 출혈을 방지하기 위한 혈종의 빠르고 효과적인 형성; (II) 심근세포....

프로토콜

모든 마우스 실험 프로토콜 번호 H0083R3와 국립 보건원 (NIH)의 동물 관리 및 사용 프로그램에 의해 승인되었다. NHLBI IACUC는 진통제없이 프로토콜을 승인했다.

신생아 마우스 1. 저체온 마취

1. 수술 전에 오토 클레이브 스폰지 및 수술 장비 소독. 모든 수술 재료를 준비하고 270 ° C에 240 ° C에 도달하기 위해 사전에 뜨거운 구슬 살균기 15 ~ 20 분에 전환합니다.
2. 신선한 침구와 중첩 재료와 깨끗한 마우스 케이지에 자신의 간호 어머니의 모든 C57BL / 6 새끼 (연령 P1)를 전송합니다. 새끼는 수술 방으로 촬영하면, 자신의 시간은 어머니로부터 분리 된 시간에 산모 잠식의 위험을 줄이기 위해 최소화하기 위해 신속하게 혀끝 수술을 수행합니다.
3. 얼음 침대에 스폰지를 넣고 2 ~ 3 분 저체온 마취를 달성하기 위해 다음 스펀지에 한 강아지를 놓습니다. AP를 관찰하여 마취를 확인NEA와 무 운동과 후방 발을 곤란. 너무 적은 시간이 강아지의 무 운동성 및 apneic 및 생존율 ^(12)을 낮출 수 마취의 과도 기간을 확인하지 않습니다 자주하기 때문에 신생아의 상태를 확인합니다.

2.....

결과

마우스 새끼는 1, 2, 이십일일 후 치근단 절제술을 안락사시키고, 그들의 마음을 H & E 및 메이슨 트리 크롬 염색의 수집 하였다. 메이슨의 트리 크롬 염색 블루 색상은 심 외막 세포 외 기질 ^(5)의 증착을 나타냅니다. 도 1a에 도시 된 바와 같이 성공적인 치근단 절제술, 혈병을 효과적으로, LV 일일 후 치근단 절제술을 밀봉하도록 형성된다. 혈액 응고 초기 심장 섬유화의 점진적인 흡수가 관찰되고, 심근의 완전한 재생이 이십일일 치근단 절제술 후 (그림 1B 및 C)를 배치한다 때까지 심근 조직으로 대체가 발생합니다. 형태 학적 분석은 이십일일 수술 후 (그림 1C와 D)에서 절제와 가짜로 작동하는 마음 사이에 차이점을 보여줍니다.

.......

토론

심장 재생은 심부전의 치료 및 예방 가능성을 보여줍니다^{1, 2}. 동물 모델은 필수 불가결하며 심장 재생이 어떻게 발생하는지 이해하는 데 중요한 역할을 합니다^3-6. 많은 양서류와 어류는 부상에 대한 반응으로 심장 조직을 재생하여 인간 심혈관 질환에 대한 이해에 대한 통찰력을 제공합니다^{13, 14}. 그러나 진화 측면에서 병태생리학은 마우스 모델과 인간 사이에서 더 보존되어야 합니다. 포유류 동물 모델의 심장 재생은 심부전 치료에 대한 비교적 새롭지만 급성장하는 연구 분야입니다^3-6.

최근 신생아 마우스의 심장 재생 연구에서 정점 절제술과 심근경색술이라는 두 가지 외과적 접근법이 확립되었습니다⁶. 치근단 절제술은 심근 세포의 손실 및/또는 손상에 대한 비교적 쉽고 직접적인 모델을 제공하지만, 심근경색에 비해 치근단 절제술의 주요 한계는 높은 사망률로 인해 이 수술 방법을 P7 이상으로.......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
가위가 있는 Olsen-Hegar 바늘 홀더, 1.5mm	Fine Science Tools	12002-12
Vannas Spring Scissors - 2mm Cutting Edge	Fine Science Tools	15000-03	홍채 절제술 가위
핫 비드 살균기	Fine Science Tools	18000-45
홍채 집게, 직선, 톱니 모양의	Fine Science Tools	11064-07
홍채 집게, 곡선, 톱니 모양의	정밀 과학 도구	11065-07
시어 가위 - 곡선/둔기/12cm	정밀 과학 도구	14105-12
원형 핸들 봉합사 묶는 집게, 직선	미세 과학 도구	18025-12
원형 핸들 반나스 스프링 가위	정밀 과학 도구	15400-12
미세 지혈	정밀 과학 도구	13007-12
확대	Luxolamp Corp	IM120
난방 램프	Brandt Equipment llc	51152/3
6-0 Prolene 봉합사	Ethicon	8889H
피부 접착제-Vetbond 조직 접착제	3M	1469
멸균 면 팁 애플리케이터	Dynarex	4305
WEBCOL 알코올 준비 패드	Covidien	6818	중간 2 PLY, 200/BOX, 70% 이소프로필 알코올
큐리티로 포화 다목적 스폰지	Covidien	9024	비직물 4 PLY, 4"x4" (10.2cm× 10.2cm)
벤치탑 보호시트	KIMTECH SCIENCE	7546	18" x 19.5" (45.72cm x 49.53cm) x 50
0.9% 염화나트륨, 250ml	호스피라	NDC 0409-6138-22
Betadine 솔루션 Swabsticks	Purdue Products LP	NDC 67618-153-03
오토클레이브	TOMY 디지털 생물학	SX-700	고압 증기 살균기
슬라이드 스캐너	HAMAMATSU	NanoZoomer 2.0-RS

등