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방법 논문

등전위 뇌 상태의 유도는 신경 흥분에 내생 시냅스 활동의 영향을 조사하기

7.7K 조회수

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DOI:

10.3791/53576

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2016년 3월 31일

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이 논문에서

요약

이 절차는 등전점 뇌 상태의 결과, 생리 학적으로 관련된 뇌 상태 동안 지속적인 전기 활동의 완전한 폐지 후 하나의 뉴런에서 오래 지속되는 생체 세포 내 녹음을 수행한다. 동물의 생리적 상수는 조심스럽게 인공 혼수 상태로 전환하는 동안 모니터링됩니다.

초록

방법 뉴런 프로세스 정보는 고유 막 성질과 심성 시냅스 네트워크의 역학에 모두 의존한다. 강하게 각성 상태의 함수로서 변화 특히 내생 적으로 생성 된 네트워크 활동에 크게 신경 계산을 변조한다. 자발적 뇌 역학 단일 뉴런 '통합 특성에 영향을 얼마나 다른지 조사하기 위하여, 우리는 나트륨 펜토 바르 비탈의 고용량의 전신 주사에 의해 생체 내에서 모든 뇌 활성을 억제 이루어진 래트에서 새로운 실험 전략을 개발했다. 연속적으로 결합 electrocorticogram (ECOG)와 세포 내 기록에 의해 모니터링 대뇌 피질의 활동은 점차 안정 등전점 프로필로 이어지는 둔화된다. 깊은 혼수에 래트를 넣고이 극단적 뇌 상태는 신중 걸쳐 실험 동물의 생리 학적 상수를 측정하여 모니터링 하였다. 세포 내 연구ecordings은 우리의 특성 및 수면 - 각성주기에서 발생하는 것과 같은 생리 학적으로 관련된 대뇌 피질의 역학에 포함 동일한 신경 세포의 통합 특성을 비교하도록 허용하고, 뇌는 완전히 침묵 할 때.

서론

어떤 환경 적 자극 또는 행동 태스크가 없으면, 「휴식」뇌 뇌파 (EEG) 파 등의 두피에서 기록 될 수있는 전기적 활성도의 연속 스트림을 생성한다. 이 내인성 뇌 활동의 세포 내 상관 관계가 구 심성 네트워크 -1,2-의 지속적인 활성을 반영 흥분성 및 억제 성 시냅스 전위의 조합으로 구성되어있다 (또한 "시냅스 잡음"이라고도 함) 배경 막의 전압 변동을 특징으로한다. 이 자발적인 활동은 경계의 다른 국가와 주파수 및 진폭에 따라 다릅니다. 단일 뉴런의 흥분성 및 응답에 대한 네트워크 활동의 영향을 해명은 신경 과학 3,4의 주요 문제 중 하나이다.

많은 실험과 계산 연구는 통합 propertie에 지속적인 시냅스 활동의 기능에 미치는 영향을 살펴 보았다뉴런의의. 그러나, 배경 잡음의 영향 시냅스 다른 신경 파라미터의 역할은 애매 남아있다. 예를 들어, 막 탈분극의 평균 수준에 긍정적 또는 부정적 5,6- 7-9 활동 전위를 유발하는 감각 입력의 능력과 상관 밝혀졌다. 일부 연구는 심성 시냅스 입력의 연속적 변화 스트림으로 인한 막 전위의 변동이 강하게 그들의 입출력 관계 3,10-13의 이득을 조절하여 하나의 뉴런의 응답에 영향을주는 것을....

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프로토콜

모든 절차는 유럽 연합 (EU)의 지침에 따라 수행 하였다 (지침 63분의 2,010 / EU) 및 동물 실험에 찰스 다윈 (Charles Darwin) 윤리위원회에 의해 승인했다. 그러나 우리는 대부분의 단계가 모두의 특정 요구에 맞게 적용 할 수 있습니다, 우리가 일상적으로 우리 연구실에서 사용하는 절차를 설명합니다.

1. 수술 준비

참고 : 모든 절개 및 압력 점을 반복해서 국소 마취제 (리도카인 또는 부피 바카)으로 침투한다. 무균 제제 여러 수정이 구현되어야 필요한 경우, 본 절차는 단말이다.

  1. 로컬로 분리 복강 내 (IP) 주사를 나트륨 펜 토바 비탈 (40 ㎎ / ㎏) 및 케타민 (50 ㎎ / ㎏)로 쥐를 마취.
  2. 동물은 전신 마취하에 이동을 반복 마취의 수술 비행기가 (곤란 발끝까지 아무런 반응을) 달성되지 않았 음을 확인하자. 철에 쥐를 놓습니다edback 가열 담요와 37 ° C 주위 코어 온도를 유지하기 위해 직장 프로브를 삽입합니다.
  3. 마취제의 후속 주입을 용이하게하기 위해 반복 바늘 천공 (30)에 의해 장기 천공 방지하기 위해 복강에 카테터를 놓습니다.
    1. 위의 오른쪽 또는 왼쪽 사....

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결과

유도 및 등전점 뇌 상태를 유지하는 것은 생체 실험 절차의 섬세한이다. 그것은 바로 신경 세포의 흥분과 전달 함수 (29)에 대뇌 피질의 네트워크 활동의 영향을 연구 할 수있는 강력한 도구로 입증되었다. 그림 1 (그림 1A 전에 동물의 생리 학적 상태의 ECOG 및 중요한 상수를 포함하는 다중 매개 변수 감시를 보여줍니다 등전위 상태)과 후 (그림 1B) 유도.

figure-results-1
제어 및 등전 조건의 생리 학적 매개 변수 1. 모니터링 그림.
.......

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토론

우리는 여기에 네트워크 및 세포 수준에서 모두 생체 내 자연 뇌 전기 활동에 억제하는 새로운 방법을 설명합니다. 이 절차는 등전점 혼수 41라고도 극단적 뇌 상태로 이끈다. 보기의 임상 적 관점에서, 이러한 활동은 electrocerebral EEG에서 알 수있는 가장 심각한 이상이다. 그것은 주로 하나 죽어 또는 식물 인간 (42)에 지속적으로 환자와 비가역 혼수와 관련되어 있지만 (예를 들면 티 오펜 탈 등) 중앙 신경계 진정제 약물와 중독으로 인한 경우, 적어도 부분적으로 실수 저체온증 반전 될 수있다 (42) 또는 질식성 심정지 43. 우리 실험 패러다임에서, 등전위 상태는 점진적으로 먼저 급격히 ECOG 주파수 함량의 감소를 유도 고용량 나트륨 펜 토바 비탈의 전신 주입하는 "버스트 억제"모드에 의해 달성된다41, 42, 완전 평면 ECOG에 마지막으로 선도. 세포 내 수.......

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공개 사항

저자는 공개할 것이 없습니다.

감사의 글

이 작품은 파운데이션 부문 드 프랑스,​​ 문화원 국립 드 라 상테 엣 드 라 공들인 MEDICALE, 피에르 & 마리 퀴리 대학 프로그램 'INVESTISSEMENTS 디부 AVENIR'ANR-10 IAIHU-06에서 보조금에 의해 지원되었다.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
나트륨 펜토바르비탈센트라벳펜토바르비탈
케타민 500MerialImalgè ne 500
펜타닐 Janssen-CilagFentanyl
XylocaineCentravetXylovet
Gallamine triethiodideSigmaG8134
ECoG 증폭기A-M SystemsAC 증폭기, 모델 1700
세포 내 증폭기Molecular DevicesAxoclamp 900A
데이터 수집 인터페이스Cambridge Electronic DesignCED 전원 1401-3 
데이터 분석 소프트웨어Cambridge Electronic DesignSpike2 버전 7
마이크로 매니퓰레이터ScientificaIVM-3000
모세관 풀러NarishigePE-2
붕규산 유리 모세관Harvard ApparatusGC150F-10
Silver wire 0.125 mm (intracellular recording)WPIAGT0525
Ag-AgCl 참조PhymepE242
Silver wire 0.25mm(ECoG 기록)WPIAGT1025
인공 호흡 시스템MinerveAlpha Lab
생리학적 매개변수 모니터링DigicareLifeWindow Lite
난방 담요Harvard Apparatus507215
실체현미경LeicaM80
가위FST15005-08
펜치 Dumont #5FST11295-10
펜치 Dumont #5SFFST11252-00
IP 폴리우레탄 카테터 - 0.43x0.69 mm   InstechBTPU-027
실리콘 엘라스토미어WPIKWIK-CAST
치과 드릴NSKY1001151 및 P496
외과용 접착제3Mvetbond

참고문헌

  1. Fatt, P., Katz, B. Some observations on biological noise. Nature. 166 (4223), 597-598 (1950).
  2. Brock, L. G., Coombs, J. S., Eccles, J. C. The recording of potentials from motoneurones with an intracellular electrode. J. Physiol. 117 (4), 431-460 (1952).
  3. Destexhe, A., Rudol....

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재인쇄 및 허가

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