모성 면역 활성화(MIA)는 자폐증과 정신분열증의 환경적 위험 요인에 대한 모델입니다. 이 기사의 목표는 이 모델의 재현성을 향상시키기 위해 임신한 마우스에서 MIA를 유도하는 방법에 대한 단계별 절차를 제공하는 것입니다.
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방법 논문
(: C I) 바이러스 성 모방 폴리와 중간 임신 단계에서 마우스의 모성 면역 활성화 유도
* These authors contributed equally
이 논문에서
요약
초록
모성 면역 활성화(MIA) 모델은 다양한 정신 질환의 환경적 위험 요인에 대한 설치류 모델로 점점 더 높이 평가되고 있습니다. 수많은 연구에서 MIA 모델이 자폐증 및 정신분열증과 관련된 얼굴, 구성 및 예측 타당성을 보여줄 수 있음을 보여주었습니다. MIA를 모델링하기 위해 연구자들은 종종 바이러스 모방 폴리이노신:폴리시티딜산(poly(I:C))을 사용하여 임신한 설치류의 면역 체계를 활성화합니다. 일반적으로 면역 활성화 댐의 자손은 자폐증 및 정신 분열증과 관련된 행동 이상과 생리적 변화를 보입니다. 그러나 다른 용량과 다른 시점에 폴리(I:C) 주사는 다른 단계에서 뇌 발달을 교란시켜 다른 결과를 초래할 수 있습니다. 여기에서는 임신 중기 배아 12.5일(E12.5)에 20mg/kg 폴리(I:C)를 복강내(i.p.) 주사하여 MIA를 유도하는 자세한 방법을 제공합니다. 이 방법은 산모-태반-태아 축에서 급성 염증 반응을 유발하는 것으로 나타났으며, 이는 궁극적으로 자폐증 및 정신분열증과 관련된 뇌 교란과 행동 표현형을 초래합니다.
서론
산모의 면역 활성화의 개념 (MIA)는 자폐증과 정신 분열증 1 모성 감염의 연관성에 대한 역학 연구에서 유래. 인해 태반 또는 바이러스 감염 모체 2,3- 후 태아 뇌에서 검출 가능한 복제 바이러스 병원체의 부재에, 자손에 감염의 효과가 오히려 병원체 자체보다 모체 면역 시스템의 활성화에 의한 것으로 가정한다 .
polycytidylic 산 : MIA와 정신 장애, 화학적으로 합성, 바이러스 성 모방 이중 가닥 RNA의 polyinosinic의 주입 사이의 인과 관계를 규명하기 : 임신 설치류에 (폴리 (I C)) 널리 MIA의 동물 모델로 사용되어왔다 4,5. 폴리는 (I : C) 수신자 같은 수용체 3 (TLR3) 및 폴리의 전신 투여 인식 (난 : C)은 바이러스와 같은 급성 염증 반응 유도한다. 메커니즘 중 하나되는 폴리으로 (I : C) 홍보자손에 oduces 행동 이상과 neuropathologies는 산모 - 태반 - 태아 축 6 프로와 항 염증성 사이토 카인의 불균형을 초래하는 것입니다. 몇몇 그룹은 정신 장애 (7)의 원인을 이해하는 MIA 모델을 채용 한 의한 연구 그룹 중에서 다양한 관심사 면역 활성화의 다양한 시점은 뇌....
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프로토콜
모든 프로토콜 기술 기관 동물 관리 및 사용위원회의 캘리포니아 공과 대학 (IACUC)의 승인하에 수행 하였다.
시간 제한 - 결합 쌍 1. 준비
- 유전자 발현 분석을위한 최소 6 행동 실험 댐 및 3을 사용합니다.
참고 : 마우스의 약 50 %가 시간 제한-짝짓기에서 연결되는 바와 같이, 추정 암컷 마우스의 두 배 번호를 사용합니다. - 더 이전의 임신 연령의 8~16주에서 암컷 마우스를 사용합니다.
참고 : 여성 생쥐 수컷 마우스에 앞서 성적 노출을 가지고 있지만 임신되지 않았습니다 허용됩니다. - 하우스는 여성 마우스는 함께 서로 옆에 자신의 발정주기를 동기화하기 위해 새장을 배치합니다. 5 성인 마우스의 주택 수 있도록 5.5 인치 이상의 높이와 75 평방 인치 내부 바닥과 표준 마우스 케이지를 사용합니다. 귀 펀치를 사용하여 각 여성 마우스 레이블.
2. 시간 제한 매트 설정ING 쌍
- 어두운 사이클이 시작되기 전에 시간 제한-짝짓기 0-2 시간을 설정합니다. 각 장에 두 여성 마우스를 놓습니다. 쥐를 가지고 개별적으로 무게. 암컷 마우스의 체중을 기록한다.
- 두 ....
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결과
/ kg 폴리 20 mg을 주입 : E12.5에서 (I C)는 산모 - 태반 - 태아 축에서 급성 염증 반응을 불러 일으킬과 두뇌 발달 및 행동 표현형 12, 13에 만성적 인 영향을 침전 수 있습니다. 전 염증성 사이토 카인의 상승 수준은 인터루킨 (IL) -6, MIA 후 급성 염증 반응의 신뢰할 수있는 지표입니다. 주사 12, 13 : IL6 유전자 태반의 표현과 태아의 뇌에 대한 피크 시간은 3 시간 후 폴리 (C I)에 있습니다. 우리는 그 폴리을 보여 주었다 (난 : C)는 산모의 비장-태반 태아의 뇌에서 높은 IL6 유전자 발현 (그림 5) 유도 (우에서 적응 데이터 등, 2015). 13. 연구자 등 예를 들어 MIA 후 급성 염증 반응, 임산부 다이어트, 유전.......
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토론
서로 다른 시간 창에서 MIA 유도는 설치류에서 다른 두뇌 발달 이벤트를 교란, 결과적으로 자손에 다른 행동 이상과 neuropathologies에 연결됩니다. E12.5에 주입 : 여기, 우리는 폴리 (C I)와 마우스에서 MIA를 유도 할 수있는 프로토콜을 설명했다. MIA 유도의이 방법은 행동, 신경 학적, 면역 학적, 그리고 자손 8,10,11,16에서 자폐증과 정신 분열증과 관련된 위장관 이상에 연결됩니다. MIA는 환경 적 위험 인자이기 때문에이 점에 유의하는 것이 중요하고, 자손의 표현형이 신경 발달 장애의 유전 적 모델 쥐에서보다 높은 변동을 가질 것으로 기대된다. 따라서, 정확하고 일관 MIA 통해 자폐증, 정신 분열증과 관련된 표현형을 생성하기 위해, 상기 결과 혼란 추가적인 변수를 최소화하는 것이 특히 중요하다.
프로토콜에 설명 된 타임 라인 가까이 따라야한다LY. 올바른 분사 시간 창 MIA 원하는 단계에서 자손의 두뇌 발달을 교란 있.......
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공개 사항
저자는 공개할 것이 없습니다.
감사의 글
우리는 MIA 모델, 자폐증, 정신 분열증 연구의 발전에 공헌을 위해 후반 박사 폴 H. 패터슨을 존중하고 싶습니다. 우리는이 프로토콜에 대한 그의 위대한 지원 Sarkis K. Mazmanian을 인정; 행정 지원 루벤 M. 바이욘, 이벳 가르시아 - 플로레스, 카렌 C. Lencioni, 그리고 레슬리 A. 노이만; 촬영에 도움을 알리 Khoshnan 및 월 C. 코; MIA 유도에 자신의 조언을 일레인 Y. 샤오와 나탈리아 Malkova; 자신의 전문 축산에 대한 제프리 S. 코크, 호아킨 구티에레즈, 콴 F. 리, 제이미로드 리 게스, 로레나 C. 산도발, 나탈리 A. Verduzco. 이 작품은 (폴 H. 패터슨에 NIH 5P50MH086383-04,)를 NIH 콘테 센터 수상에 의해 지원되었다; 자폐증은 (폴 H. 패터슨에 # 7670) 언어; (Sarkis K. Mazmanian에 # 322839) 시몬스 재단; NIH 교육 그랜트 (K.-HC에 NIH / NRSA T32GM07616); (ZY에) 캘리포니아 공과 대학 여름 학부 연구 활동 (SURF); 암젠 학자 캘리포니아 공과 대학에서 (ZY에) 프로그램; 및 박사후 친목 FR톰 국립 과학위원회, 대만 (NSC 101-2917-I-564-039, W.-LW)이다.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 폴리이노신– 폴리시티딜산 칼륨염 | SIGMA | P9582 | |
| 0.9% 염화나트륨 INJ. | USP HOSPIRA | NDC 0409-4888-10 | |
| MONOJECT 인슐린 시리나주 3/10ml 29 G x 1/2" | COVIDIEN | 8881600145 | |
| 50ml 원추형 나사 캡 튜브 | USA SCIENTIFIC | 1500-1211 | |
| Nanodrop 1000 분광 광도계 | THERMO SCIENTIFIC | 1000 | |
| 선택적 스테레오현미경 | Wild Heerbrugg | M5A | 선택적 |
| Dumont #5 펜치 Inox 팁 크기 .10 X .06 mm | Roboz | RS-5045 | 선택적 |
| RNAlater RNA 안정화 시약 | Qiagen | 76104 | 선택적 |
| TRIzol 시약 | Life Technologies | 15596-026 | 선택적 |
| RQ1 Rnase-free DNase | Promega | M610A | 선택적 |
| iScript cDNA 합성 키트 | Bio-Rad | 170-8891 | 선택적 |
| FastStart 유니버설 SYBR 그린 마스터 믹스 with ROX | Roche | 4913922001 | 선택적 |
| Real-time PCR | ABI | 7300 | 선택적 |
| 프라이머: Il6 forward | Life Technologies | TAGTCCTTCCTACCCCAATTTCC | 선택적 |
| 프라이머: Il6 Reverse | Life Technologies | TTGGTCCTTAGCCACTCCTTC | 선택적 |
| 프라이머: beta-actin forward | Life Technologies | AGAGGGAAATCGTGCGTGAC | 옵션 |
| 프라이머: beta-actin Reverse | Life Technologies | CAATAGTGATGACCTGGCCGT | 선택적 |
| MicroAmp 광학 96-웰 반응판 | Life Technologies | 4306737 | Optionl |
| MicroAmp 광학 접착 필름 | Life Technologies | 4311971 | Optionl |
| EthoVision | Noldus | EthoVision | Optionl |
| SR-LAB 장치(PPI) | San Diego Instruments | SR-LAB | Optionl |
| 대리석 | PENN-PLAX | 블루 보석 스톤 대리석 | Optionl |
| Dulbecco의 인산염 완충 식염수(DPBS) | Life Technologies | 21600-069 | Optionl |
| 파라포름알데히드 | 마크론 | 2621-59 | Optionl |
| Vibratome | Leica | VT1000 S | Optionl |
| 아지드화나트륨 | 시그마 | S2002 | Optionl |
| Triton x-100 | Sigma | X100 | Optionl |
| 과산화수소 용액 | Sigma | 18312 | Optionl |
| 염소 혈청 | Vector Laboratories | S-1000 | Optionl |
| 토끼 항 칼빈딘 항체 | Abcam | ab11426 | Optionl |
| Biotinlyated 염소 항 토끼 IgGantibody | Vector Laboratories | BA-1000 | Optionl |
| VECTASTAIN ABC 키트 | Vector Laboratories | PK-4000 | Optionl |
참고문헌
- Brown, A. S. Epidemiologic studies of exposure to prenatal infection and risk of schizophrenia and autism. Dev Neurobiol. 72 (10), 1272-1276 (2012).
- Fatemi, S. H., et al.
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재인쇄 및 허가
