Marginating-간 백혈구의 선택적 수확

요약

Marginating-hepatic leukocytes는 다른 백혈구 집단에 비해 독특한 특성과 뚜렷한 면역 기능을 나타냅니다. 여기에서 우리는 쥐 또는 생쥐의 간을 강제 관류하여 이 특정 간 세포 집단을 선택적으로 수확하는 방법을 설명합니다. 변두리-간 백혈구는 간 관련 질환 및 전이에 대한 감수성을 결정하는 데 중요한 것으로 보입니다.

초록

Marginating-hepatic (MH) 백혈구(간의 정현파에 부착된 백혈구)는 다른 면역 구획의 백혈구에 비해 독특한 구성과 특성을 나타내는 것으로 나타났습니다. 특히, 증거는 MH-백혈구 집단의 뚜렷한 전염증 및 항염증 프로필과 생쥐와 쥐 모두에서 순환 또는 비장 면역 세포에 비해 간 특이적 NK 세포(즉, 구덩이 세포)의 세포 독성이 더 높다는 것을 시사합니다. 본원에 제시된 방법은 마우스 및 랫트에서 간의 강제 관류에 의한 MH 백혈구의 선택적 수확을 가능하게 한다. 조직 분쇄 및 생물학적 분해를 포함하여 간 백혈구를 추출하는 데 사용되는 다른 방법과 달리, 이 방법은 다른 간 구획의 세포에 의해 오염되지 않은 간 정현파에서 독점적으로 백혈구를 생성합니다. 또한 관류 기술은 MH 백혈구의 무결성과 생리학적 환경을 더 잘 보존하여 조직 처리에 대한 알려진 생리학적 반응을 보존합니다. 많은 순환 악성 세포와 감염된 세포가 간 정현파를 통과하는 동안 억류되어 내피 세포 및 상주 백혈구와 물리적으로 상호 작용하기 때문에 고유한 MH 백혈구 집단은 비정상적인 순환 세포와 상호 작용, 식별 및 반응하기 위해 전략적으로 배치됩니다. 따라서 MH-백혈구의 선택적 채취 및 다양한 조건에서의 연구는 특히 순환 비정상 세포 및 간 관련 질환 및 암 전이와 관련하여 MH 백혈구의 생물학적, 임상적 중요성에 대한 이해를 증진시킬 수 있습니다.

서론

간 사인 곡선은 유기체에 중요한 다양한 면역 활동의 많은 백혈구 아형이 포함되어 있습니다. 예를 들어,도 덩이 세포로 알려진 간을 marginating (MH), 자연 살해 (NK) 세포, 특징 형태학 큰 과립 림프구 (LG 생명 과학)와 기능적으로 혈액 - 확립에 대하여 간 저항을 가능 자연 세포 독성 용량 백혈구뿐만 매개 종양 전이. 본 명세서에있어서의 목표는 중요한 독특한 세포 집단 (면역 함)을 연구하기 위해 MH 백혈구 선택적 수확을 가능하게하고, 이러한 특정 세포에 대한 각종 조작의 영향 (예 : 면역 활성)을 규명하는 것이다.

현상 원발 종양을 제거하는 면역 장애에도 불구하고, 암 환자 및 동물 모델에서의 증거는 면역계가 종양 세포, 미세 전이 및 throu 잔여 질병을 순환 제어 할 것을 지시GH 세포 매개 면역 (CMI). 그러나, 생체 내 기능과 인간에서 시험 관내 연구에서 가장자가 종양 세포는 순환 또는 비장 백혈구 ^1,2- 의한 세포 독성에 내성이 있음을 입증 동물, 이들 사이에 명백한 불일치가있다. 이러한 불일치는 별개 백혈구 모집단, 즉 marginating - 간 (정현파) 백혈구 활성화 NK 세포, 즉 세포 덩이 ^3들의 모집....

프로토콜

윤리 정책 : 동물 과목을 포함하는 절차는 텔 아비브 대학의 기관 동물 관리 및 사용위원회 (IACUC)에 의해 승인되었습니다.

1. 쥐 프로토콜

1. 준비
   1. PBS 헤파린 (30 유닛 / ml) 용액을 준비 인산 1 ㎖ 당 방부제없는 헤파린 30 단위 첨가하여 실온 (RT)에서 사용되는 식염수 (PBS) 1X 버퍼 용액. 동물 당 35 ml의를 계산합니다.
   2. 기포를 제거하는 연동 펌프 라인과 나비 바늘을 통해 헤파린 PBS를 통과한다.
   3. (중력 (건조) 설정에 적어도 30 분 동안 121 ° C에서 오토 클레이브) 가위 2 쌍, 무딘 칼날 집게, 2 지혈제 및 치아 조직 포셉 - 수술 도구를 소독.
2. MH-백혈구의 간 및 컬렉션의 관류
   1. 8 %의 이소 플루 란의 과다 복용으로 동물을 안락사. 예방 조치로서, 이소 플루 란을 포함하는 50 ML 튜브를 배치그 흉강을 열 때까지 쥐의 머리 주위 -soaked 패드.
   2. 호흡 중단시 즉시 간 및 심폐 복잡한을 노출 복막와 가슴 충치를 엽니 다. 이 과정을 통해 출혈하지 마십시오.
      1. 특히, 상부 가슴 캐비티 수준으로 그들을 통해 절단 리브를 향해 대각선 양쪽에....

결과

F344 래트에서 우리는 간 조직의 기계적 분쇄 다음, 전체 간 세포 집단의 세포 독성 (강제 간 관류 간 정현파 수집) MH-NK 세포의 세포 독성을 비교 및​​ 순환 백혈구의 세포 독성에 관한 것이다. 전체 세포 제제는 면역 분석법의 루틴으로 적어도 3 회 세척하고, 목표 세포주로서, 우리는 동종 YAC-1 또는 동계 MADB106 표적 세포주를 사용 하였다. 도 1에 나타낸 바와 같이 4 -, MH-NK 세포는 전체 간세포 집단 (도 1) 모두를 MADB106 및 YAC-1을 표적 세포주 대 (~ 80 % 각각 100 %까지) 심각한 독성을 나타내 반면 순환 백혈구 (도 2 및 3)의 깊이보다 낮은 세포 독성 수준과 동계 MADB106 목표 세포주에 대해 거의 사멸을 표시. 같은 relati기계적으로 처리 간은 또.......

토론

본 명세서 간 관류 방법은 선택적 수확 할 수 있으며 간 백혈구 marginating의 고유 인구 공부. 또한 피트 셀 ^3이라고 간 NK 세포, 간장 정현파에있는 독특한 NK 세포군을 구성한다. 그들은 쥐, 마우스 ^(17)과 인간 ^{(18, 19)에서} 발견된다. 절연 주변 NK 세포에 비해 피트 셀 작은 세포질 과립 ^(20)의 더 많은 수, 및 LFA-1 ⁽¹²⁾ 표면 항원의 이상 발현이 나타났다, YAC-1 및 CC531s 표적 세포 라인 ^(20)에 대하여 높은 세포 독성을 증명 . 또한, 절연 혈액 NK 세포와 달리 세포 덩이 NK 내성 P815 세포를 용균 할 수있다. 랫트와 유사 구덩이 세포, 인간 간 NK 세포는 NK 세포 ^{18,19 순환} 비교하여 NK-K562 민감한 표적 세포에 대해 높은 독성을 가지고, 강한 NK를 Lyse 표적 세포 ^18에 도시 하였다. Ov.......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
Autoclud 연동 펌프
, 버터플라이 바늘,	OMG		26G
, 버터플라이 바늘	OMG		21G*3/4"
, 주사기	Pic 용액		1ml
주사기	Pic 용액		2.5ml
주사기	Pic 용액		5ml
주사기	Pic 용액		10ml
주사기	Pic 용액		25ml
무뚝뚝한 모서리 집게
가위
지혈
조직 집게
22W 형광 일광 돋보기 램프

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