전립선암은 미국에서 암 관련 사망의 두 번째로 흔한 원인입니다. 정소성 암 모델은 전립선암의 생물학을 이해하고 치료 요법의 효능을 평가하는 데 유용한 접근 방식을 제공합니다. 이 프로토콜은 정형소 전립선암 마우스 모델을 확립하는 데 필요한 자세한 단계를 설명합니다.
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이 논문에서
요약
초록
전립선암의 다면적인 생물학을 연구하기 위해 전임상 생체 내 모델은 이 질병에 대한 중요한 생물학적 정보를 밝힐 수 있는 다양한 옵션을 제공합니다. 인간 정소성 전립선암 이종이식 마우스 모델은 유전적으로 및 분자적으로 변형된 종양 세포, 장기 미세환경 간의 특정 상호 작용을 이해하고 치료 요법의 효능을 평가하는 데 유용한 대안 접근 방식을 제공합니다. 이것은 원발성 종양 발달의 분자 사건을 연구하기 위해 고안된 잘 특성화된 모델이며, 색전증 및 종양 세포의 순환 진입 전에 전이성 연쇄 반응의 초기 사건을 요약합니다. 따라서 전이성 질환의 초기 단계의 기저에 있는 분자 메커니즘을 설명할 수 있습니다. 또한 이 모델은 임상적 관련성이 있는 약물 표적에 주석을 달 수 있으며 전립선암 진행을 연구하는 데 유용한 도구입니다. 이 원고에서는 인간 정형소 전립선암 이종이식 마우스 모델을 확립하기 위한 자세한 절차를 설명합니다.
서론
전립선 암은 옆에있는 폐와 기관지 (28 %) 1 암, 미국 남성 중 암 사망 (9 %)의 두 번째 가장 일반적인 원인이다. 최근의 데이터에 따르면, 220, 800 새로 진단 전립선 암의 경우 27, 540 사망 2015 1에서 발생할 것으로 예상된다. 고급 전이성 질환 즉 동안 초기 전립선 암 오년 상대 생존율은> 99 %이고 28 % 1. 고급 전이성 질환의 치료에 대한 주요 과제는, 특히 전립선 암 빈번한 사이트 뼈에 다른 장기로 전이이 질병의 경향을 기초 분자 메커니즘에 대한 이해의 부족이다. 따라서, 진보 된 전이성 질환 2,3-으로 진행에 대한 효과적인 치료법을 개발하기 위하여 이러한 전립선 종양의 분자 화장 공부 분명한 필요성이 존재한다.
전립선은 전시 HIG를 종양이진행에 잘 정의 된 경로가없는 시간 생물 학적 이질성. 전이는 종종 종양의 침윤 4없이 이전의 표시와 함께 발생합니다. 이 이질성은 임상 적 전립선 암의 분자 다양성에 기인한다. 이러한 치명적인 종양의 분자 메이크업을 이해하는 것은이 질병에 대한 더 나은 진단 및 치료 전략을 설계하는 열쇠입니다. 따라서, 전립선 암 연구 현재 이해 및 전이를 방지하는데 초점을 맞추....
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프로토콜
동물과 관련된 모든 절차에 대한 프로토콜 검토 및 기관 동물 관리 및 사용위원회 (IACUC)의 승인을 받아야한다. 관리 및 실험 동물의 사용을 위해 공식적으로 승인 된 절차를 따르십시오. 인트라 전립선 주입 오픈 복부 수술을 필요로하며, 동물은 수술 적절한 무균 기술은 전체 과정 동안 사용되는 수술 지정된 방 무균 환경에서 유지되어야한다.
주입을위한 세포의 1. 준비
주 : 연구 필요에 따라 임의의 전립선 암 세포주가 사용될 수있다. 세포주 공급자의 지침에 따라 배양한다.
- 안정적 반딧불 루시퍼 라제 유전자를 표현하는 PC3M 룩-C6 세포주 최소 필수 매체 (MEM)에서 배양 된 세포를 10 % 태아 소 혈청 (FBS), 1X 비 필수 아미노산이 보충 된, 1X Phleomycin D1 및 1mM의 피루브산 나트륨 . 인큐베이터 w에서 셀을 유지i 번째 37 ° C에서 95 % 공기 및 5 % CO 2의 가습 된 분위기. PC3M 룩-C6 세포는 UCSF의 핵심 시설에서 조달했다.
- 트립신 처리하여 수확 세포. 인산염 완충 식염수 (PBS)로 한번 배양 접시를 씻으십시오. 세포가 분리되는 때까지 37 ° C에서 95 % 공기 및 5....
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결과
후방 전립선 로브로 PC3M 룩-C6 세포의 동소 이식 이후, 생쥐는 주간의 실험 과정 (- B도 5a)를 통해 세포의 정착 종양의 성장을 모니터링하는 살아있는 동물의 생물 발광 이미징 시스템을 사용하여 영상화 하였다. 생물 발광 신호의 정량화는 PC3M 룩-C6 세포가 성공적으로 전립선 로브를 식민지 것으로 나타났다. 증가 생물 발광 실험 (도 5b)에 걸쳐 증가 차 종양의 성장을 나타낸다. 연구 목표에 기초하여, 마우스는 종양 성장 및 먼 전이성 병변을 모니터링하는 방사선 형광 또는 발광 이미징에 의해 주간 비 침습적 모니터링 할 수있다. 이 모델에 의해 달성 될 수있는 다른 매개 변수는 : 체중 실험에 걸쳐 음식 섭취의 변화; 종양의 크기 및 중량에 약물 치료의 효과; 부량실험 종결시 종양 크기와 중량; DNA / RNA / 단백질의 추출 실험 종료 후 차 종양 내부에 발생.......
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토론
이 원고는 인간의 소성을 전립선 암 이종 이식 마우스 모델을 설정하기위한 상세한 절차를 설명합니다. 이 모델은 면역 쥐의 등 전립선 로브에 인간 전립선 암 세포주 PC3M 룩-C6의 직접 주입에 의해 수립되었다. 종양은 실험의 과정을 통해 발전 할 수 있었다. 종양 성장 실험 동안에 비 침습적 생물 발광 이미징 시스템에 의해 매주 모니터링 하였다.
이종 이식 종양 모델을 확립하는데 가장 중요한 요소는 종양 세포의 주입에 걸쳐 일관성을 달성한다. 통계적으로 유의 한 결과를 얻기 위해, 각 실험 그룹은 5-10 마우스를 포함해야하고, 종양 크기의 변화는 평균 종양 크기의 10 % 이상을 초과하지 않아야한다. 이를 위해, 프로토콜 내의 몇몇 중요한 단계 같은 중요하다 : I) 수술 동안 무균 촉진 영역에서 수술을 수행; ⅱ) 세포를해야 transplante가능한 한 빨리 d를 문화로부터 분리 한 후, ⅲ) 사출 볼륨이 일치해야합니다; 세포의 주입시와 체강 중 내부 장기의 ⅳ)주의 .......
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공개 사항
저자는 더 경쟁 재정적 이해 관계가 없음을 선언합니다.
감사의 글
원고 준비에 대한 지원과 도움을 주신 Roger Erickson 박사님께 감사드립니다. 이 작업은 미국 국립보건원(National Institutes of Health)의 국립암연구소(National Cancer Institute)에서 보조금 번호 RO1CA160079, RO1CA138642, UO1CA184966 및 VA 자금 지원 프로그램 프로젝트 번호 1P1 BX001604를 통해 지원했습니다.
....액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| PC3 전립선암 세포주 | ATCC | CRL-1435 | |
| 최소 필수 매체(MEM) | GIBCO,Life Technology | 11095-080 | |
| PBS | GIBCO,Life Technology | 10010-023 | |
| FBS | GIBCO,Life Technology | 10437-028 | |
| Zeocin | Invitrogen,Life Technology | R250-01 | |
| 트립신 | GIBCO,Life Technology | 25300-54 | |
| IVIS | Xenogen-Caliper | ||
| 인슐린 주사기(300 µ l, 28.5 g) | Becton Dickinson | 309300 | |
| Mice | Charles River Laboratories, Inc | ||
| 알코올 면봉 | MEDEquip Depot | 326895 BD | |
| PVP 요오드 준비 패드 | MEDEquip Depot | C12400PDI | |
| Surgical CatGut 크롬 봉합사 | Demetech | CC224017F0P | |
| Matrigel | Corning | 354248 |
참고문헌
- Siegel, R. L., Miller, K. D., Jemal, A. Cancer statistics, 2015. CA Cancer J Clin. 65 (1), 5-29 (2015).
- Andrieu, C., et al. Heat shock protein 27 confers resistance to androgen ablation and chemotherapy in prostate cancer cells through eIF4E. Oncogene. ....
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재인쇄 및 허가
