대한 대퇴골 창 회의소 모델<em&gt; 생체</em쥐의 골수에서&gt; 셀 추적

Yonghong Chen; Azusa Maeda; Jiachuan Bu; Ralph DaCosta

doi:10.3791/54205

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방법 논문

대한 대퇴골 창 회의소 모델

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DOI:

10.3791/54205

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2016년 7월 28일

Yonghong Chen^*¹ , Azusa Maeda^*¹^,² , Jiachuan Bu¹ , Ralph DaCosta¹^,²^,³

¹Princess Margaret Cancer Centre, ²Department of Medical Biophysics, University of Toronto, ³Techna Institute, University Health Network

^* These authors contributed equally

이 논문에서

요약

이 프로토콜은 생체 내에서 대퇴골수에서 세포의 움직임을 추적하는 데 사용할 수 있는 새로운 쥐 대퇴골 창 챔버 모델을 설명합니다. 생체 내 다광자 형광 현미경은 시간이 지남에 따라 대퇴골수의 세 가지 구성 요소(혈관 구조, 콜라겐 매트릭스 및 호중구)를 이미지화하는 데 사용됩니다.

초록

골수는 다양한 조혈 및 비조혈 세포를 포함하는 복잡한 기관입니다. 이 세포는 조혈, 면역 조절 및 종양 조절을 포함한 많은 생물학적 과정에 관여합니다. 조직학 및 혈구 수와 같이 골수 내 세포 활동을 이해하기 위해 일반적으로 사용되는 방법은 생체 내에서 여러 세포 구성 요소의 동적 작용을 포착하기보다는 정적 정보를 제공합니다. 표준 방법을 보완하기 위해 쥐 골수에 있는 세포와 구조의 연속 생체 내 이미징을 가능하게 하는 창 챔버(WC) 기반 모델이 개발되었습니다. 이 프로토콜은 대퇴골수에 대한 장기적인 광학적 접근을 용이하게 하기 위해 대퇴골에 WC를 설치하는 수술 절차를 설명합니다. 특히, 실험적 유용성을 입증하기 위해 이 WC 접근법을 사용하여 대퇴골의 혈관 네트워크 내에서 호중구를 이미지화하고 추적하여 골수에서 면역 세포 이동 및 조절을 시각화하고 정량화하는 새로운 방법을 제공했습니다. 이 방법은 조혈, 줄기세포 이식, 암을 포함한 병리학적 상태에서의 면역 반응과 같은 쥐 골수에서 다양한 생물학적 과정을 연구하는 데 적용할 수 있습니다.

서론

골수는 조혈 및 면역 조절에 관여하는 중요한 기관이다. 이는 조혈 줄기 및 전구 세포 (HSPCs)를 함유하는 성분으로 구성 조혈 및 중간 엽 세포 ^하나를 야기 비 조혈 전구 세포를 포함하는 기질 성분. 조혈 활동 3 분의 2는 골수 세포 ^2의 생성에 전념하고 있습니다. 1-2 × 10 ¹¹ 세포는 정상적인 인간 ^성인이 하루 당 생성에 특히 호중구의 다수는 골수에서 생성된다. 호중구는 미생물 감염에 대한 방어의 첫 번째 줄에있는 스트레스가 주변 호중구 ^1,3-을 보완하기 위해 자신의 동원을 트리거 할 때까지 주로 골수에서 예약되어 있습니다. 그 항균 효과에 더하여, 최근의 연구에 따라 바뀌는 성장 프로 및 항 종양 표현형 모두 갖는 암 생물학에서 호중구의 주요 역할을 시사종양 미세 환경의 ^4,5에 신호 인자 베타 (TGF-β). 또한, 연구는 순환 호중구 세포 독성, 항 전이 ^효과를 발휘하면서 ⁸ 차 종양에 축적 호중구, T 세포의 세포 독성 ^-6,7- 기능을 억제함으로써 프로 종양 및 전이성 영향을 미치는 것을 설명했다. 이와 같이, 골수의 조혈 세포, 특히 호중구의 조사가 종양 면역 조절의 역할을 밝히기에 중요하....