작은 동물 모델에서 요로 감염: 남성 및 여성 쥐의 Transurethral 도관 법

요약

쥐의 transurethral 도관 법의 설립된 모델 등 요로 감염, 방광 병 리의 연구를 허용 하지만 여성에서 수행할 수 있습니다. 여기, 남성 transurethral 주입의 새로운 모델에는 남녀 간의 강한 임상 및 역학 다름에 의해 표시 된 지역에 연구 수 있게 된다.

초록

요로 감염 (UTI)는 매우 일반적인 전세계 중요 한 병 적 상태 및 의료 관련 비용을 들이지. 정확 하 게 반영 질병 및 진행, 작은 동물 모델, 호스트 병원 체 상호 작용의 해 부 및 감염에 면역의 생성을 허용 합니다. 마우스에서 uropathogenic 대장균, 커뮤니티의 85% 이상에서 원인이 되는 대리인의 intravesical 점 획득 요로 감염, 인간에서 관찰 된 감염의 단계의 많은. 그러나 최근 까지는,, 요로 수만 모델링 여성 동물에서. 이 제한 요로 감염, 암 등 다른 방광 병 리에 있는 성 관련 된 다름의 연구를 방해 했다. 여기, 우리는 여성 및 남성 동물 사이의 직접 비교를 허용 하는 남성 쥐를 주입 시키고 cytometry 방광 조직 감염 호스트 응답을 이해 하는 수단으로 평가 하는 상세한 프로토콜을 제공 하는 방법을 설명 합니다. 함께, 이러한 접근은 요로 감염 및 기타 방광 관련 질병에서 관찰 하는 섹스 편견을 호스트 요인의 식별에 도움이 됩니다.

서론

요로 감염 (UTI) 선진국¹에서 가장 일반적인 감염 중 하나입니다. 감염 속도가 여성 및 신생아 및 노인²중 남성 사이 유사 하다. 그러나 Premenopausal 성인 여성,, 남자^2,3에 비해 지역사회 획득 요로 감염의 발생률이 크게 증가 했습니다. 이 질병은 주로 여성 영향, 그 기본 및 임상 연구는 압도적으로 여성에서 요로 감염에 집중. 그러나, 남자에 요는 중요 하 고 understudied 의료 도전⁴. 실제로, 남자에 요 더 높은 사망률과 관련 있기 때문에,이 감염은 복잡 한^4,5정기적으로 정의 됩니다.

생리학과 병 리에 섹스 편견의 중심 역할에 대 한 우리의 이해 발전, 새로운 메서드는 질병의이 이전 무시 측면을 탐구 하는 데 필요한. 성 차이에서 역할을 필수적인 면역과 감염; 여성 남성은 결핵, 말라리아, 에이즈^6,

프로토콜

마우스 실험 위원회 회의 d 프로토콜 번호 2012-0024의 승인에 따라 실시 했다 ' éthique en expérimentation animale 파리 센터 동부 유럽 지침 2010/63의 응용 프로그램에서 수 드 (동물 실험의 윤리 위원회) 유럽 연합입니다.

1입니다. 카 테 터의 준비

1. 한 소아 정 맥 접근 정 감염 되는 쥐의 각 그룹에 대 한 준비. 제조업체에서 지시 inbuilt 스프링 메커니즘을 사용 하는 바늘의 각 정 박탈. 바늘만 플라스틱 정 맥 정 맥 보존을 삭제 합니다.
2. 한 자외선 (U.V.) 주기, 일반적으로 25-30 분에 대 한 층 류 두건에 카 테 터를 소독.
   그러나 참고: 카 실험 그룹, 남녀, 또는 세균성 긴장 사이 새로운 카 테 터를 사용 해야 하는 더 이상 마우스에 대 한 사용할 수 있습니다.

2. 준비 Uropathogenic 대장균 의 감염에 대 한

1. 최소 2 일 전에 행진 UPEC Luria 국물 (파운드) 한 천 격판덮개에 냉동된 세균성 주식에서 무 균 접종 루프를 사용 하 여 감염 경우 적절 한 항생제를 포함. 37 ° C에서 밤새 품 어. 플레이트 4 ° C에서 최대....

결과

이 프로토콜의 개발, 여성 및 남성 C57Bl/6 마우스의 동료 얻은, 그리고 세균 부담 1 시간에서 30 일에 이르기까지 시간 포인트에서 방광에 평가 했다 6 ~ 8 주 세. 이러한 연구 결과 다른 상세한 (Zychlinsky Scharff 외., 보류). 여기, 우리는 24 시간 감염에서 대표적인 데이터 제시. 특히, 세균성 부담 24 시간 게시물 감염 (그림 1)에서 남성과 여성 쥐 사이 해당 했다. 세균성 짐에 작은 변화는 각 그룹 24 시간 게시물 감염, 어떤 여성 쥐^15,16보고 되었습니다 비슷한 내에서 관찰 되었다.

충분히 빈 방광 감염 전에 소변을 주의 하는 경우는 inoculum의 상당한 누설 거의.......

토론

Transurethral 점 남성 쥐의 방광 점 막 질병에 섹스의 영향으로 많은 새로운 연구 기회를 제공 하지만 또한 몇 가지 과제를 선물 한다. 으뜸가, 한 가지 한계는는 점 처음 카 테 터 삽입 시 과도 한 염증의 결과로, 기술적으로 어려운 증명할 수 있습니다. 기술에서 개선 에반스 블루 염료 등 컬러 솔루션으로 죽은 쥐의 주입에 의해 얻을 수 있습니다. 하는 점 성공, 방광 시각적으로 검사 해야 하 고 얻은 액체의 볼륨 투베르쿨린 주사기로 추출 하 여 평가할 수 있다. 천천히, 부드러운 움직임의 중요성을 과장 수 없습니다: 저항 힘이 초과 염증과 조직 손상에서 발생, 카 테 터를 삽입 하는 데 사용 해야. 올바르게 수행 하는 경우 카 테 터는 요도에 여유롭게 슬라이드 합니다. 만약 저항이 나 방해는, 카 테 터를 제거 하 고 삽입을 다시 시도 하 최상 이다.

세균성 부담 24 시간 게시물 감염에 기지의 품질을 연관 하 여 우리는 적은 양의 세균 inoculum 끊기면 감염의.......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
BD Insyte Autoguard 차폐 IV 카테터 24G, 외경 0.7mm, 길이 14mM	BD 의료	381811 또는 381411*	* 카탈로그 번호는 국가에 따라
접종 루프	Greiner Bio-One	731171
LB Miller 육수	Difco	244620
LB Miller 한천	Difco	244520
큐벳	Bio-rad	223-9955
주사기	B Braun	9166017V
엄지 (Adson) 집게	Fine Science Tools	11006-12
5 ml 튜브, 폴리 프로필렌	Falcon	352063
Tissue Ruptor 일회용 프로브	Qiagen	990890
15 ml 플립 캡 튜브	Thermo Scientific	362694
DNAse	Invitrogen	18047019
Liberase TM	Sigma-Aldrich	5401119001	분취하여 -20°C에서 보관해야 합니다. C는 반복되는 동결-해동을 피하기 위해
100 &마이크로; M MACS 스마트 스트레이너	Miltenyi	130-098-463	15ml 튜브와 호환되며
100 µ를 선호합니다. M 세포 스트레이너	Falcon	352360	50ml 튜브와 호환, MACS 스마트 스트레이너를 사용할 수 없는 경우
96 웰 플레이트	Falcon	353077
Fc 블록	BD Pharmingen	553142	anti-CD16/CD32
안티 마우스 CD45 항체	BD Biosciences	561487	다양한 형광 접합 옵션을 사용할 수 있습니다
필터 캡이 있는 5ml 튜브 폴리스티렌	Falcon
인슐린 주사기	Terumo	BS05M2913
휴대용 호모게나이저	Qiagen	9001272	TissueRuptor
플로우 사이토미터	BD Biosciences	N/A	Fortessa SORP
유세포 분석 소프트웨어	BD Biosciences	N/A	Diva

입니다. 는 은 352235