본 문서에서는 마우스 모델에서 BCG를 사용하여 비강 내 및 피하 면역에 의해 유도된 보호 효능 및 폐 면역 반응을 비교하기 위해 따랐던 방법론을 자세히 설명합니다. 본 연구의 결과는 폐 백신 접종의 이점을 보여주며, 백신 유도 보호에서 IL17 매개 반응의 역할을 시사한다.
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이 논문에서
요약
초록
피내 BCG 백신 접종에 대한 전 세계적인 보도에도 불구하고 결핵은 여전히 세계에서 가장 널리 퍼진 전염병 중 하나입니다. 전임상 데이터는 폐결핵 백신이 전염의 원인이 되는 폐질환을 예방하기 위한 유망한 전략으로 장려하고 있습니다. 이 연구에서는 피하 백신과 비교할 때 비강 내 BCG 백신 접종의 이점을 마우스 모델에서 입증하는 데 사용되는 방법론을 설명합니다. 본 연구의 데이터는 비강 내 BCG 투여 후 더 큰 보호 효능을 나타냈다. 또한, 본 연구 결과는 폐 백신 접종이 Th1 및 Th17 반응을 포함한 폐의 면역 반응을 높이고 호흡기 기도의 면역글로불린 A(IgA) 농도를 증가시킨다는 것을 나타냅니다. 본 연구의 데이터는 Mycobacterium tuberculosis 챌린지 후 폐에서 IL17 생성 세포의 존재와 보호 효능 사이의 상관관계를 보여주며, 이는 폐 백신 접종에 의해 부여되는 보호 반응에서 이 사이토카인의 역할을 시사합니다. 마지막으로, BCG 외에 다른 결핵 백신으로 외삽할 수 있는 마우스 모델에서 호흡기 백신 접종을 연구하기 위해 개발한 글로벌 워크플로우를 자세히 설명하며, 이는 점막 반응 또는 기관내 또는 에어로졸과 같은 다른 폐 투여 경로를 표적으로 합니다.
서론
결핵 (TB)는 TB 놀라운 세계 보건 문제 일 수 있습니다 세계에서 HIV보다 더 많은 관련 사망의 원인이되는 주요 감염 질환 중 하나 다 약제 내성 균주의 증가 증가와 결합이다. 새로운 진단 도구,보다 효과적이고 독성이 적은 약물, 새로운 안전하고 효과적인 결핵 백신은 특히 개발 도상국에서, 긴급한 필요하다.
감쇠 Bacille 칼 메트 - GUERIN은 (BCG)은 현재 전 세계적으로 1970 년대 이후 출생시 피내 투여 된 TB, 대한 전용 허가 백신 살고있다. BCG는 아이들의 질환 (수막염 및 속 립성 결핵)의 심한 형태의 예방에 효과적인 것으로 간주되지만, 질병 전파 (2)의 책임 폐결핵에 대한 일관성 효과를 보여 주었다.
TB 감염의 자연 경로를 모방 폐 예방 접종은 로컬 호스트 면역 반응을 프라이밍위한 매력적인 접근 방식을 나타냅니다에스. 피하 또는 피내 경로 3-6에 비해 이와 관련하여, 다른 관련 TB의 동물 모델에서 다양한 전임상 작품 폐 면역화 다음 큰 백신 효능을 보여 주었다. 그럼에도 불구하고, 폐 예방 접종에 의해 유발 보호 메커니즘은 잘 이해되지 않습니다. 지난 몇 년 동안, 여러 작품 IL17 점막....
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프로토콜
모든 마우스는 통제 된 조건 하에서 유지와 질병의 징후가 관찰되었다. 실험 연구는 실험 동물의 보호와 관할 지역 윤리위원회의 승인과 유럽 국가 지침과 일치 하였다.
BCG 덴마크어의 정량화 글리세롤 주식 및 결핵균의 H37Rv 1. 준비
주 : 설명 된 모든 프로토콜은 BSL3 조건 하에서 수행 하였다.
- BCG 덴마크어 또는 H37Rv 균주의 해동 냉동 글리세롤 주식 및 트윈 80 0.05 % (v / v)로 및 ADC (알부민, 포도당, 카탈라제) 10 % (v / v)의 보충 7H9 매체 (10) 10ml에 100 μl를 접종.
- 배양 로그 상에 성장 될 때까지 37 ℃에서 일주일 동안 정적 조건에서 인큐베이션.
- 신선한 배지 200㎖에 10 ml의 문화를 전송하여 세균 배양을 확장 할 수 있습니다. 20 추가 품다정적 조건에서 일.
- g X 2500에서 15 분 동안 50 ml의 원심 분리기 튜브와 원심 분리기에 전송합니다.
- 상층 액을 버리고 잔류 볼륨에서 세균 펠렛을 재현 탁. (- 튜브 당 15 10) 각각의 튜브 멸균 3 mm 직....
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결과
피하 및 비강 :이 작품은 BCG의 관리의 두 경로의 비교에 대해 설명합니다. 피하 전세계 BCG 현재 임상 경로 인 피내, 비슷하다. 백신의 비내 경로 M.의 감염 천연 경로를 모방하는 것을 목표 목적으로 결핵은 폐에 직접 병원체의 주요 표적 장기를 면역 반응을 유도한다.
그림 1은 다음 워크 플로를 설명합니다. 십주 된 여성 DBA에 여덟은 / 2 마우스는 행정의 피하 또는 비강 경로로 106 CFU BCG의 덴마크어로 예방 접종을하고 있습니다. 여덟 주 후에 쥐의 그룹은 백신에 의한 폐의 면역 반응을 분석하기 위해 희생된다. BAL 샘플을 먼저 얻을 수있다, 그리고, 우리는 폐를 수확. 백신 수여 예방 효과를 연구하기 위해, 우리는 differe 접종M.의 .......
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토론
현재 결핵 백신인 BCG는 역사상 가장 널리 투여된 백신이지만 결핵은 전 세계적으로 전염병으로 인한 사망 및 이환율의 주요 원인 중 하나로 남아 있습니다. 이 역설은 전염의 원인 형태인 폐결핵에 대한 이 백신의 보호 부족으로 설명됩니다. 폐 형태의 질병에 효과적인 새로운 예방 접종 접근법은 전 세계적으로 질병 전파에 가장 큰 영향을 미칠 것이기 때문에 시급히 필요합니다.
우리의 데이터는 자연적인 감염 경로를 모방하기 위해 BCG 투여 경로를 변경하는 것이 폐결핵을 예방하는 성공적인 전략이 될 수 있음을 분명히 보여줍니다. 우리의 결과는 기니피그와 비인간 영장류(NHP) 6,9,12를 포함한 다양한 동물 모델에서 동등한 데이터를 보여주는 다른 저자와 일치합니다.
놀랍게도, 우리의 미공개 데이터는 비강내 경로에 의한 투여량이 프로토콜의 중요한 단계임을 나타냅니다. 이러한 결과는 10μl(40μl 대신)에 재현탁된 .......
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공개 사항
저자는 공개할 것이 없습니다.
감사의 글
이 작업은 "스페인 경제경쟁력부"[보조금 번호 BIO2014-5258P], H2020 프로그램[보조금 번호 TBVAC2020 643381]의 "유럽연합 집행위원회"의 지원을 받았습니다.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| Middlebrook 7H9 국물 | BD | 271310 | |
| Middlebrook ADC Enrichment | BD | 211887 | |
| Tween 80 | Scharlau | TW00800250 | |
| 3mm 직경 유리 구슬 | Scharlau | 038-138003 | |
| Middlebrook 7H10 Agar | BD | 262710 | |
| 1ml 주사기 26GA 0.45 x 10mm | BD | 301358 | |
| GentleMACS 해리기 | Miltenyi Biotec | 130-093-235 | |
| C 튜브 | Miltenyi Biotec | 130-093-237 | |
| M 튜브 | Miltenyi Biotec | 130-093-236 | |
| Collagenase D | Roche | 11088882001 | |
| DNaseI | Applichem | A3778,0100 | |
| Falcon 70 µ m 세포 여과기 | Corning | 352350 | |
| RPMI 1640 | Sigma | R0883 | |
| 적혈구 용해 완충액 | Sigma | R7757 | |
| GlutaMAX 보충제 | Gibco | 35050-061 | 100x 농축 |
| 페니실린-스트렙토마이신 용액 | Sigma | P4333 | 100x |
| 농축 태아 송아지 혈청 | 생물학 산업 | 04-001-1A | |
| 2-메르캅토에탄올 | 시그마 | M3148-25ML | |
| 셉터 2.0 핸드헬드 자동 세포 계수기 | Millipore | PHCC20040 | |
| 셉터 세포 계수기 센서, 40 &마이크로; m | Millipore | PHCC40050 | |
| Mycobacterium Tuberculosis - Tuberculin PPD | Statens Serum Institut (SSI) | 2390 | |
| 마우스 IFN-γ ELISA 개발 키트 | Mabtech | 3321-1H | |
| 마우스 IL17A ELISA 개발 키트 | Mabtech | 3521-1H | |
| Brefeldin A | Sigma | B7651 | |
| FITC 쥐 안티 마우스 CD4 | BD | 553047 | |
| BD Cytofix/Cytoperm 키트 | BD | 555028 | |
| APC-Cy7 쥐 안티 마우스 IL-17A | BD | 560821 | |
| APC 마우스 안티 IFNg | BD | 554413 | |
| LACHRYMAL OLIVE LUER LOCK 0.60 x 30 mm. 23G x 1 1/4 인치 | UNIMED | 27.134 | |
| 고단백질 결합 폴리스티렌 플랫 바텀 96웰 플레이트 MAXISORP | NUNC | 430341 | |
| ; 과산화효소 항체 | Sigma | A4789 | |
| 3,3′,5,5′-Tetramethylbenzidine (TMB) | Sigma | T0440 | |
| MyTaq DNA 중합효소 | Bioline | BIO-21107 | 키트에는 버퍼 5x가 포함되어 있습니다. |
참고문헌
- Zumla, A., et al. The WHO 2014 global tuberculosis report--further to go. Lancet Glob Health. 3 (1), e10-e12 (2015).
- Mangtani, P., et al. Protection by BCG vaccine against tuberculosis: a systematic review of randomized controlled tria....
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재인쇄 및 허가
