이 프로토콜은, 리스테리아의 EGD 균주 (L. 모노 사이토 겐)을 C57BL / 6J 마우스에 접종하고, 자연 살해 (NK) 세포, 자연 살해 T (NKT) 세포에 의한 인터페론 - γ (IFN-γ) 응답을 측정하는 방법을 설명 적응 T 포스트 감염 림프구. 이 프로토콜은 또한 병원균의 수정 된 LD (50) 투여로 감염 후 쥐에서 생존 연구를 수행하는 방법에 대해 설명합니다.
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이 논문에서
요약
초록
L. 모노 사이토 인간 식품 매개 질환의 원인이되는 그람 양성 세균이다. 이 병원체와 쥐의 실험 감염은 세포 내 병원체에 대한 숙주의 면역 타고난 및 적응 면역 세포와 특정 사이토 카인의 역할에 매우 유익하고있다. 리스테리아 모노 사이토 겐과 치사 감염시 타고난 세포에 의한 IFN-γ의 생산은 대 식세포 및 병원균 1-3의 초기 제어 활성화를위한 중요합니다. 또한, 적응 메모리 림프구에 의한 IFN-γ 생산에 재감염 4 선천성 세포의 활성화를 프라이밍 중요하다. L. 따라서 감염 모델 모노 사이토 겐 IFN-γ 생산을 증가시키기 위해 설계된 새로운 치료법은 생체 내 IFN-γ 반응에 영향을 미치는 등과 같은 세균 간극을 증가 또는 마우스의 생존을 개선 생산적 생물학적 효과가 있는지 여부를 조사하기위한 훌륭한 도구 역할 ...에서감염. 리스테리아 모노 사이토 겐의 EGD 균주 C57BL / 6J 마우스의 복강 내 감염을 수행하고, 유동 세포 계측법에 의한 NK 세포, NKT 세포, 및 적응 림프구에 의한 IFN-γ 생산을 측정하는 방법의 기본 프로토콜이 여기에서 설명한다. (1) 성장하고 접종에 대한 박테리아를 준비 (2) 엔드 포인트로 비장과 간, 그리고 (3) 측정 동물의 생존에 박테리아 부하를 측정 : 또한, 절차에 설명되어 있습니다. 대표 데이터는이 감염 모델 L. 모노 사이토 겐이 감염 마우스의 생존에 대한 IFN-γ 반응의 특정 제제의 효과를 테스트 할 수있는 방법을 예시하기 위해 제공된다.
서론
IFN-γ는 세포 내 병원체에 대한 면역 매개 종양 성장을 제어하기위한 5 중요 사이토킨이다. 박테리아 내성이 사이토 카인의 중요성은 IFN-γ의 신호 전달 경로에서의 돌연변이는 마이코 박테리아 및 살모넬라 6 감염에 매우 민감하여 인간 관찰에 분명하다. 마찬가지로, 마우스, IFN-γ 또는 L.는 10, 11 모노 사이토 겐을 포함 마이코 박테리아 7-9 및 기타 세포 내 병원균에 저항의 IFN-γ 수용체 전시 결함 중 하나에 슈만 편모충 주요 12, 살모넬라 티피 무리 움 (13), 특정 바이러스 (11) 결핍. 맞서 싸우는 병원균뿐만 아니라, IFN-γ 종양 (14)에 대한 호스트 방어에 중요한 역할을한다. IFN-γ의 높은 생산은 감염 또는 암의 맥락에서 유용하지만, 이러한 사이토 카인의 생산을 장기간 t 연계 된비 - 비만 당뇨 마우스 모델 (18) 전신성자가 면역 15-17의 발전 형 가속도 O I 당뇨병.
IFN-γ의 주요 소스는 NK 세포, NKT 세포, γδ T 세포....
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프로토콜
안전 정책
이 프로토콜은 라이브 리스테리아 모노 사이토 겐 쥐의 감염을 설명합니다. 병원균은 면역 저하되지 않는 훈련을받은 사람이 BSL2 조건에서 안전하게 처리됩니다. 면역 사람들은 HIV 감염 또는 면역 억제 요법 치료를 필요로 만성 질환이 임신 여성, 노인과 개인을 포함한다. 감염된 샘플을 처리하는 동안 작업자는 보호 실험실 코트 또는 가운, 장갑, 마스크, 눈 보호를 돈합니다. 여기에 설명 된 작품은 대학 건강 네트워크에 의해 (UHN) 바이오 안전성 사무실을 발급 한 인증서 (# 32876)에서 BSL2 조건에서 수행 하였다. 감염된 마우스 또는 사용하지 않는 조직에서 시체는 두 번 싸서 및 생물 학적 폐기물 처분했다. 감염된 마우스에서 케이지는 고압 증기 멸균에 의해 오염 제거 하였다.
윤리 정책
마우스를 유지하고 quara에 감염ntine UHN 동물 시설 내 방은 동물 관리에 캐나다위원회가 설정 한 지침에 따라 마음에 든다고했다. 마우스의 모든 절차는 UHN 동물 관리위원회에 의해 승인 된 동물 사용 프로토콜 # 3214에 따라 수행 하였다. 때문에 윤리적 고려 사항, 죽음은 생존 연구를위한 엔드 포인트로 사용되지....
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결과
그림 3은 병원균의 10 5 CFU와 24 시간 후 감염에 비장 NK와 NKT 세포에서 IFN-γ의 염색 세포 계측법 몇 가지 일반적인 흐름을 제공합니다. 이 도면은 또한 표 2에 기재된 염색 패널 게이팅 전략을 예시한다. 그림 4는 105 CFU 리스테리아 모노 사이토 겐에 감염된 수컷 마우스는 PPARα 길항제 IS001 또는 차량 제어로 처리 한 실험에서 얻을 수 있었다 몇 가지 대표적인 데이터를 표시 한 후 24 시간 후 NK와 NKT 세포에서 IFN-γ에 대한 분석 . 이 그림은 IS001 치료는 병원체와 감염 후 IFN-γ의 NKT 세포에 의한 반응,하지만 NK 세포를 밀어 것을 알 수있다. 그림 5는 열 살해 아빠와 다시 자극 생체 후 7 일 후 감염.......
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토론
여기에서 우리는 L.의 EGD 균주가 남성 또는 여성 C57BL / 6J 마우스에서 25 모노 사이토 기본 실험 감염을 수행하는 방법에 대한 프로토콜을 설명합니다. 이 프로토콜은 생체 (31)에 타고난 및 적응 림프구에 의한 IFN-γ 생산에 새로운 작은 분자 IS001의 효과를 연구하기위한 목적으로 설립되었다. 세균 통관과 생존 후 감염을 모니터링함으로써, 통찰력 IFN-γ의 이러한 변화는 감염을 제어 할 수있는 호스트의 능력에 영향을 방법으로 획득 하였다.
의정서에 중요한 고려 사항
연구의이 유형의 디자인에서 중요한 고려 사항은 각 실험 적절히 구동하고 적절하게 제어 될 수 있다는 것이다. 때문에 감염에 대한 면역 반응의 생물학적 변화에 (그림 4 참조 6), 그것은 N = 4 것이 좋습니다 - 그룹 당 5 .......
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공개 사항
공개할 이해 상충이 없습니다.
감사의 글
이 프로토콜의 개발은 CIHR(MOP97807)에서 SED로의 운영 보조금으로 지원되었습니다.
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재료
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| 10x Perm / Wash 버퍼 | BD | 554723 | ddH 2 < / sub >O |
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참고문헌
- Pamer, E. G. Immune responses to Listeria monocytogenes. Nat Rev Immunol. 4 (10), 812-823 (2004).
- Ranson, T., et al. Invariant V alpha 14+ NKT cells participate in the early response to enteric Listeria monocytogenes infection. J Immunol.
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