우리는 인간 면역결핍 바이러스(HIV) 1형에 감염되거나 감염되지 않은 살아있는 세포에서 세포 중심을 향해 이동하는 식체체의 속도를 측정하는 방법을 설명하며, 회전 디스크 컨포칼 형광 현미경을 사용하여 형광 감염 세포를 식별하고 명시야 현미경을 사용하여 식체를 검출합니다.
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이 논문에서
요약
초록
대식세포는 선천면역과 특이면역 사이의 교차로에서 중요한 역할을 하는 식세포세포입니다. 이들은 인간 면역결핍 바이러스(HIV)-1에 감염될 수 있으며, 세포병성 영향에 대한 내성 때문에 지속적인 바이러스 저장소로 간주될 수 있습니다. 또한 HIV에 감염된 대식세포는 기회감염성 질환의 발병에 기여하는 결함 있는 기능을 보인다.
HIV-1이 대식세포의 식세포 반응을 손상시키는 정확한 메커니즘은 알려져 있지 않습니다. 우리는 이전에 대식세포가 HIV-1에 감염되었을 때 다양한 미립자 물질의 흡수가 억제된다는 것을 보여주었습니다. 이 억제는 부분적일 뿐이었고 HIV에 감염된 대식세포 내에서 식체가 형성되었습니다. 따라서 우리는 이러한 식체의 운명을 분석하는 데 집중했습니다. 식생체 성숙은 이러한 구획이 세포 중심을 향한 이동을 동반하며, 여기서 리소좀과 융합하여 섭취된 물질의 분해를 담당하는 식작용소체를 생성합니다. 우리는 IgG-opsonized Sheep Red Blood Cells를 식세포작용의 표적으로 사용했습니다. 개별 HIV에 감염된 대식세포에서 식체의 구심 이동 속도를 측정하기 위해 명시야와 형광 컨포칼 현미경을 조합하여 사용했습니다. 우리는 핵을 향한 식체의 거리를 계산한 다음 식체의 속도를 계산하는 방법을 확립했습니다. HIV 감염된 세포는 GFP 표현 바이러스 덕분에 확인되었지만, 이 방법은 감염되지 않은 세포 또는 모든 유형의 감염 또는 치료에 적용할 수 있습니다.
서론
대식세포는 선천면역계와 항상성에 중요한 역할을 합니다. 이들은 식세포작용(phagocytosis) 1,2라는 과정을 통해 병원균과 파편을 내부화하고 제거하는 전문적인 식세포입니다. 미립자 물질이 삼켜진 후 형성되는 닫힌 구획인 phagosome은 내세포 구획과 함께 일련의 융합 및 분열 사건을 겪어 phagolysosome이라고 하는 분해 구획으로 이어집니다. 이 구획은 양성자 펌핑 v-ATPase의 획득으로 인해 산성 pH를 가지며 가수분해 효소를 포함하며 리소좀 관련 막 단백질(LAMP)이 풍부합니다. 식체(phagosome)의 성숙은 미세소관 3,4를 통해 세포 중심을 향하여 리소좀(lysosome)이 축적되는 핵주위 위치에 도달하는 이동을 동반합니다.
많은 병원체가 식체체 성숙을 가로채는 것으로 보고되었으며, 여기에는 자신이 서식하는 액포 환경을 변형시키는 세포 내 생활 방식을 가진 박테리아가 포함됩니다 5. 인체 면역결핍 바이러스(HIV)-1은 T 세포 외에도 대식세포를 표적으로 합니다. 대식세포는 T 세포와 달리 바이러스의 세포병성 영향에 내성이 있기 때문에 바이러스의 저장소로 간주될 수 있습니다. 또한 HIV-1에 감염된 대식세포는 식세포 기능에 결함이 있어 기회감염성 질환의 발병에 기여합니다. 특히, Salmonella Typhimurium ST313에 의해 유발되는 중증 침습성 비장티푸스성 살모넬라균 질환은 지난 30년 동안 HIV 6에 감염된 사하라 사막 이남 아프리카 아동 또는 성인에서 널리 퍼져 있습니다. HIV에 감염된 사람이 HIV에 감염되지 않은 사람보다 결핵에 걸릴 위험이 20배 이상 더 높은 것으로 추산됩니다.
이러한 모든 이유로, HIV에 감염된 대식세포의 식세포 결함의 기저에 있는 분자 메커니즘을 더 잘 정의하는 것이 중요합니다. 우리는 HIV에 감염된 대식세포에서 미립자 물질, 옵소니화된 입자, 박테리아 또는 곰팡이의 흡수가 억제된다는 것을 보여주었다 7. 이러한 억제가 부분적이라는 점을 감안하여, 우리는 HIV에 감염된 인간 대식세포에서 내재화된 식체(phagosome)의 운명을 분석하기 시작했다 8. phagosome maturation은 cell center로의 이동 및 lysosome과의 융합과 밀접하게 연결되어 있기 때문에 phagosomal maturation의 결함은 감염된 세포의 trafficking modality의 변형으로 인한 것일 수 있습니다. 여기에 설명된 방법은 IgG-SRBC(IgG-opsonized Sheep Red Blood Cells)를 수용체 매개 식세포작용, 특히 면역글로불린(FcR)의 Fc 부분에 대한 수용체를 표적으로 하는 모델로 사용합니다. 이러한 입자는 라텍스 비드보다 명시야(BF)에서 이미징하기가 더 쉬운데, 이는 세포외 및 세포 내 SRBC가 서로 다른 굴절 특성을 나타내기 때문입니다 9. HIV에 감염된 대식세포에서 핵을 향해 이동하는 식체의 속도를 측정하기 위해 형광 바이러스 10을 사용하고 여기에 설명된 간단한 수동 추적 방법을 설정했습니다. 이 방법은 고급 프로그래밍이 필요하지 않으며 단순히 ImageJ를 사용합니다. 부착 세포와 모든 유형의 입자 또는 병원체에 적용할 수 있으며, 명시야 현미경 또는 형광 이미징으로 시각화할 수 있습니다.
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프로토콜
이 프로토콜은 국내 및 국제 법규 및 지역 규정에 엄격한에 따라 수행되어야한다. 연구 목적으로 혈액을 기증 동의를 준 건강한 기증자로부터 혈액이 기관이 계약을 체결 한있는 수혈 센터에서 얻을 수있다. 인간의 혈액을 사용하는 경우 특별 보호는주의해야합니다. HIV-1과 실험은 3 또는 2 (BSL-3 또는 2) 연구소는 현지 법률에 따라 바이오 안전성 수준에서 수행해야합니다.
접착에 의한 밀도 구배 원심 분리 및 선택에 의해 인간 단핵구 유래 대 식세포 (hMDMs) 1. 준비
- 건강한 기증자 (9 ㎖)에서 신선한 혈액으로 시작합니다. 70 ml의 최종 용적을 수득 칼슘 및 마그네슘 2+없이 멸균 1X 인산 완충 생리 식염수 (PBS)와 신선한 혈액의 전체 부피를 희석하고 부드럽게 개의 50 ㎖ 원뿔형 튜브에 희석 된 혈액을 추가 (튜브 당 35 mL) 중 , 15 ml의 상단에eutral가 높은 각 튜브 이미 용액에 높은 질량 친수성 다당류 지형.
- 브레이크없이 20 ° C에서 20 분 동안 537 XG에 혈액을 원심 분리기는 모두 튜브. 그런 계면 흐린 셀 링에 포함 된 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC)를 수집하고 칼슘 및 마그네슘 2+없이 1X PBS 15 ml를 함유하는 새로운 50 ㎖ 튜브로 옮긴다.
- 원심 분리기 20 ° C에서 5 분 동안 218 XG에 세포와 칼슘 및 마그네슘없이 1X PBS 45 ml의에서 펠렛을 재현 탁 2+.
- 원심 분리는 20 ℃에서 5 분 동안 218 XG에서 세포는 칼슘 및 마그네슘 2+없이 1X PBS 10ml에 펠렛을 재현 탁하고 트리 판 블루에 1/200의 최종 희석액으로 희석하여 세포 수를 계산.
- 20 ° C에서 5 분 동안 218 XG에 세포를 원심 분리기 1640 배지 2 mM의 L- 글루타민 및 100 μg의 / ㎖로 보충 된 RPMI penic (로스웰 파크 메모리얼 연구소)에 펠렛을 재현 탁illin - 스트렙토 6 웰 - 플레이트의 각 웰에서 배지 2 ㎖에 웰 당 7 × 106 PBMC를가하도록.
- 2 시간 동안 5 % CO 2와 37 ° C에서 접시를 품어. 2 시간 후 단핵구는 플라스틱에 부착 된 것입니다.
- 갓 절연 단핵구가 hMDMs로 분화 배지를 흡인하고 보충 2ml의 hMDM 배지 (RPMI 1640, 태아 송아지 혈청 (FCS를 decomplemented 10 %), 2 mM L- 글루타민, 1 % 페니실린 - 스트렙토 마이신)로 교체 할 수 있도록하려면 재조합 인간 대 식세포 콜로니 자극 인자 10 ng를 / ml의 최종 농도 (RHM-CSF).
- 십일일 (그림 1)에 대한 5 % CO 2와 37 ° C에서 세포를 품어.
- 하루에 11에서 매체를 제거하고 잘 따라 차가운 hMDM 매체의 2 ㎖로 2 회 씻는다. 다음 차가운 1X PBS 1 ml의 각 웰을 2 회 반복한다.
- (2 mM의 ethylenediaminetetraacetatic 산 차가운 1X PBS 1 ml의 각 웰에 1 시간을 씻어 완전히 차별화 된 hMDMs를 분리하려면EDTA) 및 4 ℃에서 15 내지 60 분 동안 잘 당 2 mM의 EDTA와 차가운 1X PBS 2 ㎖에 세포를 배양한다.
참고 : 세포가 존재 분리하는 다른 방법 (예를 들면, 트립신 또는 트립신 같은 활동) 좋은 결과 (11)을 줄 수 있습니다. - (상하 웰 부드럽게 피펫 완료) 분리 후, 세포를 수집하고 차가운 hMDM 배지 10 ㎖를 함유하는 얼음에 50 ㎖ 튜브에 넣어.
- 원심 분리는 20 ℃에서 5 분 동안 218 XG에 세포를 차가운 hMDM 배지 10ml에 펠렛을 재현 탁하고 트리 판 블루로 1/20 희석하여 세포 수를 계산.
- 35mm 현미경 수준의 유리 바닥 접시 당 1 × 10 6 hMDMs에서 세포를 시드 및 1 일 5 % CO 2와 37 ° C에서 접시를 품어.
HIV-1 바이러스 성 주식의 2. 생산 및 정량화
참고 : NLR4.3 HIV-1 개그 - iGFP (녹색 형광 단백질) M. Schindl에서 R5-열대 봉투, 선물을 들고ER 10 마크로파지를 감염 실시간으로 감염된 세포를 참조하는 데 사용된다.
- 상업 형질 전환 시약을 사용하여 해당 프로 바이러스 DNA의 6 μg의 인간 배아 신장 293T 세포 (2 × 106에서 100mm 요리)의 형질 전환에 의해 바이러스 주식을 생성합니다.
- 세포 및 계수의 베타 갈 락토시다 착색 이어 바이러스 주식의 희석액을 사용하여 (HIV-1 LTR의 제어하에 베타 갈 락토시다 제 유전자를 함유) 헬라 TZM-BL 인디케이터 세포를 사용하여 바이러스 주식의 감염성 정량화 의 파란색 셀 (12)는.
HIV-1 hMDMs 3. 감염
- hMDMs (1.13 도금 세포)에 감염 (MOI)의 다양성에 hMDM 매체의 0.02-0.03 1 ml에 바이러스를 추가합니다. 우물 hMDM 매체의 1ml를 추가 제어하고 이일 (그림 1)에 대한 5 % CO 2와 37 ° C에서 요리를 부화합니다.
- 하루에 2 hMDM 의대로 세포를 씻어3 회 IUM과 접시 당 신선한 hMDM 매체의 1ml를 추가합니다. 육일 (그림 1)에 대한 5 % CO 2와 37 ° C에서 세포를 품어.
양 적혈구 4. 옵 소닌
- 접시 당 7 × 106 SRBCs의 제조를위한 4 분 동안 600 × g으로 원심 분리로 1X PBS에 0.1 % 소 혈청 알부민 (BSA)을 함유하는 용액 100 ㎕에 SRBCs 두 번 세척 하였다.
- SRBCs 5 μL 당 서브 응집 농도 토끼 IgG 형 SRBCs와 PBS / 0.1 % BSA 500 ㎕의 1X에서 세정 SRBCs을 재현 탁하고 실온에서 30 분 동안 회전 배양한다.
주 : 안티 SRBCs의 IgG 서브 응집 농도를 측정 96 웰 플레이트에 20 ㎕의 1 / 25,600로 1/50에서 (13.1 ㎎ / ㎖ 농도에서 스톡)의 IgG의 희석액을 제조 하였다. 각 웰에 20 μl를 2 × 10 6 SRBCs을 추가하고 몇 시간 동안 어두운 방에서 접시를 넣어. 서브 응집 농도 인직전 잘 응집 (IgG를 + SRBCs 네트워크를 형성)로 잘 희석. - 회전 후 4 분 동안 600 XG에서의 IgG-옵 소닌 - SRBCs을 원심 분리하고 4 분 동안 600 XG에서 원심 분리하여 1X PBS / BSA 0.1 % 100 ㎕로 씻는다.
- 2 mM의 L- 글루타민 및 1 % 페니실린 - 스트렙토 마이신 (1 ㎖ / 접시)이 보충 된 예비 가온 된 페놀 레드없는 RPMI 배지에서의 IgG - 옵 소닌-SRBCs를 재현 탁.
5. 라이브 셀 비디오 현미경 탐식의 분석
- 이러한 CO 2의 가습을위한 물이 병을 통과하여 37 ℃의 가열 챔버를 구비 한 회전 디스크 시스템과 같은 촛점 이미징 시스템을 사용한다.
- 식세포 분석의 시작 전에 37 ℃에서 현미경 스테이지를 가지고 실험 전에 가열 실 켜기. 현미경과 컴퓨터를 켜고, 및 이미징 소프트웨어를로드합니다.
- 이러한 주사 속도 MAGNIFICAT로서 촬상 설정을 최적화이온, 해상도 등은 60 ~ 120 분 사이에 매 분마다 필드 당 이미지 한 프레임에 적어도 하나의 셀을 가지고 있습니다.
참고 : 여기에, 샘플 63X 렌즈와 함께 60 분 동안 하나의 프레임 분마다 이미징된다. - 현미경 무대에 영상 접시를 놓습니다. 초점을 조정하고 위치는 필드에 하나의 전체 HIV-1에 감염된 대 식세포를 찾을 수 있습니다. 사용 된 영상 시스템 및 프로브에 따라 적합한 여기 / 방출 설정을 사용합니다. phagosomes을 관찰 밝은 필드 (BF) 채널을 포함합니다 (그림 1II). 투과광 노광 시간의 비율을 조정함으로써, 상이한 채널 이미지의 모양을 최적화한다.
참고 : 여기에, NLR4.3 HIV-1 개그 - iGFP 레이저의 20 % (그림 1I)와 노출 시간의 50 밀리 초와 491 nm의 레이저를 사용하여 흥분했다. - 이미징 접시를 제거하고 접시에 7 × 10 6 SRBCs / ㎖ (그림 1)에서 SRBC 현탁액 1 ㎖를 추가합니다.
- 500 XG에 원심 분리기RT에서 2 분, 식균 작용이 동기화 원심의 끝 시간을 기록하고, 상기 스테이지에 접시를 반환한다.
- 적어도 1 시간 동안 매분 - (통상 20 평면 0.3 ㎛의 스텝 거리, 셀의 두께에 걸쳐) Z-스택의 초점 캡처 GFP 및 BF 이미지를 최적화한다. 사용 된 영상 시스템의 기본 파일 형식으로 시간 경과 비디오를 저장합니다.
참고 : 여기에, 시간 경과 영화가 네이티브 형식으로 저장된 * .stk 파일.
시간 경과 영화 6. 분석
- 비디오 편집 메뉴 '앱'다운 비디오 편집 소프트웨어의 탭에 "검토 다중 차원 데이터"에 드롭을 클릭합니다.
- 파일을 열려면 다음 "디렉토리 선택"에서 "선택 자료 파일"을 클릭합니다. "데이터가 설정"상자에서 (.nd 형식)을 분석하고 '보기'를 클릭 인수를 선택합니다. 데이터는 열 경시 표로 표현라인에서 D의 Z-계획.
- A ~ Z 프로젝션 (그림 2, 왼쪽 패널)에 감염을 표현하려면 "파장"상자에 491 nm 파장을 선택하고 "모든면"와 "Z 투사"탭을 클릭합니다.
- (시간 순서 분석은 "파장"상자에 BF 파장을 선택하고 외부 SRBCs (그림 2, 빨간색 화살표), 내부 SRBCs (그림 2, 빨간색 원)과 핵을 구별하기 위해 Z 축에 최적의 평면을 선택합니다 그림 2, 파란색 원).
- 비디오 몽타주을 저장하려면, "선택 [X]의"탭을 누른 다음 "로드 이미지 (들)"을 클릭합니다. 마지막으로,이 .tif 형식으로로드 된 이미지를 저장하고 ImageJ에 소프트웨어에 다음을 엽니 다.
- 핵의 위치와 BF 채널에서 관찰 된 다른 phagosomes (그림 3)을 측정하기 위해 ImageJ에 소프트웨어를 플러그인 "수동 추적"를 사용합니다.
- 다우ImageJ에 웹 사이트의 "수동 추적"플러그인을 nload. ImageJ에에서 (그림 3, 1 단계 및 2) 플러그인 및 이미지 시퀀스를 분석 할 엽니 다.
- 이러한 인접 프레임 사이의 시간의 양을 나타낸다 "시간 간격", 픽셀 당 거리를 나타내는 "X / Y 보정"(그림 3, 3 단계)로 설정을 입력합니다.
주 : 63X 크게하고 6.45 X 6.45 μm의 (2)의 화소 크기를 갖는 카메라를 사용하기 때문에 여기서, 각 프레임 및 0.205 ㎛, X / Y의 교정과 1 분의 시간 간격으로 화상 시퀀스를 저장한다. - 추적을 시작하려면 (그림 3, 4 단계) "트랙 추가"를 클릭하고이 내면화 될 때 제 시간에 SRBC 센터를 클릭합니다. 다음 프레임이 자동으로 나타납니다.
- 시간 동안 다른 위치 (그림 3, 빨간색 상자에 6 단계)가 모든 프레임에서 SRBC 센터를 클릭하여 계속합니다.
- 그 중심을 클릭하여 모든 프레임에서의 위치를 가지고 핵을 추적하기 시작합니다. 다음 시간 SRBCs의 기능에서 다른 자신의 내면화의 (프레임)에서 하나 하나 (중심을 클릭하여) phagosomes를 추적 할 수 있습니다. 편의 BF 채널에 SRBC를 참조하려면, 추적 (그림 3, 5 단계) 동안 "밝기 및 명암 대비"창을 사용합니다.
- 각 SRBC 추적 사이에 새로운 트랙을 가지고 (그림 3, 4 단계) "트랙 추가"를 클릭합니다. 추적의 수는 두 번째 열에서 변경되며, 그 결과 테이블의 "트랙 N °"(도 3, 단계 6).
- 분석의 다음 단계를 계속하기 위해 스프레드 시트의 데이터를 저장합니다.
- (핵 및 SRBCs의 국제화 후 첫 5 분 동안 phagosomes의 속도를 향해 SRBCs를 포함하는 phagosomes의 이동 거리를 계산하기 위해 인터넷을 스프레드 시트 소프트웨어를 사용하여gure 4).
- 스프레드 시트 테이블과 새 스프레드 시트 파일을 엽니 다. 이 새로운 다음 매개 변수 전용 파일, 시간, x 축에 전송하고 핵 및 모든 SRBCs (그림 4A)의 좌표 Y-.
- , 그들의 좌표 SRBCs과 핵 사이의 거리를 계산 XY 좌표 평면 (그림 4B)에서 핵 및 SRBC을 고려합니다.
주 : 두 점 사이의 거리를 연결 경로의 길이이다. 평면에서 SRBC과 핵 사이의 거리는 피타고라스의 정리에 의해 주어진다.- C (핵과 SRBC 사이의 거리) 및 빗변의 길이를 나타내고, (B) 다른 두 변의 길이를 나타내는 경우, 피타고라스 식은 피타고라스 정리를 표현 :
주 : 동시에, 직교에서 수평 거리A는 (X 핵 -x SRBC)는 수직 거리 (B)는 (SRBC -y Y 핵)이다. - 따라서, 핵 및 SRBC (도 4a, 퍼플 박스)에 의해 사이의 거리를 계산한다 :
주 : μm의의 거리를 갖고, X / Y 교정하여 픽셀 단위로 획득 된 거리 값을 곱한다. 여기서, X / Y의 교정은 0.205 μm의 것이다. - 각 시간에서, 핵 초기 위치 (도 4C)에 SRBC 사이의 거리를 뺀다.
- 처음 5 분 동안 측정 시간에 대하여 플롯. 플롯에 선형 트렌드 라인 (그림 5A)를 적용하고 SRBC 국제화 후 첫 5 분 동안 핵을 향해 phagosome 속도를 나타내는 선형 트렌드 라인의 기울기를 결정한다.
- 평균 오차 통계를 계산하는 데이터를 대조속도 값을 적절한 소프트웨어 (도 5B)를 사용하여 적절한 형태로 이들을 플롯 및.
- C (핵과 SRBC 사이의 거리) 및 빗변의 길이를 나타내고, (B) 다른 두 변의 길이를 나타내는 경우, 피타고라스 식은 피타고라스 정리를 표현 :
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결과
HIV-1 감염과 감염되지 않은 hMDMs 의해 식세포 작용의 FcR 매개 초상권 타겟으로의 IgG - 옵 소닌 SRBCs (도 1)를 사용하여 여기에서 설명된다. 이 프로토콜의 중요한 단계는 hMDMs의 준비 및 HIV-1 감염이다. 실제로, 차별화 된 대 식세포의 수율과 품질은 도너 사이 변화뿐만 아니라 10~40% 범위의 효율성과 감염율. 또한, IgG의-옵 소닌 - SRBCs의 준비는 이것이 그들의 인식을 유도하고 파편으로 대신 FcRγ 쇄 매개 식균 작용에 의해 통풍 관 수 있기 때문에, 적혈구의 손상을 방지하는 것이 중요하다. 최적의 옵 소닌은 효율적으로 식균 작용을 보장합니다.
HIV에 감염된 대 식세포 거주 Phagosome 운동은 BSL -3- 실험실 회전 디스크 공 초점 현미경에 BF 채널을 실시간으로 분석한다....
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토론
이 기술은 몇 가지 중요한 단계가 있습니다. 감염의 백분율 도너 의존하기 때문에 우선, HIV-1에 의한 hMDMs의 제조 및 감염은 매우 중요하다. 잠재적으로 생체 내에서 바이러스에 의해 발생하는 대 식세포의 상태가 아니라 지금까지 특징되지 않았기 때문에 참고로, 우리는 이전에 감염 체외에서 편광되지 않은 대 식세포를 사용하기로 결정했습니다. 우리는 대 식세포는도없고 M1 M2임을 나타내는 여러 표면 마커의 발현을 확인하고, CD4 및 CCR5의 발현을 확인 하였다. 감염 속도는 변수이며, 10 ~ 40 %, 그리고 때로는 이하로 다양합니다. 이 현미경 하에서 HIV-1 감염의 형광 hMDM를 찾는 것은 어려울 수있다 이유 가변 감염률이다. 또한, 원심 분리 공정 후에 즉시 HIV-1 감염 세포를 발견하는 데 필요한 시간도 취득 개시까지의 지연을 초래할 수있다. 식균 작용은 synchronizatio없이 개시 될 수있다바인딩 및 원심 분리에 의해 생성 된 흡수 n은. 그러나이 옵션은 세포에 도...
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공개 사항
저자는 공개할 것이 없습니다.
감사의 글
원고를 읽어주신 Jamil Jubrail 박사님께 감사드립니다. 이 연구는 CNRS, Inserm, Université Paris Descartes, Agence Nationale de la Recherche (2011 BSV3 025 02), Fondation pour la Recherche Médicale (FRM DEQ20130326518 GLB 박사 펠로우십 포함) 및 Agence Nationale de Recherche sur le SIDA et les hépatites virales (ANRS, CD에 대한 박사 후 펠로우십 포함)의 보조금으로 지원되었습니다. A. Dumas는 Université Paris Descartes와 Sidaction의 박사 펠로우십의 지원을 받았습니다.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| Falcon 100mm TC 처리 세포 배양 접시 | Corning | 353003 | 바이러스 생산용 |
| 유리 바닥 접시 35mm 코팅되지 않은 1.5 | MatTek corporation | P35G-1.5-14-C | 케이스 인수용 |
| Falcon 조직 배양 플레이트 6-well | Thermo Fischer Scientific | Corning. Inc. 353934 | 인간 단핵구 유래 대식세포용 |
| Ficoll-Plaque PLUS | Dominique Dutscher | 17-1440-03 | 밀도 원심분리를 위한 용액 내 중성, 고도로 분지화, 고질량, 친수성 다당류 |
| DPBS, 칼슘 없음, 마그네슘 | 없음 Thermo Fischer Scientific | 14190-094 | RT |
| Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) 1x, liquid (High Glucose) | GIBCO, Molecular probes | 31966-021 | 4°C에서 보존; C ; HEK 세포 배양 |
| RPMI 1640 배지 GLUTAMAX | 보충 생명 기술 | 61870-010 | 4 °에서 보존; C; hMDM 문화 |
| Fœ 탈 카프 세럼 (FCS) | 유로바이오 | CVFSVF0001 | -20 °에서 보존; C ; decomplemented |
| 페니실린-스트렙토마이신(10,000 U/ml) | Thermo Fischer Scientific | 15140-122 | -20 °에서 보존; C ; hMDM 배양 |
| RPMI 1640 매체, 페놀 레드 없음 (10x 500 ml) | Life technologies | 11835-105 | Warm in 37 ° 사용 전 C 수조; 식세포작용 분석법: |
| FuGENE6 Transfection 시약 | Promega | E2692 | 4°C 보존; C ; 바이러스 생산을 위해 |
| 양 적혈구 (SRBC) | Eurobio | DSGMTN00-0Q | 4 °에서 Alsever 버퍼에 보존; C 사용 전 |
| 안티 양 적혈구 IgG | MP Biomedicals | 55806 | 4 °에서 보존; C |
| 소 혈청 알부민 열 충격 분율, pH 7, ≥ 98% | 시그마 | A7906 | -20 °에서 보존; C |
| 도립 현미경 DMI600 | Leica | ||
| Confocal Spinning Disk Unit CSU-X1M1 | 요코가와 | ||
| 491 nm, 50 mW, 레이저 | , COBOLT, CALYPSO, | ||
| HCX, PL, APO, CS, Objectif | Leica | 객관렌즈 ; 배율 100X ; 개구수 1.40 ; 이머젼 오일 | |
| CoolSnap HQ2 (FireWire) 카메라 | 포토메트릭 | 픽셀 크기 6.45 &마이크로; m x 6.45 &마이크로; m ; 정의 1,392 x 1,040 ; 14비트 | |
| Metamorph 7.7.5 소프트웨어로 | 분자 장치 | 현미경 제어용 | |
| GraphPad Prism 소프트웨어 | 통계 분석용 |
참고문헌
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