이 백서에서는 TMEV에 감염된 마우스의 진행성 신경 장애를 측정하는 데 사용되는 Rotarod 성능 테스트에 대한 최적화된 테스트 프로토콜을 제시합니다.
이 콘텐츠를 보려면 JoVE 구독이 필요합니다. 로그인하거나 오늘 무료 평가판을 시작하세요.
이 논문에서
요약
초록
Theiler's Murine Encephalomyelitis Virus(TMEV)에 뇌내 감염이 발생한 후, 감수성이 있는 SJL 마우스는 다발성 경화증(MS)의 진행성 형태와 유사한 임상 특징을 가진 만성 진행성 탈수초성 질환을 발병합니다. 이 쥐는 운동 및 감각 기능의 상실을 동반한 진행성 장애를 보이며, 이는 여러 장치 및 프로토콜로 평가할 수 있습니다. 그 중 Rotarod 성능 테스트는 매우 일반적인 동작 테스트로 객관적인 측정을 제공한다는 장점이 있지만 간단하고 간단하다고 가정하여 자주 사용됩니다. 매우 주관적인 일부 MS 모델에 사용되는 시각적 채점 시스템과 달리, Rotarod 테스트는 객관적이고 측정 가능한 연속 변수(즉, 시간)를 생성하여 거의 완벽한 평가자 간 일치를 가능하게 합니다. 그러나 실험실 간 신뢰성은 다양한 테스트 매개변수가 복제되는 경우에만 달성됩니다. 이 원고에서는 막대의 크기, 속도 및 가속도와 같은 특정 테스트 매개변수에 대한 권장 사항; 동물에게 주어진 훈련의 양; 및 데이터 처리는 Rotarod 테스트를 위해 제공됩니다.
서론
Theiler의 쥐 뇌척수염 바이러스 (TMEV)는 지속적으로 쥐의 중추 신경계 (CNS)를 감염시키는 neurotropic 단일 가닥 RNA 바이러스이다. 민감한 쥐에서 TMEV 감염은 TMEV에 의한 탈수 초성 질환 (TMEV - IDD)로 알려진 면역 매개 만성 프로그레시브 탈수 초성 질환을 발생합니다. 쥐의 실험 감염은 다발성 경화증 (MS)의 진보적 인 형태에서 본 그 유사한 질병 과정을합니다. 급성기와 만성기 : TMEV - IDD는 두 가지 단계를 특징으로한다. 급성 단계는 가벼운, 일반적으로 무증상 뇌염 1,2입니다. 두 번째, 만성 단계는 감염 후 약 한달 시작, 탈수 초화, 염증, 및 축삭 손상 1,2 특징으로하는 천천히 진행 장애로 구성되어 있습니다. 마우스에서 관찰 약점은 경직하고, 때때로 심한 토닉 경련과 관련이있다.
현재 더 medicatio이 없기 때문에NS 환자에서 진행성 장애를 개선하는 연구는 특히 질병의 진행에 질병 변경 약물의 효과를 모니터링하기위한 최적의 동물 모델을 나타내는 TMEV-IDD 의해 끌린다. 그러나, 마우스에서뿐만 아니라 MS 환자, 장애의 진행의 모니터링은 장시간에 걸쳐 연속적인 임상 적 관찰이 필요하다. 마우스에서, 장애의 진행 장기 모니터링은 로....
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
프로토콜
모든 동물의 작업은 다트머스 대학에서 의학 이젤 학교에서 기관 동물 관리 및 사용위원회 (IACUC)에 의해 검토 및 승인 프로토콜을 사용합니다.
1. 마우스 모델
- TMEV 유발 탈수 초성 질환의 유도
- 편안한 작업 공간으로 랙에서 4 ~ 6 주 된 여성 SJL / JHan 마우스가 들어있는 새장을 이동합니다. 임상 및 조직 학적 질환의 개별 평가를 할 수 있도록 (귀 태그 또는 귀 펀치 예) 쥐를 표시합니다.
- 29 게이지 인슐린 주사기와 바늘로 PBS에서, TMEV 감염 재고 (PFU 2 × 10 6 플라크 형성 단위)의 30 μl를 그립니다.
- 마취 가스 시스템을 준비 : 절차의 지속 기간에 대한 산소 및 이소 플루 란 충분한 양의 존재를 보장하기 위해 시스템을 확인한다.
- / 분 1 L에 유량계를 켭니다. 유도 챔버에 동물을 배치하고 상부를 밀봉. 버지니아 켭니다3.5 %에 porizer 및 기댄 때까지 동물을 모니터링 할 수 있습니다.
- 챔버에서 동물을 제거하고 적절한 마취를 보장하기 위해 발바닥을 곤란하게하여 마우스를 테스트합니다. 강한 핀치에 대한 응답의 부족은 충....
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
결과
이 대표 실험의 목적은 다니엘스 (DA) 변형 및 TMEV의 콩 변형에 의해 유도 된 신경 학적 장애를 비교하는 것이다. 본 연구의 목적 32 여성 SJL 마우스의 그룹 (N = 16), TMEV 두개골 내에 검찰 균주 (N = 16) 또는 빈 균주를 감염시키고, 임상 적 징후가 시간이 지남에 따라 관찰 하였다. 마우스 (20)의 또 다른 그룹은 가짜 처리 하였다 (즉, 식염수의 두개골 내에 주입) 및 건강한 대조군 역임.
로타로드 (rotarod) 성능 테스트 TMEV 감염된 쥐와 허위 대조군 만성 질병의 진행을 평가하기 위해 사용되었다. 마우스는 개별적으로 귀 표시 전에 TMEV의 주입 후 125일 지속 실제 시험 프로토콜에 주에 매일 적응 프로토콜을 실시했다. 각 시험 날, 실행 시간, TI의 길이로 정의나 마우스,로드에 머물렀다 그 날의.......
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
토론
몇 가지 한계에도 불구하고, 로타로드 (rotarod) 성능 테스트는 운동 기능 장애와 TMEV-IDD뿐만 아니라 마우스 장애의 진행에 대한 약리학 적 개입의 영향을 평가하기위한 중요한 도구를 나타낸다.
로타로드 (rotarod) 시험 제 11 설치류에서 신경 학적 결손을 측정하는 도구로써 1957에 기술되었다. 설치류는 회전 속도가 증가함에 따라, 회전 막대에 걸어, 땅에 떨어지는 피하려고합니다. 떨어 지연 기록 운동 기능에 대한 정량 종점으로서 사용된다 : 동물이 더 신경 손상은 빨리 그들이로드 떨어지지. 전통적인 시각 채점 시스템을 통해이 시험의 분명한 장점은 장애의 진행 3 요법 및 실험 절차의 효과를 정량화하는 통계 목적으로 사용될 수있는 대물 변수를 생성하는 것이다. 예를 들면 바로 잡고 refle 같은 시각적 채점 시스템X 시험 마우스에서 전위의 능력을 평가하기위한 간단하고 신속한 테스트로서 바람직 할 수있다. 그러나, 이들.......
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
공개 사항
저자는 공개할 것이 없습니다.
감사의 글
저자는 이러한 연구에 사용된 쥐를 전문적으로 관리해 준 다트머스 대학의 CCMR(Center for Comparative Medicine and Research) 직원에게 감사를 표합니다. 저자는 또한 Emily Clough의 탁월한 행정적 지원을 인정합니다.
....액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 생쥐 SJL/JCrHsd 4-6주 된 | Envigo | #052 | |
| TMEV 바이러스 재고 | |||
| Isoflurane 기화기 | Harvard Apparatus | #340471 | |
| 인슐린 주사기 U-100 29 g x 0.5 cc | BD# | 328203 | |
| Rotamex-5 4 Lane Rota-Rod for Mice with RS-232 and Software | Columbus Instruments | #0890M |
참고문헌
- Lipton, H. L. Theiler's virus infection in mice: an unusual biphasic disease process leading to demyelination. Infect Immun. 11, 1147-1155 (1975).
- Pachner, A. R. A Primer of Neuroimmunological Disease. , Springer. New York. (2012).
- Rustay, N. R., Wahlsten, D., Crabbe, ....
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
재인쇄 및 허가
