방법 논문

그룹 B의 쥐 모델 연쇄상 구균 질 식민

DOI:

10.3791/54708

⸱

2016년 11월 16일

 , 
1Department of Pediatrics, Division of Host-Microbe Systems & Therapeutics, University of California San Diego School of Medicine, 2Department of Biology and Center for Microbial Sciences, San Diego State University

이 논문에서

요약

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이 프로토콜의 목적은 쥐 모델에서 인간의 B 군 연쇄상 구균 (GBS) 질 식민지를 모방하는 것입니다. 이 방법은 숙주의 면역 반응 및 GBS 질 지속성에 기여 박테리아 인자를 조사 할뿐 아니라 치료 전략을 시험하기 위해 사용될 수있다.

초록

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성인의 30 % - 연쇄상 구균 agalactiae (그룹 B 연쇄상 구균, GBS)는 인간의 위장관 10의 질 기관의 그람 양성, 증상이 식민지 개척자이다. 면역 손상 개인을 포함한 신생아, 임산부, 노인에서는 GBS 패혈증, 관절염, 폐렴과 뇌막염을 일으키는 원인이 침입 병원체로 전환 할 수 있습니다. GBS가 신생아의 선도적 인 세균성 병원체이기 때문에, 현재의 예방은 GBS 질 식민지와 GBS 양성 어머니의 후속 산기 항생제 치료를 위해 임신 후기 검사로 구성되어 있습니다. 무거운 GBS 질 부담은 신생아 질환과 식민지 모두의 위험 요인이다. 불행하게도, 거의 호스트 및 홍보 또는 질 식민지 GBS을 허용 박테리아 요인에 대한 알려져있다. 이 프로토콜은 세균 LOA를 결정하는 하나의 β-에스트라 전처리 매일 샘플링을 이용한 영구 GBS 질 집락을 설정하기위한 기술을 설명디. 그것은 더 자세한 방법은 추가 치료 또는 관심의 시약을 관리하고 질 세척 유체 및 생식 기관의 조직을 수집 할 수 있습니다. 이 마우스 모델 임신 중 모체의 질 집락을 제어하고 취약한 신생아로의 전송을 방지하기 위해 잠재적 인 치료 표적으로 이어질 질 환경 내 GBS 호스트 상호 작용의 이해를 촉진한다. 또한 여성의 질 기관에서 일반 세균 - 호스트 상호 작용에 대한 우리의 이해를 높이기 위해 관심이 될 것입니다.

서론

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연쇄상 구균 agalactiae, B 군 연쇄상 구균 (GBS)는 자주 장과 건강한 성인의 비뇨 기관에서 분리 된 캡슐, 그람 양성 세균이다. 1970 년대에, GBS는 매년 신생아 질환의 7,000의 경우 1, 감염성 신생아 사망의 주요 에이전트로 나타났다. 조기 발병 GBS 질환 (EOD)는 폐렴이나 호흡 곤란으로 발생하는 첫 번째 시간, 삶의 일에 발생하고, 종종 후기 발병 질환 (LOD) 반면, 패혈증으로 발전 몇 달 후에 계속된다 자주 균혈증과 선물 2 뇌막염으로 진행한다. 2002 년 질병 통제 예방 센터 (CDC)는 GBS 양성 산모 1 늦은 임신과 분만 예방 적 항생제 (IAP)에서 GBS 질 식민지에 대한 보편적 인 검사를 권장합니다. 매년 IAP로 인해 미국에서 약 1,000가지 경우에 조기 발병 질환의 감소에도 불구하고,GBS는 조기 발병 신생아 패혈증의 주요 원인 남아 있고, 후기 발병 발생 1 영향을받지 남아있다. 자궁의 여부, 노동 동안, 또는 후기 발병의 경우, GBS에 신생아 노출 수막염, 높은 규제 혈액 -의 교차의 경우, 호스트 환경과 장벽, 면역 회피의 숫자를 통해 생존, 횡단이 필요하며, 뇌 장벽이. 신생아 내에서 이러한 악성....

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프로토콜

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모든 동물의 작업은 샌디에고 주립 대학의 실험실 동물 관리 사무소의 승인을 받아 수의학 기준에 따라 실시 하였다. 암컷 마우스 연령 8-16주이 방법의 개발에 사용 하였다.

β-에스트라 디올의 1. 준비 및 복강 내 주사

  1. 적절한 개인 보호 장비 (PPE)를 착용하고있는 동안 종이의 무게에 β-에스트라 디올 (0.5 밀리그램 / 마우스)를 밖으로 측정한다. 주의 :-β 에스트라 디올은 피부 및 점막 표면을 통해 흡수 될 수있다.
  2. 모든 덩어리를 제거하고, β-에스트라 디올이 미세 분말 될 때까지 15 ML 원뿔 튜브와 소용돌이에 β-에스트라 디올을 전송합니다. 10 ML의 주사기에 참기름 (100 μL / 마우스)를 그립니다. 0.45 μm의 필터를 사용하여 β-에스트라 디올을 함유하는 15 ml의 원추형 튜브에 주사기 필터 참기름. β-에스트라 디올은 참기름에 균일 한 현탁액이 될 때까지 15 ML 원뿔 튜브를 소용돌이.
  3. β-ES를 그리기새로운 10 ML의 주사기에 tradiol 서스펜션. 18 G, 1 인으로. 바늘, 나누어지는 1 ㎖의 투베르쿨린 주사기로 현탁액을 100 ㎕. 각 마우스에 대해 하나의 주사기를 준비합니다. 새로운 멸균 26 G, ½ 인을 배치합니다. 각 투베르쿨린 주사기 바....

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결과

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이 모델의 개발 과정에서 여러 관찰 GBS 질 정착 기간에 영향을주는 요인에 관한 하였다. 접종에 미치는 영향 GBS 세균의 지속성에 얼마나 발정 단계를 결정하려면, 마우스는 질 세척 유체를 통해 접종의 날에 개최되었다. 도 1에 의해 결정된대로 마우스 발정주기의 네 단계를 도시 습식 마운트 질 세정액, 잘 확립 된 방법 (29). 마우스는 초기 단계에 기초하여 그룹으로 분할하고, GBS 지속성 질 보라고 통해 시간 동안 모니터링 하였다. 발정 단계에서 접종 한 마우스는 발정의 다른 단계, 접종 시간 (그림 2)에서 diestrus에서 특히보다 더 GBS와 식민지가되었다. 이러한 결과에 기초하여, 현재의 모델에서, 마우스는 발정 단계로 동기화하기 전날 GBS로 접종-β 에스트라 디올로 처리된다.

생식 요로 감염의 다른 쥐 모델은 마우스가 외생 에스트라 디올 처리 (30, .......

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토론

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호스트의 컨텍스트 내의 호스트 및 다른 미생물 모두 GBS 상호 작용의 이해의 발전을 촉진하기 위해 동물 모델이 요구된다. 이 작품은 생쥐에서 GBS 질 식민지를 확립의 기술적 측면에 대해 설명합니다. 이 프로토콜은 박테리아를 접종하거나 접종을 두껍게, 질 미리 세척, 또는 첨가제 식민지 수 있도록 면봉 샘플, 면역 억제제를 수집하기 위해 마취제를 사용하지 않고 마우스의> 90 % 식민지를 달성한다. 또한,이 모델은 GBS 지속성의 길이와 세균 부담이 모두 겸손 간 실험적인 변화와 강력한 재현성을 보여줍니다. 이 연구에서 입증 대표 결과는 독립적 인 실험의 컴파일하고 미래의 실험 설계에 대한 참조해야한다; 그러나 GBS 균주 및 마우스 선에 걸쳐 직접 비교주의해야한다.

이 모델은 인간의 colonizati을 모방쥐의 점막 질 GBS의 식민지에서의 생식 기관에 제한 될 것으로 보인다. 자궁 경부와 자궁에 승천 여러 GBS 25 균주 관찰되었지만, 마우스.......

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공개 사항

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저자는 공개 아무것도 없어.

감사의 글

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축산을 지원해 주신 샌디에이고 주립 대학의 사육장 관리자와 직원에게 감사드립니다. 이 과정에서 K.A.P.는 ARCS 장학금과 이나모리 재단의 펠로우십의 지원을 받았습니다. K.S.D.는 미국 국립보건원(National Institutes of Health)의 R01 보조금(NS051247)으로 지원됩니다.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
참기름 시그마 알드리치S3547-250ML
&베타;-에스트라디올 시그마 알드리치E8875-1G주의: 적절한 개인보호구를 착용하십시오. &베타;-에스트라디올은 피부와 점막 표면을 통해 흡수될 수 있습니다. 
200 &뮤; L 젤 로딩 피펫 팁 USA Scientific1252-0610
요도 생식기, 멸균, 칼슘 알긴산 면봉Puritan25-801 A 50
CHROMagar StrepBDRG InternationalSB282
Todd Hewitt BrothHardy Diagnostics7161C
18 G, 1.5 인치 바늘BD305199
26 G, 0.5 인치 바늘BD305111
10 ml 주사기BD309604
1 ml 주사기BD309659
0.45 μ m PVDF 주사기 필터Whatman6900-2504
Dulbecco의 인산염 완충 염 용액 1xCorning21-031-CV

참고문헌

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Verani, J. R., McGee, L., Schrag, S. J. Prevention of perinatal group B streptococcal disease--revised guidelines from CDC. MMWR. Recomm. Rep. 59 (RR-10), 1-36 (2010).
  2. Maisey, H. C., Doran, K. S., Nizet, V. Recent advances in understan....

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