우리는 치수의 상처 치유 및 생체 수복 상아질 형성 평가 마우스 치아에 직접 캐핑 펄프를 행하는 단계적인 방법을 설명한다.
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이 논문에서
요약
초록
치과 치수는 법랑질과 상아질로 완전히 보호되는 치아의 중요한 기관입니다. 충치성 또는 의인성 부상으로 인해 치수가 노출된 경우, 치수의 상처 치유를 촉진하기 위해 생체 적합성 물질로 덮는 경우가 많습니다. 궁극적인 목표는 "생물학적 밀봉"으로 기능하고 근본적인 치수조직을 보호하는 물리적 장벽인 회복 상아질을 재생하는 것입니다. 이 직접 치수 캡핑 절차는 치과에서 오랫동안 사용되어 왔지만, 치수 상처 치유 및 회복 상아질 형성의 기본 분자 메커니즘은 여전히 잘 이해되지 않았습니다. 회복성 상아질을 유도하기 위해 펄프 캡핑은 대형 동물에서 실험적으로 수행되었지만 생쥐에서는 그렇지 않았는데, 아마도 작은 크기와 그에 따른 기술적 어려움 때문일 것입니다. 여기에서는 Class-I-like cavity의 준비, pulp-capping 재료의 배치 및 치과 복합재를 사용한 수복 절차를 포함하여 마우스에서 펄프 캡핑 절차를 수행하는 상세한 단계별 방법을 제시합니다. 당사의 펄프 캡핑 마우스 모델은 연구 커뮤니티에서 널리 사용 가능한 형질전환 또는 녹아웃 마우스를 사용할 수 있도록 함으로써 생체 내 회복 상아질의 맥락에서 치수 상처 치유의 기본 분자 메커니즘을 조사하는 데 중요한 역할을 할 것입니다.
서론
치아우식증은 가장 흔한 구강 질환 중 하나이며 거의 모든 개인에서 치열에 대한 외과적 개입의 주요 원인입니다1,2. 외과적 개입과 치아 수복의 예후는 적절한 치수 반응과 성공적인 상처 치유에 크게 좌우됩니다. 실제로, 법랑질과 상아질 깊숙이 침투하는 치아 우식은 종종 수산화칼슘(Ca(OH)2) 또는 미네랄 삼산화물 응집체(MTA)를 포함한 수경 칼슘-규산염 시멘트(HCSC)와 같은 치과 재료로 "덮인" 기본 치수 조직의 노출로 이어집니다. 이러한 치수 캡핑 절차의 궁극적인 목표는 근본적인 치수 조직을 보호하고 치아의 기대 수명과 전반적인 구강 건강을 증가시키는 "생물학적 밀봉" 역할을 하는 물리적 장벽인 회복 상아질을 재생하여 치수 상처 치유를 촉진하는 것입니다. 그러나 치수상 상처 치유 및 회복 상아질 형성의 기본 메커니즘은 완전히 이해되지 않았습니다.
생체 내에서 치수상 상처 치유 및 회복 상아질 형성의 메커니즘을 더 잘 이해하기 위해 이전에는 원숭이, 개, 돼지3-5를 포함한 여러 동물이 사용되었습니다. 그 중에서도 랫드는 다른 동물에 비해 상대적으로 크기가 작기 때문에 자주 사용되지만, 이빨은 기술적인 어려움 없이 직접 펄프 캡핑을 수행할 수 있을 만큼 충분히 ....
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프로토콜
마우스는 잭슨 연구소에서 구입하여 실험 동물 의학의 UCLA과 (DLAM)에서 병원균이없는 동식물 사육장에 보관 하였다. 실험은 교육감의 동물 연구위원회 (ARC 번호 2016-037)에서 승인 된 기관의 지침에 따라 수행 하였다.
1. 마우스 마취
- 8 주 된 암컷 C57 / BL6 마우스를 사용하여 (n = 3)를 나타낸다.
- 케타민 (마우스 체중의 80 ~ 120 ㎎ / ㎏) / 자일 라진 (5 밀리그램 / 마우스 체중 kg) 솔루션을 사용하여 마우스를 마취 및 10 ㎖ / kg의 용량으로 복강 내 (IP) 투여.
- 케타민 준비 (80-120 ㎎ / ㎏) / 자일 라진 (5 ㎎ / ㎏) 용액 및 10 ㎖ / kg의 용량으로 복강 내 (IP)을 투여.
- 쥐가 완전히 발가락 핀치를 수행하여 마취되어 있는지 확인합니다.
2. 펄프 캐핑 절차
- 마우스의 입에서 입 홀더를 배치합니다.
- 그는 그 같은 테이블에 입 홀더를 고정광고가 위쪽으로 직면하고있다.
- 첫 번째 상악 대구치가 완전히 볼 수 있도록 입의 상단에있는 현미경 (10X)를 놓습니다.
- 펄프 투명 상아질 통해 보일 때까지 20 ....
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결과
여기서는 마우스 치아 캐핑 펄프 수행 단계별 과정을 나타내었다. 마우스에서 캐핑 펄프의 중요한 측면 중 하나는 적절한 장치를 가지고있다. 이와 관련하여, 10 배의 전력 배율 현미경을 갖는 것이 필수적 (도 1a)이다. 치아의 클래스 I-같은 준비를 만들려면, 우리는 20 만 rpm으로 (그림 1B)에서 전기 고속 핸드 피스의 ¼ 라운드 버를 사용했다. 대안 적으로, 압축 공기를 사용하는 것을 포함하여 다른 엔진은, 치아를 제조 할 수있다.
그림 2A-2E에서, 펄프 캡을 수행하기위한 대표적인 단계가 표시됩니다. 클래스-I-같은 준비 (그림 2B)를 수행 하였다. 물 스프레이 절차를 수행하는 동안 쥐를 익사 수 있기 때문에, 그것의 사용은 .......
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토론
현재 치과 펄프 줄기 세포 (DPSCs) (13)의 치성 분화에 치과 재료, 비계, 또는 성장 인자의 생체 내 효과를 검증 할 수 여러 가지 실험 모델이있다. 이 모델은 신장 캡슐 기관에 DPSCs의 자궁외자가 이식, 또는 비계 14, 15와 면역 저하 마우스로 DPSCs의 피하 이식을 포함한다. 그러나, 이들 방법은 DPSCs 그들의 원성 효과는 동소 펄프 환경에서 수행되지 않도록 제한된다. 한편, 치아의 펄프 펄프 캡핑 절차에 동소 이식 큰 동물 (16, 17)에 사용된다. 이러한 모델은 동소 환경 원성 잠재력을 평가하는데 유용한 있지만, 이들 모델의 사용은 펄프 상처 치유 및 수복 상아질 형성 제한된 기계적 통찰력을 제공하는 자연에서 주로 관찰된다.
본 논문에서는 생쥐에서 펄프 - 캡핑을 수행 할 수있는 구체적인 방법을 제시한다. 이 단계별 절차는 스캔 μCT와 분석, 펄프 캐핑 물질을 배.......
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공개 사항
저자는 공개할 것이 없습니다.
감사의 글
이 연구는 NIDCR / NIH에서 R01DE023348 (RHK)와 캘리포니아 대학 로스 앤젤레스 부문의 학술 상원의 연구에 이사회에서 학부 연구 그랜트 (RHK)에 의해 지원되었다.
....액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| BM-LED 스테레오 현미경 | MEIJI 테크노 | 현미경 | |
| 옵티마 MCX-LED | Bien Air Dental | 1700588-001 | 일렉트릭 모터 엔진 |
| 이소 플루란 | Henry schein 동물 건강 | NDC 11695-0500-2 | |
| 1/4 라운드 버 | Brasseler | 001092T0 | |
| Endodontic K-file | Roydent | 98947 | |
| ProRoot MTA | Dentsply | PROROOT5W | MTA |
| 종이 포인트 | Henry schein | 100-3941 | |
| 울트라 에치 | Ultradent 제품 Inc. | 인산 에칭액 | |
| OptiBond SoloPlus | Kerr | 29669 | 접착제 |
| Coltolux LED | Coltene/whaledent Inc. | C7970100115 | 경화광 유닛 |
| 특성화 틴트 | Bisco | T-14012 | 유동 복합재 |
| Skyscan | Breuker | 1275 | uCT 스캐너 |
| Microm | Thermo | HM355S | Microtome |
| Hematoxyline-1 | Thermo Scientific | 7221 | |
| Eosin-Y | Thermo Scientific | 7111 | |
| Cytoseal 60 | Thermo Scientific | 8310-16 | 마운팅 솔루션 |
참고문헌
- Dye, B., Thornton-Evans, G., Li, X., Iafolla, T. Dental caries and tooth loss in adults in the United States, 2011-2012. NCHS Data Brief. (197), 197(2015).
- Bagramian, R. A., Garcia-Godoy, F., Volpe, A. R. The global increase in dental caries. A pending public health crisis. Am J Dent<....
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재인쇄 및 허가
