CApillary FEeder (CAFE) 분석은 음식 섭취의 기저에 있는 메커니즘을 조사하기 위한 간단하고 예산 친화적이며 매우 신뢰할 수 있는 방법입니다. 다재다능한 유전자 모델 유기체인 Drosophila melanogaster와 함께 사용되는 이 제품은 음식 섭취의 조절 메커니즘에 대한 새로운 통찰력을 얻을 수 있는 강력한 수단을 제공합니다.
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CApillary FEeder (CAFE) 분석은 음식 섭취의 기저에 있는 메커니즘을 조사하기 위한 간단하고 예산 친화적이며 매우 신뢰할 수 있는 방법입니다. 다재다능한 유전자 모델 유기체인 Drosophila melanogaster와 함께 사용되는 이 제품은 음식 섭취의 조절 메커니즘에 대한 새로운 통찰력을 얻을 수 있는 강력한 수단을 제공합니다.
대부분의 동물에게 먹이는 것은 생존을 확보하는 데 필수적인 행동이며 발달, 운동, 건강 및 번식에 영향을 미칩니다. 따라서 올바른 종류와 양의 음식을 섭취하는 것은 삶의 질에 큰 영향을 미칩니다. 섭식 행동에 대한 연구는 실제 섭식을 보장하는 기본 과정에 초점을 맞추고 내부 에너지 항상성을 조절하는 요인의 역할과 의사 결정의 뉴런 기반을 밝힙니다. 모델 유기체인 Drosophila melanogaster는 단일 뉴런을 라벨링하고 조작하기 위한 유전적으로 추적 가능한 다양한 도구를 사용하여 뉴런 네트워크를 매핑하고 음식 섭취 조절과 관련된 분자 신호 캐스케이드를 식별할 수 있습니다. 이 보고서는 CApillary FEeder 분석법(CAFE)을 시연하고 몇 시간에서 며칠에 이르는 기간 동안 파리 그룹의 음식 섭취량을 측정하는 방법을 보여줍니다. 이 사용하기 쉬운 분석은 파리가 자유롭게 접근하고 먹을 수 있는 액체 음식으로 채워진 유리 모세관으로 구성되어 있습니다. 분석에서 식품 소비량은 간단한 측정 도구를 사용하여 정확하게 측정됩니다. 여기에서는 CAFE 분석의 설정부터 성공적인 실행까지의 방법을 단계별로 설명하고 통제된 조건에서 파리 그룹의 먹이 섭취량을 분석하기 위한 실용적인 예를 제공합니다. 독자는 분석의 가능한 제한 사항을 안내받고 D. melanogaster의 다른 공급 분석과 비교하여 이 방법의 장점과 단점을 평가합니다.
식사는 필수적이다; 그러나, 폭식증, 거식증 또는을 강요을 과식하는 일반적인 경향과 같은 섭식 장애의 결과로 음식 섭취의 규제 완화는 개인과 사회 1, 2, 3의 요금으로 제공됩니다. 본 연구의 목적은 음식 섭취의 조절 메커니즘을 밝히기 위해서 무질서 형성을 회피하기위한 전략을 제공하는 것이다. 포유 동물 유기체 모델을 사용하여 많은 연구 장애 4,5,6 먹는 회로 및 신호 시스템의 역할에 새로운 통찰력을 제공했다. 그럼에도 불구하고, 이러한 질환의 기초가되는 신경 세포 및 분자 기지에 대한 우리의 지식은 완전한에서 멀리 남아있다. 최근 몇 년 동안, 과일 초파리 melanogaster의이 metabolis의 규제에 기본 기계적인 통찰력을 탈피하기위한 가치있는 모델 시스템이되었다 비행m 7, 8, 9. 노랑 초파리의 모세관 공급 장치 (CAFE) 분석은 검정 파리 10, 11 Dethier에 의해 이전 작품에서 영감을 2007 년 모어 Benzer의 실험실에서 설립되었다. 카페 분석은 가능한 직접 초파리에서 음식 섭취를 측정하기 위해 만든. 이 행동 테스트 시스템에서, 파리는 유리 병 내부에 배치 그레이드 유리 모세관에서 제공하는 액체 음식을 먹고. 모세관 메 니스 커스의 감소는 증발 및 음식 소비를 통해 음식 용액의 손실을 나타낸다. 파리없이 튜브에 의해 증착 속도를 결정하는 것은 음식 섭취의 정확한 정량을 허용한다.
카페 분석은 초파리에서 먹이를 측정하는 데 사용되는 여러 행동 패러다임 중 하나이며 연구자들은 특정에 가장 적합한 하나를 선택해야문제. 다음과 같은 점을 고려해야 특정 분석법을 사용하도록 결정 : 제공된 식품의 성질; 공급 조건; 섭취 또는 영양소의 흡수 및 조사 식품 소비 식품에 대한 응답의 측정.
이 보고서에 설명 된대로 CAFE 분석은 직립 공급 조건에서 액체 음식 소스의 음식 섭취를 다음에 이상적이다. 또는 음식 섭취는 유리 병이나 접시에 색깔의 음식 소스에 비행 그룹에 대해 측정 할 수있다. 파리 정상적으로 죽거나 마취 먹이 섭취 후 염료의 양은 분석법 또는 염색 복부 육안으로 판정한다. 파리는 30 분 섭취 후 섭취 한 음식을 배설하기 시작, 따라서이 방법은 지속적으로 더 이상 공급의 분석을 위해 사용하기 어려운 13, 12 행동들.
반면 파리는 때 흡수 염료 그대로 유지된다방사성 트레이서들과 사용되며 동위 원소들의 소비 섬광 계수기 (14), (15)에서 획득된다. 플라이 소화 시스템에 의해 방사성 표지의 흡수는 장기적으로 음식 섭취 측정이 가능하게하지만, 때문에 비 흡수 및 배설 추적 분자의 소비의 과소 평가로 이어질 수 있습니다. 또 다른 방법은 melanogaster의 일반적으로 음식 섭취 (16)에 대해 발생하는 코 확장 응답 (PER)이며, 초파리의 음식에 대한 반응을 측정합니다. 이 우아한 방법은 음식의 자극에 대한 초기 반응을 측정하지만, 섭취의 양을 기록하지 않습니다. 음식 섭취를 동적으로 공급 (17) (18)의 조절에 중요한 여러 포스트 소화 피드백 신호를 이용하여 공급 중에 조절된다. 몇 번의 시도는 PER 분석에서 반 자동화 데이터 수집에 최근되었습니다 19, 20입니다. 당은 전기 패드 또는 전극의 조합에 의해 감지되고 컴퓨터를 통해 계산됩니다. 방사성 동위 원소의 흡수와 PER 분석을 결합하면이 분석은 양 먹이의 차이 (18)를 검출하는 낮은 감도에 의해 제한되는 것으로 나타났습니다. 비행은 유리 모세관을 사용하여 수동으로 공급하는 수동 급지 분석 (MAFE) (21)는, 최근에 고정화 한 즉석 식품 섭취량을 측정하기 위해 개발되었다. MAFE 분석은 개시 꼴 및 공급의 간섭을 제거하고, PER의 시간 (초)의 해상도 및 개시가 있고 음식 소비 분석 독립적으로 모니터링 할 수있다. 그러나 상기 방법은 상기 플라이 고정화 (예 운동 동기)이 아직 조사해야 급전 동작의 특정 측면에 영향을 미친다. 초파리 나 음식 소비를 측정하기위한 다른 분석의 우수한 비교 후기lanogaster은하고, 가장 적합한 하나를 찾는 연구에 도움 데쉬와 마르크스하여 보고서를 볼 수 있습니다 13, 22.
카페 분석은 위에서 설명한 다른 분석의 단점 중 일부를 방지하고 음식 섭취의 신뢰성있는 측정과 사용의 단순성을 결합한다. 여기서, 카페 분석의 상세한 설명을 제공하고, 우리는 증발을 감소시키기 위해 간단한 설정 변경을 보여준다. 두 음식 선택 분석 (단기 및 장기)과 파리의 설탕 섭취를 포함하는 대표적인 결과가 증명된다. 토론에서 우리는 CAFE 분석을 수행하고 잠재적 인 한계를 강조하기 위해 다른 방법으로 우리의 기술 방법을 비교한다.
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1. 카페 분석
참고 : 실험 유리 병, 특정 뚜껑과 마이크로 모세 혈관 : 분석법은 세 가지 구성 요소로 구성되어 있습니다. 커버 플라스틱 상자가 제조 된 튜브를 운반하고보다 효율적으로 습도를 제어하기 위해 사용된다.
파리 2. 준비
액체 식품의 3. 준비
4. 조립 및 모세관 공급 분석을 수행
5. 데이터 수집 및 분석
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승 1118 유전자형의 파리는 분석이 수행되는 방법을 설명하는 데 사용됩니다. 승 1118 돌연변이는 일반적으로 트랜스 제닉 라인들을 생성하고, 도입 유전자의 유전 적 배경에 흰색 유전자 표시 제어하기 위해 사용된다. 일반적으로, 행동 실험을 위해, 모든 유전자 변형 라인은 실험 대조군으로 사용되는 것과 동일한 w 1,118 재고에 다섯 세대에 backcrossed된다. 우리는 여러 실험을 보여 변형 된 셋업 증발 손실 비교 단기 음식 선택 실험 장기적인 음식 섭취 실험 다른 자당에 희석 실험.
증발 카페 분석의 성능에 중요한 역할을한다. 우리는 증발 감소 우리의 분석에 추가 방법을 포함 : ⅰ) 중앙 스폰지 마개가 물 24 시간마다 리필...
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이 보고서는 기술 설치 및 실험실에서의 성공적인 성능에 초점을 맞추고, 단계별 방식으로 CAFE 분석에 대해 설명합니다. 단순하기 때문에,이 분석은 학교 교육적 실험으로 사용될 수있다. 예제는 분석이 짧고 긴 기간 (일 시간)을 통해 초파리 melanogaster의 음식 감지, 환경 및 소비의 조사를 할 수 있음을 보여준다. 카페 분석은 식품 의약품 소비 중독 에너지 항상성 및 공급 (16)의 연결을 제어, 18, 24, 25을 포함한 환자를 조사 분야에서 널리 사용되고있다.
카페 분석에서 실험 파리는 성공적으로 구하고, 감지 및 운동과 같은 음식을 얻기 위해 여러 가지 작업을 수행해야합니다; 이러한 작업을 수행 할 수없는이 감소 소...
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저자는 공개 아무것도 없어.
토론에 참여한 Scholz 연구소의 전현직 구성원과 탁월한 기술 지원을 제공한 Helga Döring에게 감사드립니다. 우리는 특히 쾰른 대학의 Biocenter 워크숍 회원들의 지원과 창의성에 감사드립니다. 이 작업은 SFB 1340, SysMedAlc 및 DAAD-Siemens의 지원을 받습니다.
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| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 바이알(육종) | Greiner Bio-One | 960177 | |
| www.greinerbioone.com 바이알(CAFE 분석) | Greiner Bio-One | 217101 | www.greinerbioone.com |
| Lid-CAFE 분석 | 워크샵 | – | – |
| 플라스틱 상자, 낮은 벽 | Plastime | 353 | www.plastime.it |
| 플라스틱 상자 워크샵 용 커버 | ; | – | |
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| 피펫 팁 | Greiner Bio-One | 771290 | www.greinerbioone.com |
| 여과지 서클 | Whatman | 10 311 804 | www.sigmaaldrich.com |
| D(+)-Sucrose | AppliChem | 57-50-1 | www.applichem.com |
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| 식용 색소(빨간색, E124) | Backfun | 10027 | |
| www.backfun.de 식품 색소 (파란색, E133) | Backfun | 10030 | www.backfun.de |
| 비누 용액 (CVK 8) | CVH | 103220 | www.cvh.de |
| 디지털 캘리퍼스 | GARANT | 412,616 | www.hoffmann-group.com |
| 바이알 (번식용) | 높이 9.8 cm, 지름 4.8 cm | ||
| 바이알(CAFE 분석) | 높이 8cm, 지름 3.3cm | ||
| Lid-CAFE 분석 | 대학 작업장에서 제작, 기술 도면 제공 이 파일을 다운로드하려면 여기를 클릭하십시오. | ||
| 플라스틱 상자, 낮은 벽 | 플라스틱 그리드 인레이는 8 x 10 바이알 위치에 맞게 맞춤 제작되었습니다 | ||
| 플라스틱 상자 | 크기 (37 x 29 x 18 cm) | ||
| Capillaries | DIN ISO 7550 규범, IVD-가이드라인 98/79 EG, 끝 광택 | ||
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