염증성 장 질환 (IBD)의 현재 치료는 질병의 증상을 완화 목표로하지만 심각한 부작용을 일으킬 수 있습니다. 따라서, 대안 전략은 동물 대장염 모델에서 연구되고있다. 여기서 우리는 임상 IBD 표지판에 다이어트 보조제의 유익한 효과는 이러한 대장염 모델에서 분석 방법에 대해 설명합니다.
이 콘텐츠를 보려면 JoVE 구독이 필요합니다. 로그인하거나 오늘 무료 평가판을 시작하세요.
이 논문에서
요약
초록
크론 병과 궤양 성 대장염을 포함한 염증성 장 질환 (IBD)는, 내장의 만성 재발 성 질환이다. 그들은 영향을받는 개인 이러한 복부 경련, 피 묻은 설사, 체중 감소 등의 심각한 문제를 일으킬. 불행하게도, 치료법은 아직없고, 치료는 증상을 완화하는 것을 목표로하고 있습니다. 현재 치료는 심각한 부작용을 일으킬 수 소염 및 면역 억제제를 포함한다. 이는 부작용을 일으키지 않는 등의 영양 보충제와 같은 다른 치료 옵션에 대한 검색을 보증한다. 임상 연구에의 응용하기 전에, 이러한 화합물은 엄격 동물 모델에서 효율성과 보안을 테스트해야합니다. 신뢰성있는 실험 모델은 인간에서의 궤양 성 대장염의 임상 징후의 많은 재생 마우스에서 덱스 트란 황산나트륨 (DSS) 대장염 모델이다. 우리는 최근에 들어있는 영양 보충의 유익한 효과를 테스트하기 위해이 모델을 적용비타민 C와 E, L 아르기닌, 및 ω3-고도 불포화 지방산 (PUFA). 우리는 다양한 질병 매개 변수를 분석하고이 보충 질병 활동 지수가 전반적으로 개선 선도, 부종 형성, 조직 손상, 백혈구 침윤, 산화 스트레스 및 염증성 사이토 카인의 생산을 개선 할 수 있었다 것으로 나타났습니다. 이 글에서, 우리는 구체적으로 올바른 C57BL / 6 마우스의 DSS 대장염 모델을 사용하여 영양 보충제의 응용 프로그램뿐만 아니라 방법 등 조직학, 산화 스트레스, 염증 등 질병 매개 변수가 평가됩니다 설명합니다. 다른 다이어트 보조제의 유익한 효과를 분석하는 것은 다음 결국 IBD의 증상을 완화 및 / 또는 그 심각한 부작용을 유발하지 않고 죄 사함의 위상을 연장 대체 치료 전략의 개발을위한 새로운 길을 열 수 있습니다.
서론
대장염은 설사와 복통을 일으킬 수있는 대장의 염증 상태이다. 대장염 감염 또는 스트레스에 응답하여, 급성이거나, 그러한 염증성 장 질환 (IBD)의 그룹에 속하는 궤양 성 대장염 (UC)와 같이 만성 질환으로 발전 할 수있다. UC의 임상 증상이 잘 설명되었지만, 병인은 여전히 좋지 1 이해된다. UC는 중요한 역할이 재생 유전 변이 및 비정상적인 면역 반응과 더불어, 인성 질병이라고 전문가들 사이에서 허용됩니다. 그러나, 생활 스타일 및 영양과 같은 환경 적 요인은 또한 질환의 발생 및 진행 (3)에 기여한다.
불행하게도, IBD는 경화 아니라, 임상 증상을 완화하는 것을 목표로 많은 치료 옵션이 있습니다. 현재의 치료법은 설파살라진 및 코르티코 스테로이드와 같은 소염제를 포함한다; 이러한 azathio과 같은 면역 억제제,prine; 이러한 인테그린과 같은 종양 괴사 인자 α (TNF-α), 또는 블록과 같은 부착 분자 캡처 염증성 사이토 카인, 과도한 백혈구 보충을 감소시키는 모노클로 날 항체; 이러한 야누스 키나제 (JAK) 4와 같은 염증성 경로를 트리거 키나제를 표적 억제제. 모든 환자가 모든 치료에 반응 때문에 치료 전략 (5)를....
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
프로토콜
모든 동물 실험은 Cinvestav의 기관 동물 관리 및 사용위원회에 의해 승인되었습니다.
1. DSS 마시는 물 준비 및 대장염의 유도
- 멸균 된 마시는 물에 3.5 % w / V 덱스 트란 황산 나트륨 (DSS) 솔루션을 준비합니다. DSS 쉽게 용해하고 최종 용액을 필터링 할 필요는 없다.
참고 : DSS 처리 7 일 심한 대장염을 유도한다. 가벼운 장염을 유발하는 경우 3 - 치료 4 일의 권장합니다. 만큼 DSS 식수 명확 유지로서, 상기 물을 변경할 필요가 없다. 이 혼탁 변한다면, 그것은 교체되어야한다. - 수컷 마우스의 기본 무게를 기록한다. 12주 나이 21의 범위 내에서 - - 25g의 체중들은 8 있는지 확인합니다.
주 : 해당 DSS 농도는 각각의 실험실에서 최적화되어야한다. 결과는 크게 주택 조건에 따라 다를 수 있습니다. 2.5 사이의 농도 - 5 %는 일반적으로 강한 C를 유도하는 것으로보고되고C57BL / 6J WT 마우스 10 olitis. 결과는 DSS의 다른 소스와 다를 수 있습니다 서로 다른 기업과 다른 많은에서 DSS는, 테스트해야합니다. - 임의 량의 물을 제공하고 필요한 경우 신선한 3.5 % DSS 물로 교체합니다. <....
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
결과
다이어트 보조 식품 DSS 대장염에서 보호 할 수 있습니다
비타민 C, 비타민 E, 산화 질소 (NO) -source의 L- 아르기닌 및 ω3 - 불포화 지방산 (ω3-PUFAs에) 등의 항 염증 및 항산화 다이어트 보조제, 동물에서 다양한 성공 사용되고 모델은 염증성 질환 3,6,15의 흔적을 완화한다. 영양 실조, 산화 스트레스, 및 염증성 사이토 카인의 생산은 급성 및 만성 대장염 3을 트리거 할 수있다. 이전의 연구에서, 우리는 미량 영양소의 조합이 생체 내에서 DSS 유도 된 대장염에 대한 보호 효과를 보였다 있음을 증명했다. 여기, 우리는 이러한 효과가 8을 측정 하였다 방법에 대한 자세한 프로토콜을 제공합니다. 첫째, 우리는 체중 감소의 세 파라미터 이루어진 질병 활성 지수 (D.......
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
토론
임상 연구에서 영양 보충제를 사용하기 위해, 이득 등과 보충 안전 신중 동물 연구에서 생체 내에서 평가한다. 대장염의 경우, IBD의 임상 증상과 유사한 여러 적절한 동물 모델은 DSS, TNBS, 또는 아세트산을 이용한 화학 모델을 포함하여, 확립되었다; 녹 - 아웃 등 IL10-KO로 (KO) 모델; 및 입양 T 세포 전송 19-21를 사용하여 대장염을 면역 세포 매개. 대장염의 DSS 모델은 인간 IBD 많은 질병 증상과 유사한 및 대장염 (22)의 분자 메커니즘을 조사 연구의 과다 사용되어왔다 대장염 유도 신속하고 신뢰할 수있는 방법이다. 또한, DSS 대장염은 가역적이며, colitogenic 자극이 제거 된 후, 따라서 또한 조직의 치유에 대한 연구 수 있습니다. 제공되는 프로토콜 상세 이전에 우리의 실험실 8에 최적화 된 DSS 대장염 모델을 설명합니다.
단점은 환경.......액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
공개 사항
저자는 공개 아무것도 없어.
감사의 글
이 작품은 멕시코 과학 기술위원회 (CONACYT, 207268 및 233395 마이클 Schnoor에)에서 보조금에 의해 지원되었다. KFCO는 석사 학위를 취득 할 수있는 CONACYT의 장학금 (396260)의받는 사람입니다.
....액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 젤라틴 0.3% | Bioxon | 158 | |
| 10% 포름알데히드 | J.T. Baker | 2106-03 | |
| 96-웰 플레이트, 평평한 바닥 | Corning | 3368 | |
| 절대 에탄올 | J.T. Baker | 9000-03 | |
| 앱솔루트 크실렌 | J.T. Baker | 9490-03 | |
| ABTS | Sigma Aldrich | H5882 | |
| 소 혈청 알부민 | Sigma-Aldrich | 9048-46-8 | |
| ColoScreen | Helena Laboratories | 5072 | |
| Corabion (Merck, Naucalpan, Mexico에서 친절하게 제공) | Merck | ||
| 덱스트란 황산염 나트륨 | Affymetrix | 9011-18-1 | (M.W. 40,000-50,000) |
| Dihydroethidium | Life Technology | D11347 | |
| Eosin-Y | J.T. Baker | L087-03 | |
| Evans blue | Sigma-Aldrich | 314-13-6 | |
| 급식 바늘 | Cadence Science Inc. | 9921 | |
| 손잡이가 있는 유리 슬라이드 랙 | 전자 현미경 | 70312-16 | |
| 유리 슬라이드 | 코닝 | 2947 | |
| Harris hematoxylin | 시그마-알드리치 | H3136 | |
| 헥사데실트리메티아암모늄 (HTAB) | 시그마 알드리치 | H6269 | |
| 히스토셋 (임베딩 카세트) | Simport | M498.2 | |
| 염산 1 M | J.T. Baker | 9535-62 | |
| 과산화수소 | 시그마 알드리치 | H3410 | |
| 케타민 | PiSA 아그로페쿠아리아 | Q-7833-028 | |
| 액상 파라핀 | Paraplast | 39501-006 | |
| 리튬 카보네이트 | Sigma-Aldrich | 2362 | |
| N,N-dimethylformamide | J.T. Baker | 68-12-2 | |
| N-acetylcysteine | Sigma-Aldrich | A9165 | |
| 플라스틱 큐브 | 전자 현미경 | 70181 | |
| 폴리-L-라이신 용액 | Sigma-Aldrich | 25988-63-0 | |
| Prism 5 통계 | 소프트웨어 GraphPad 소프트웨어 | Prism 5 | |
| 식염수 용액 0.9% NaCl | CS PiSA | Q-7833-009 | |
| 시트르산 | 나트륨 시그마-알드리치 | W302600 | |
| 합성 수지 | Poly Mont | 7987 | |
| Taq DNA 중합효소 | Invitrogen | 11615-010 | |
| Tissue-tek. OCT 컴파운드 | Sakura Finetek | 4583 | |
| Tuberculine 주사기 | BD Plastipak | 305945 | |
| 트윈 20 | Sigma-Aldrich | 9005-64-5 | |
| VECTASHIELD 안티페이드 마운팅 매체 with DAPI | Vector Laboratories | H-1200 | |
| Xylazine | PiSA Agropecuaria | Q-7833-099 |
참고문헌
- Souza, H. S., Fiocchi, C. Immunopathogenesis of IBD: current state of the art. Nat Rev Gastroenterol Hepatol. 13, 13-27 (2016).
- Xavier, R. J., Podolsky, D. K. Unravelling the pathogenesis of inflammatory bowel disease. Nature. 448, 427-434 (2007).
- Neuman, ....
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
재인쇄 및 허가
