털이없는 SKH1 - 시간의 시간 마우스의 귀 모델은 검토 미세 혈관 침대에서 사전 수술 준비없이 미세과 광독성 혈전 유도의 생체 내에 형광 현미경을 할 수 있습니다. 따라서 털이 마우스의 귀는 미세 혈관 혈전 형성, 혈전 진화 및 혈전 용해시 복잡한 상호 작용을 연구하는 생체 모델의 우수합니다.
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방법 논문
털이 마우스의 귓불에서 생체 내에 현미경 및 혈전 유도
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이 논문에서
요약
초록
혈관 질환의 혈전 성 합병증은 선진국의 이환율과 사망률의 한 주요 원인이다. 때문에 혈전 형성시 셀룰러 및 비 셀룰러 혈액 성분 간의 복잡한 상호 작용의 생리 학적 및 병태 생리 혈전증의 신뢰성 시험은 생체 내에서 수행 될 수있다. 따라서이 문서는 털이없는 쥐의 귀 모델을 제시하고, 미세, 혈전 형성 및 혈전 진화의 생체 분석에 초점을 맞추고 있습니다. 생체 내에 형광 현미경 및 형광 염료 각각의 정맥 내 (IV) 애플리케이션을 이용함으로써, 귓바퀴의 미세 순환을 반복 분석을 용이하게 수술 준비 할 필요없이 수행 될 수있다. 또한,이 모델은 상처 치유, 재관류 손상, 또는 혈관 신생 등 다양한 문제의 생체 내 연구에 대해 적용 할 수 있습니다. 요약하면, 털이없는 쥐의 귀는에서 비비안을위한 이상적인 모델입니다생리 학적 또는 병태 생리 학적 조건에서 다른 전신 또는 국소 치료법과의 반응의 평가를 위해 피부의 미세 O 연구.
서론
본 문서의 목적은 직접적인 관찰과 미세 분석, 혈전 형성 및 혈전 진화의 무모 마우스의 귓바퀴에 적용 생체 내에 현미경의 기술을 설명하는 것입니다. 1000 년 1의 발생율로, 정맥 혈전증 여전히 이환율의 일반적인 원인이다. 진단, 예방 전략 및 치료는 최근에 개발되었지만, 정맥 혈전증의 3 분의 1은 폐 색전증 1로 나타난다. 동맥 혈전증은 선진국에서 사망의 가장 흔한 원인이되는 심장 혈관 질환에 중요한 역할을한다. 동맥 경화성 플라크의 파열에 따라 동맥 혈전증은 심장 마비, 장간막 경색 및 뇌졸중에 참여하고있다. 모든 수술은, 혈액 성분에 피하 구조를 노출 혈류 역학을 변경하고 환자를 고정시킨다. 낮은 사지, 기관 t의 endoprosthetic 수술에서ransplantation 및 플랩 수술 혈전 합병증의 빈번한 원인입니다. 특히 미세 혈관 혈전증 자주 인해 임상 증상의 부족으로 돌이킬 수없는 손상을 야기한다. 마찬가지로, 미세 혈관 혈전증은 다른 사람의 사이에서 혈전 성 혈소판 감소 성 자반증, 패혈증, 파종 성 혈관 내 응고, 항 인지질 증후군, 만성 정맥 부전, 등 여러 질병에 중요한 규칙을한다.
치료 및 혈전증의 예방을위한 여러 가지 새로운 약물은 최근에 개발되었지만, 항 혈소판 약물....
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프로토콜
모든 생체 실험 (7221.3-1-006 / 15) 동물의 보호 및 실험 동물의 관리 및 사용에 대한 NIH 가이드 (실험 동물 자원 연구소, 국립 연구위원회)에 독일 법률에 따라 실시 하였다.
동물의 1. 일반 상태 유지
- 4 ~ 6 주 세 남성 SKH1 - 시간의 시간의 쥐 실험을 수행합니다. (20)와 25g 사이 무게 동물을 사용합니다.
- 물과 음식을 자유로이에 지속적으로 액세스하는 무균 시설에서 26 ° C 24의 표준화 된 조건 약 60 %의 상대 습도에서 동물을 유지합니다.
- 하나 개의 새장에 다섯 개 수컷에 계속. 자신의 웰빙을위한 동물의 하우징 동안 침구와 농축 자료를 제공합니다.
동물 2. 사전 약속
- (예를 들면, 칸 나비 노이드, 5m 마우스 체중과 각 약물로드인슐린 주사기로 g / kg 체중 (BW)). 혈전 유도하기 전에 약 30 분을 관리.
- 엄지와 집게 손가락과 새끼 손가락으로 마우스의 꼬리와 마우스의 목을 잡고함으로써, 동물 스트레칭과 복부의 왼쪽 하단 사분면에 약 복강 (IP)을 주입. 15 분 ....
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결과
혈전의 치료 효과 카나비노이드
FITC 덱스 트란 0.05 mL를 주입하면, 광독성 혈전 유도는 (도 2 및도 3). 내피 병변 및 정수리 혈소판 플러그의 형성을 유도 본 연구에있어서, 칸 나비 노이드의 IP 주입 (5 ㎎ / ㎏ 체중) 또는 비히클 후의 혈전 유도는 모든 세정맥에서 혈전 혈관 폐색 (도 4) 결과. 비히클 - 처리 된 동물에서의 혈전 형성 시간 (430 개) S (:, 637의 75 번째 백분위 수 (330)의 25 번째 백분위 수)이었다. 어느 칸 나비 디올 (CBD)도 WIN55,212-2 (WIN) 관리는 혈관 폐색 시간에 관련된 영향을 보여 주었다. 240 : 그러나, 내인성 카나비노이드 아난다 상당히 270 s.......
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토론
SKH1 - 시간의 시간 마우스의 귓불에서 성공적인 혈전 유도에 대한 몇 가지 중요한 단계가 있습니다. 문제 해결을 위해 프로토콜의 각 단계는 괄호 안에 표시됩니다.
육주와 표피의 낮은 각화로 - 시험 조건은 4 세의 나이에 젊은 동물에 이상적입니다. 이전 동물에서 혈관의 시각화 품질로 인해 피부 표면과 타겟 용기 (단계 1.1) 사이의 거리보다 더 적은 대등하다.
검사 지역에 FITC 덱스 트란의 혈관 외 유출을 방지하기 위해, 고정 봉합 가능한 한 가장자리에 배치되어야한다. 스티치에 근접하여, 형광 염료 extravasate 및 혈관 외 공간과 용기 사이의 콘트라스트를 감소시킬 수있다. 염료의이 넘쳐 천천히 진행. 종래 FITC 덱스 트란의 주입 좋은을 15 분 이상 한 바와 같이 봉합 스티치되면생체 내에 현미경 검사 조건 (단계 2.8)을 보장한다.
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공개 사항
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감사의 글
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| SKH-1/hr 마우스 | Charles River | 477 | 은 다른 공급업체에서 구매할 수 있습니다 |
| 표준 실험실 식품 | sniff Spezialdiaeten | V1594-0 | 다른 공급 업체에서 구입할 수 있습니다 |
| 실체현미경 작동 | Leica | M651/M655 | 다른 공급 업체에서 구입할 수 있습니다 |
| 생체 내 현미경 | Zeiss | Axiotech Vario 100 | 다른 공급 업체에서 구입할 수 있습니다 |
| 객관적인 (20X/0.95) | 자이스 | 20x/0,50W; 플랜-네오플루아르 | 다른 공급 업체에서 구입할 수 있습니다 |
| 대물렌즈(63X/0.95) | Zeiss | 63x/0,95W; 애크로플란 | 다른 공급 업체에서 구입할 수 있습니다 |
| 흑백 CCD 카메라 | 파이퍼 | FK 6990 IQ-S | 다른 공급 업체에서 구입할 수 있습니다 |
| DVD-레코더 | Panasonic | DMR-EX99V | 다른 공급 업체에서 구입할 수 있습니다 |
| 나트륨 염화물 | Braun | 5/12612055/1011 | 다른 공급 업체에서 구입할 수 있습니다. |
| 케타민 10% | Bela pharm | F3901-6 | 은 다른 공급업체에서 구매할 수 있습니다 |
| Xylazine 2% | Bayer | 6293841.00.00 | 다른 공급업체에서 구입할 수 있습니다 |
| FITC-덱스트란 5% | 시그마 | 46945-100MG-F | 는 다른 공급업체에서 구입할 수 있습니다 |
| 덱사판테놀 5% 눈 연고 | 바이엘 | 6029009.00.00 | 다른 공급업체에서 구매할 수 있습니다 |
| 포름알데히드 4% | Sigma | HT501128-4L | 은 다른 공급업체에서 구입할 수 있습니다 |
| DMSO | Sigma | 472301 | 다른 공급업체에서 구입할 수 있습니다 |
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| 원심분리기 | Beckman Coulter | CLGS 15 | 는 다른 공급업체에서 구매할 수 있습니다 |
| 혈액학 분석기 | Sysmex | KX-21 A6980 | 은 다른 공급업체에서 구입할 수 있습니다 |
| EDTA-혈액 튜브 | Sarstedt | 201,341 | 은 다른 공급업체에서 구입할 수 있습니다 |
| 면봉 | Sanyo | 604-A-1 | 다른 공급업체에서 구입할 수 있습니다 |
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| 메스 21 | Dahlhausen | 11.000.00.511 | 다른 공급업체에서 구입할 수 있습니다 |
| Prolene 7-0 | Ethicon | XNEH7470 | 다른 공급업체에서 구입할 수 있습니다 |
| 프롤렌 6-0 | 에티콘 | XN8706. P33 | 다른 공급업체에서 구입할 수 있습니다 |
| 전기소작 | Servoprax | H40140 | 은 다른 공급업체에서 구입할 수 있습니다 |
| 아크릴 유리 패드 | 통합 가열, 0.5 cm 높이 평면 |
참고문헌
- White, R. H. The epidemiology of venous thromboembolism. Circulation. 107 (23), I4-I18 (2003).
- Benavides, F., Oberyszyn, T. M., VanBuskirk, A. M., Reeve, V. E., Kusewitt, D. F. The hairless mouse in skin research. J Dermatol Sci. 53 (1), 10-18 (2009).
- Grambow, E., Strüder, D., Klar, E., Hinz, B., Vollmar, B.
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