췌장 덕트 주입은 혈통 추적, 유전자 도입 및 세포 주 별 표적을 허용할 수 있는 중요한 기술입니다. 췌장 세포에 대한 약물 및 바이러스 성 전달을위한 췌장 덕트 주입 기술이 여기에 제시됩니다.
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방법 논문
췌장 덕트 주입: 효과적이고 선택적 약물 및 바이러스 성 전달 방법
* These authors contributed equally
이 논문에서
요약
초록
췌장은 내분비와 외신 성분을 모두 갖춘 양기능 기관입니다. 많은 병리학은 당뇨병, 췌장염 및 췌장암을 포함하여 췌장을 괴롭히수 있습니다. 이 질병의 세 가지 모두 즉각적인 치료를 개발할뿐만 아니라 병리 생리학을 더 잘 이해하기 위해 연구의 활성 영역을 표시합니다. 이러한 연구 영역을 발전시킬 수 있는 도구는 거의 없습니다. 췌장 덕트 주입은 혈통 추적, 유전자 도입 및 세포 주 별 표적을 허용할 수 있는 중요한 기술입니다. 이 기술은 십이지장과 암풀라의 두 번째 부분의 복잡한 해부를 필요로하며, 담관의 폐색과 췌장 덕트의 캐닝이 뒤따릅니다. 이 기술은 처음에는 기술적으로 도전적이지만 응용 프로그램은 무수합니다. 그룹 간의 절차의 세부 사항에서 모호성은 표준 프로토콜의 필요성을 강조했습니다. 이 작품은 GFP를 표현하는 바이러스 벡터의 췌장 덕트 주입 후 췌장 내의 녹색 형광 단백질(GFP)의 발현을 설명합니다. 주입 및 따라서 발현은 다른 조직 유형에 존재하는 발현없이 췌장에 특이적이다.
서론
췌장은 내분비와 외신 성분을 모두 갖춘 양기능 기관입니다. 많은 병리들이 당뇨병, 췌장염 및 췌장암1을포함한 췌장을 괴롭히수 있다. 이 질병의 세 가지 모두 즉각적인 치료를 개발할뿐만 아니라 병리 생리학을 더 잘 이해하기 위해 연구의 활성 영역을 표시합니다.
표적 치료 전달 방법은 도움이 될 것입니다. 우리는 췌장 세포에 약물 및 바이러스 성 전달에 대한 효과적이고 선택적 방법입니다 췌장 덕트 주입 기술을 개발했다. 이 모델에서 췌장 덕트는 선택적으로 캔누레이트되고 일반적인 담관이 가려져 췌장에만 전달될 수 있습니다.
이 기술은 췌장 발달 및병리학에중요한 발달 경로를 더욱 해명하기 위하여 특정 세포 모형의 계보 추적을 허용할 수 있습니다2,3. 바이러스 벡터에서 상이한 프로모터는 세포주및 이들세포주4,5로유전자의 도입을 위해 특정 표적화를 허용한다. 이 작품은 GFP를 표현하는 바이러스 벡터의 췌장 덕트 주입 후 췌장 내의 녹색 형광 단백질(G....
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프로토콜
모든 동물 실험은 피츠버그 아동 병원과 피츠버그 대학 기관 동물 관리 및 사용 위원회의 동물 연구 및 관리 위원회에 의해 승인되었습니다.
1. 수술 전 준비
- 적절한 마취 수준으로 코 콘을 통해 흡입 된 이소플루란 (유지 보수1 - 3 %, 유도에 대한 최대 5 %)을 투여하십시오. 집게로 발가락 핀치에 의해 마취의 적절성을 모니터링합니다. 반응의 부족은 적당한 여겨지고, 호흡불경기가 생길 수 있기 때문에, 과다 복용하지 않도록 하십시오.
- 목표를 고려하여 복부를 중심으로 해부 현미경 단계에 동물을 배치합니다. 수술 용 테이프로 동물을 고정합니다. 마취 하에 건조를 방지하기 위해 동물의 눈에 안과 연고를 적용합니다.
- 매끄럽고 두꺼운 제모 크림층을 바르고 3분 동안 그대로 둡니다. 작은 부위에 제모를 확인하십시오. 크림과 모발을 70% 에탄올에 담근 거즈로 부드럽게 닦아냅니다.
- 동물의 복부를 70% 에탄올에 담근 거즈로 닦아내고 베타딘에 흠뻑 젖은 거즈를 제거합니다. 수술 시술 전반에 걸쳐 멸균 상태를 유지합니다.
2. 적절한 노출
- 메스를 사용하여 자이포이트 공정에서 배꼽까지 피부에 중간 절개를 합니....
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결과
연습과 신중한 수술 기술로, 이 마우스의 생존율은 95% 이상이어야 합니다. 주입 후 1 주일, 원하는 효과는 췌장에서 분명해야한다. 생관10~12주생쥐는 췌장덕 주입을 위해 활용되었다. 여기서 우리는 가짜 수술과 비교하여 녹색 형광성 단백질 (GFP)을 표현하기 위해 CMV 프로모터와 아데노 관련 바이러스 혈청형 8 (AAV8)을 사용합니다. 마우스 췌장은 주입 후 7 일 수확하였다. 췌장, 비장 및 십이지장 의 섹션은 인슐린 항체와 Hoescht로 염색되었습니다. 도 1은 가짜 수술을 받은 것과는 달리 AAV8로 췌장 덕트 주입을 받은 마우스의 췌장 전체에 걸쳐 GFP의 광범위한 발현이 있음을 보여준다. 이 마우스에 있는 간, 비장, 또는 십이지장에서 아무 표현도 없습니다, 따라서 주입의 선택적 본질을 문서화합니다. 이들 데이터는 DNA 및 RNA 발현 프로파일을 포함한 여러 가지 다른 방법으로 확인할 수 있다.<.......
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토론
이 작품은 췌장 덕트 주입 뒤에 방법론을 상세히 설명, 췌장에 유전자 및 기타 분자의 전달을위한 효과적인 마우스 모델. 다양한 그룹 간의 절차의 세부 사항에 대한 모호성은 표준화된 프로토콜8,9,10의필요성을강조했다.
젊고 건강한 마우스의 선택으로 시작하는 절차의 몇몇 중요한 단계가 있습니다. 십이지장의 천포, 그러나 작고 통제, 의심 할 여지없이 염증 성 사이토 카인과 완전히 특성화되지 않은 다른 요인의 모집에 이르게 마우스의 외상성 사건이다. 따라서 카테터 도입을 위해 가능한 가장 작은 십이지장 절제술을 만드는 것과 같이 섬세한 해부는 매우 중요합니다. 전체 절차의 가장 중요한 단계는 전달 시스템과 췌장 덕트의 캐닝입니다.
어려움은 췌장 유두의 과도한 중단으로 .......
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공개 사항
저자는 공개 할 것이 없습니다.
감사의 글
저자는 인정이 없습니다. 기금은 절강성 보건 가족 계획위원회 (그랜트 20146242)와 원저우 과학 기술 국 (그랜트 Y20140248)의 재단으로부터 수령되었습니다.
....액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 생쥐 (25 - 30g, 8-12 주령) | Jackson Laboratory | ||
| Ketofen | Henry Schein Inc. | 5487 | |
| 에탄올(70%) | Sigma-Aldrich | 34923 | |
| 멸균 식염수 | Baxter Healthcare Corp. | 2B-13-00 | |
| 보호 장비 | |||
| 제모 제품 | Nair 또는 | ||
| 트리머 거즈 패드 2in x 2in | Fisher Healthcare | 22-362-178 | |
| 바늘(30.5G 및 25G) | Becton Dicksinson and Co. | 305106 및 305122 | |
| 주사기 | |||
| 펌프 | Henke Sass Wolf | 4010.200V0 | |
| 주입 펌프 | 펌프 시스템 용 | NE-1000 | |
| 주입 카테터 | 세계 정밀 기기 | CMF31G | |
| 곡선 불독 클램프 (2) | Roboz | RS-7439 | |
| Arruga 집게 | Roboz RS-5163 | ||
| Adson 집게 | Roboz | RS-5234 | |
| 바늘 홀더 | Roboz | RS-7882 | |
| 가위 | Roboz | RS-5982 | |
| 코튼 팁 애플리케이터 | 의사 판매 및 서비스 | 22-9988 | |
| 해부 현미경 | |||
| 봉합 | 오웬스 및 경SXMD1B402 |
참고문헌
- Gittes, G. K. Developmental biology of the pancreas: a comprehensive review. Dev Biol. 326 (1), 4-35 (2009).
- Gu, G., Dubauskaite, J., Melton, D. A. Direct evidence for the pancreatic lineage: NGN3+ cells are islet progenitors and are disti....
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재인쇄 및 허가
