이 프로토콜은 장기간의 심각한 질병에 대한 중앙 카테터 삽입 마우스 모델을 설명합니다. 우리는 패혈증을 유도하기 위해 두골 결찰 및 천자 방법을 결합하고 수액, 약물 및 영양 투여를 위한 중심 정맥 라인을 사용하여 인간의 임상 환경을 모방합니다.
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이 논문에서
요약
초록
이 프로토콜은 장기간 중요한 질병의 중앙 카테터 마우스 모델에 대해 설명합니다. 우리는 인간의 임상 설정을 모방하는 유체, 마약과 영양 관리를위한 중심 정맥 라인의 사용과 패혈증을 유발하는 맹장 결찰 및 천공 방식을 결합한다. 비판적으로 아픈 환자는 살아 남기 위해 집중적 인 의료 지원을 필요로한다. 환자의 대부분은 몇 일 내에 회복되지만, 환자의 4 분의 1 정도는 장기간 집중적 인 치료가 필요하고 여러 장기 부전 비 해결 사망의 위험이 높은. 또한, 중요한 질환의 연장 상 기전은 현재 불완전하게 이해되어있는 심각한 근육 약화 및 내분비 및 대사 변화에 의해 hallmarked된다. 중요한 치료 연구에서 가장 널리 사용되는 동물 모델은 패혈증을 유발하는 맹장 결찰 및 천공 모델입니다. 이것은 인간의 9월과 유사한 급성 염증 및 혈역학 적 변화에 매우 재현성 모델입니다중요한 질병의 급성기을 연구하기 위해 설계 동생. 그러나,이 모델은 임상 인간의 상황과 다른, 중요한 질병의 연장 상을 연구하기 위해 개발되지 않은 높은 치사율에 의해 hallmarked됩니다. 따라서, 우리는 더 중요한 질병의 인간 임상 상황을 모방하기 위해, 우리가 임상 적으로지지 요법을 관리 할 수 있도록 경정맥에 중심 정맥 카테터를 배치하여 기술을 적용. 이 마우스 모델은 동물의 광범위한 수술 및 일상 집중 치료를 필요로하지만, 중요한 질병의 급성 및 장기간 단계의 관련 모델을 초래한다.
서론
중요한 질병은 하나 이상의 기관 시스템의 기능을 집중적으로 의료 지원을 투여하지 않는 환자가 죽을 정도에 방해되는 질병 상태이다. 중환자 실 (ICU) 외상, 복잡한 수술, 화상, 패혈증 질병 악화에 이르기까지 다양 할 수 입학 초기 원인 반면, 모든 중증 환자는 다른 사람의 사이에서 혈류, 저산소증과 과도한 염증에 의한 세포 손상, 고통 어느 장기 장애로 이끈다. 대부분의 환자들은 급성 모욕 생존하지만, 환자의 중요한 부분은 즉시 복구하고 장기 집중 치료가 필요하지 않습니다. 그들은 인해 여러 장기 부전 비 해결에 죽음의 높은 위험이 있습니다. 또한, 중요한 질환의 연장 상 기전은 현재 불완전하게 이해되어있는 심각한 근육 약화 및 내분비 및 대사 변화에 의해 hallmarked된다.
여러 연구odent 모델은 중요한 치료 연구 환경에서 사용되고있다. 두 주로 사용 모델은 지질 다당류 (LPS) 및 맹장 결찰과 천자 (CLP)의 외생 관리입니다. 두 모델은 감염에 대한 조절 이상 호스트 응답에 의한 생명을 위협하는 장기 부전으로 정의 패혈증의 급성기를 모방하기 위해 개발, 전 세계적으로 ICU 1, 2, 입학의 주요 원인 중 하나입니다....
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프로토콜
이 프로토콜은 동물 연구를위한 루벤 윤리 심사위원회의 대학에 의해 승인되었다.
정맥 라인 1. 준비
- 빠르게 고온 (> 220 ℃) 참기름 60cm의 microrenathane (MRE) 관의 중간 부분을 침지시켜 정맥 카테터의 팁을 준비한다. 이어서 부드럽게 서로 떨어져 튜브의 단부를 이동시켜 좁은 직경 (외경 (OD) <0.5 mm)을 생성하기 위해 상기 튜브의 중간 부분을 스트레칭.
- 30cm 각 (도 1, 표 1)의 두 부분으로 튜브를 절단 날 메스를 사용한다.
- 폴리에틸렌 PE50 커넥터를 사용하는 폴리에틸렌 튜브로 MRE PE10 튜브를 연결하고, 상기 스위블의 하단 부분이 PE10 튜브를 연결한다. PE10 튜브 스위블의 상부를 연결하고,도 1에 따라 PE50 커넥터 튜브와 스터브 루어 바늘이 연결한다.
- 적용 강력한 빠른 ACTI모든 연결에 아교 접착 겨 공기로 세척하여 누설 테스트 카테터. 가스는 사용하기 전에 카테터를 소독.
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결과
상술 한 바와 같이 C57BL / 6 마우스는 중환자 하였다. 우리는 두 시점까지 후 CLP 생존율을 평가하기 위해 두 가지 실험을 수행 하였다 : 생존 7 일 (N = 22)까지 5 일 (N = 15)를 생존 후 CLP까지. 두 실험의 생존 곡선은 실험 장치의 재현성을 나타내는 (제 5 일까지 비교) 차이가 없었다. 비 생존 동물로 인해 인명 엔드 포인트에 죽음을 발견하거나 안락사되었다. 3 일 후, 항생제의 대정 jugularis의 정맥 카테터를 통한 유체 소생 총 정맥 영양과 조합 맹장 50 %의 결찰, 설명한 바와 같이, 중요한 질환 후 1 일 후에 13 % 치사율 결과, 24 % 사망률 중요한 질병, 27 - 중요한 질병 5 일 후에 31 %의 사망률과 중요한 질병 7 일 후 36 %. 열량 있었던 건강 쌍 먹인 마우스는 매우의 영양 섭취에 한정병 마우스는 어떤 사망률을 보이지 않았다.
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토론
우리는 유체, 마약과 영양 관리를위한 중심 정맥 라인의 사용과 패혈증을 유발하는 맹장 결찰 및 천공 방법을 결합하여, 중요한 질병의보다 임상 적 마우스 모델을 개발했다. 이 실험 장치는 재현, 이에 인간의 임상 상황 (1)을 흉내 낸, 안정적인 사망률에 중요한 질병 및 결과의 연장 상을 연구 할 수 있습니다.
맹장 결찰 및 천공 광범위 패혈증 6, 7의 주요 기능을 재현 급성 중요한 질병의 동물 모델로 인식되고있다. 그러나, 급성 중요한 질병의 모델은 해결되지 않은 여러 장기 부전, 근육 쇠약, 내분비 및 주요 질병의 연장 단계의 전형적인 대사 변화에 대한 연구를 허용하지 않습니다. 또한,이 모델 전임상 연구 결과는 종종 translat하는 데 실패8,
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공개 사항
저자는 공개할 것이 없습니다.
감사의 글
GVdB는 루벤 대학교(KU Leuven)를 통해 플랑드르 정부가 자금을 지원하는 메투살렘 프로그램(METH08/07)으로부터 장기 구조 연구 지원을 받고 있으며, 유럽 연합 7차 프레임워크 프로그램의 아이디어 프로그램으로부터 유럽 연구 위원회 고급 보조금 AdvG-2012-321670을 보유하고 있습니다. SET는 FWO(Research Foundation-Flanders) 연구 보조 펠로우십을 받았습니다.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 부프레노르핀 | 에쿠파르 | 베터지식 0.3 mg/mL | |
| C57BL/6 | Janvier labs | C57BL/6JRj | |
| 콜로이드 | Fresenius Kabi | Volulyte 6% | |
| crystalloids | Baxter | Plasmalyte a viaflo | |
| Ethilon 3.0 | Ethicon | F3211 | |
| Imipenem | MSD | Tienam 500 주입 유체용 mg 분말 | |
| Isoflurane | Eurovet | Iso-vet | |
| 케타민 | Eurovet | Nimatek 100 mg/mL | |
| LocTite Super glue3 모든 플라스틱 | Rectavit | 119818 | |
| Mersilk 3.0 | Ethicon | L192 | |
| Mersilk 5.0 | Ethicon | F682 | |
| Microrenathane .025" O.D. x .012" I.D. | Bioseb | MRE-025 | |
| 올리멜 N7E | Baxter | ||
| PE10 - 폴리에틸렌 .011" x .024" | Instech Solomon | BTPE-10 | |
| PE-50 튜빙 .023" x.038" | Instech Solomon | BTPE-50 | |
| 설치류 회전 20 G | Bioseb | RS-20G | |
| 로피바카&이울; ne | Astrazenica | Naropin 2 mg/mL | |
| 자일라진 | VMD | 자일라진 염산염 2% |
참고문헌
- Angus, D. C., van der Poll, T. Severe sepsis and septic shock. N Engl J Med. 369 (9), 840-851 (2013).
- Singer, M., et al. The Third International Consensus Definitions for Sepsis and Septic Shock (Sepsis-3). JAMA. 315 (8), 801-810 (2016).
- Remick, D. G., Newcomb, D. E., Bolgos, G. L., Call, D. R.
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재인쇄 및 허가
